Milieux nutritifs pour la culture des gonocoques. Milieu nutritif pour l'isolement et la culture des gonocoques. Culture pour la gonorrhée oculaire.
Cette gélose additionnée de sang, d'hémoglobine ou d'autres additifs est recommandée pour l'isolement sélectif des gonocoques.
Composé**:** La composition a été vérifiée et ajustée pour répondre aux paramètres requis
Préparation:Mélanger 7,2 g de poudre dans 100 ml d'eau distillée pour préparer un milieu double concentration. Porter à ébullition pour dissoudre complètement les particules. Stériliser en autoclave à 1,1 atm (121°C) pendant 15 minutes. Refroidir à 50°C et ajouter de manière aseptique 100 ml préparés séparément de solution d'hémoglobine stérile à 2 % (FD022) et de supplément GC (FD021). Bien mélanger et verser dans des boîtes de Pétri. Pour conférer des propriétés sélectives, des antibiotiques inclus dans les additifs suivants peuvent être ajoutés au milieu : VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).
Pour préparer la gélose au chocolat, préparez un milieu de concentration normale en remuant 3,6 g de poudre dans 100 ml d'eau distillée. Stériliser, ajouter jusqu'à 5 % (v/v) de sang défibriné stérile et réchauffer le milieu à 80°C pendant 10 minutes.
Principe et évaluation du résultat :Cette gélose additionnée de sang ou d'hémoglobine et d'autres additifs est recommandée pour l'isolement sélectif et la culture de micro-organismes aussi exigeants que les gonocoques et les bactéries Haemophilus influenzae. Johnston a développé une gélose au chocolat sur laquelle la croissance pouvait être obtenue en 24 heures Neisseria gonorrhoeae(1). Plus tard, d'autres auteurs (2) ont amélioré le milieu en introduisant de l'hémoglobine dans sa composition.
La gélose contient une peptone spéciale - une source de nutriments pour les micro-organismes. L'amidon aide à neutraliser les substances toxiques produites par Neisseria et les phosphates neutralisent le changement de pH résultant de la formation d'amines, qui peut également affecter la croissance et la viabilité des micro-organismes. L'hémoglobine sert de source de facteur X pour les bactéries hémophiles. Un autre additif enrichit le milieu en facteur V (NAD, niconinamide adénine dinucléotide), nécessaire à Haemophilus influenzae, ainsi qu'en acides aminés, vitamines, ions fer, etc., qui stimule la croissance de Neisseria pathogène.
N'utilisez pas de cotons-tiges pour collecter le matériau. Le semis est effectué immédiatement après la collecte du matériel. Il faut le faire de manière à ce qu'il y ait des zones de croissance dense et clairsemée. L'inoculation est incubée à 37°C dans une atmosphère contenant 5 à 10 % de dioxyde de carbone et 70 % d'humidité. Toutes les colonies suspectes doivent être testées à l'aide de tests biochimiques et/ou sérologiques.
Contrôle qualité : Aspect poudre :Poudre jaune clair homogène et fluide.
Densité du support fini :Un milieu est formé correspondant en densité à un gel d'agar à 1,0 %.
Couleur et transparence du support fini :La base du médium est de couleur jaune clair, transparente ou légèrement opalescente. Une fois l'hémoglobine ajoutée, le milieu devient brun chocolat et opaque si un gel se forme dans les boîtes de Pétri.
Acidité du milieu :À 25°C, la solution aqueuse (3,6 % p/v) a un pH de 7,2 ± 0,2.
Biens culturels :Caractéristiques de croissance de la souche de référence après 40-48 heures à 35-37°C sur gélose chocolat préparée sur cette base, en présence d'une atmosphère de 5-10% de dioxyde de carbone et 70% d'humidité.
Les méthodes de laboratoire sont largement utilisées dans le diagnostic des maladies sexuellement transmissibles de l'appareil génito-urinaire : gonorrhée, syphilis, trichomonase, etc. La présence de la maladie nécessite des mesures pour identifier la cause de l'infection.
Le milieu nutritif SVG est destiné à l’isolement et à la culture de gonocoques lors de l’étude du matériel provenant d’un patient. Chaque kit est conçu pour préparer 110 ml de milieu gonococcique, prêt à l'emploi.
Définir le contenuLe kit permettant d'obtenir le milieu nutritif doit être conservé à une température de 2 à 8 °C pendant 12 mois maximum. Le milieu nutritif solide peut être conservé dans des tubes à essai ou des boîtes de Pétri pendant 7 jours maximum. Le kit de préparation du milieu nutritif comprend :
- base : agar, extrait de levure, peptone, amidon, sels ;
- additif sélectif : coenzymes, lysat érythrocytaire, antifongiques, antibiotiques, sucres ;
- instructions d'utilisation du kit.
La technique comprend plusieurs étapes dont chacune doit se dérouler conformément à certaines exigences. À la fin de toutes les étapes du diagnostic de la maladie en utilisant la méthode de culture de l'agent pathogène sur milieu gonococcique, les résultats sont enregistrés après 24 heures, 48 heures et 72 heures. Dans la gonorrhée aiguë, la croissance du gonocoque est observée le premier jour, dans la gonorrhée chronique - jusqu'à 72 heures.
La préparation d'une solution de la base moyenne pour le diagnostic culturel s'effectue en versant la base dans un récipient contenant de l'eau distillée (100 ml) pour un gonflement ultérieur. La suspension résultante est placée dans un bain-marie et agitée périodiquement jusqu'à dissolution complète de la base, puis la solution est bouillie pendant 2 minutes. Une solution de l'additif sélectif est préparée en la dissolvant dans de l'eau distillée (10 ml) sous agitation.
Un milieu nutritif prêt à l'emploi est formé en ajoutant une solution d'un additif sélectif à une solution de base. Le milieu obtenu est versé dans des boîtes de Pétri stériles. Avant de réaliser l'étude, le milieu gonococcique doit être conservé pendant une heure à une température de 37 °C. Ensuite, le matériel est inoculé conformément à l'arrêté du ministère de la Santé « Sur l'unification des méthodes de recherche microbiologique (bactériologique) utilisées dans les laboratoires de diagnostic clinique des établissements médicaux ».
Prix sur demande
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Fabricant : Institut Pasteur de Recherches en Epidémiologie et Microbiologie
Pays Russie
Unité Mesures : définir
Type d'emballage : boîte en carton
Code de fournisseur:
Description
Un ensemble de réactifs pour isoler les gonocoques par méthode culturelle dans l'étude du matériel clinique provenant de patients atteints de maladies inflammatoires du système génito-urinaire. Conçu pour préparer 110 ml de milieu nutritif dense, prêt à l'emploi
Objectif fonctionnel
Les composants du kit SVG offrent des conditions optimales pour la croissance de Neisseria gonorrhoeae dans les quantités nécessaires pour former des colonies visibles, et l'additif sélectif inhibe la croissance des protozoaires, des champignons et de la plupart des autres flores associées potentiellement contenues dans l'échantillon.
La technique comprend plusieurs étapes dont chacune doit se dérouler conformément à certaines exigences. À la fin de toutes les étapes du diagnostic de la maladie en utilisant la méthode de culture de l'agent pathogène dans un milieu gonococcique, un enregistrement visuel des résultats est effectué après 18 à 24 heures, 48 et 72 heures. Des colonies rondes gris clair et légèrement troubles, typiques des gonocoques, sont détectées. Dans la gonorrhée aiguë, la croissance du gonocoque est observée le premier jour, dans la gonorrhée chronique - jusqu'à 72 heures. Le résultat est considéré comme négatif s'il n'y a pas de croissance après 7 jours d'incubation
Définir le contenu
1. Base moyenne nutritive, sèche – 4,1 g x 1 bouteille ;
agar, extrait de levure, peptone, amidon, sels ;
aspect : poudre hygroscopique de couleur jaune clair ;
2. Additif sélectif, lyophilisé - 1 flacon ;
coenzymes, lysat érythrocytaire, antifongiques, antibiotiques, sucres ;
aspect : lyophilisat de couleur beige rosé.
Le milieu préparé est transparent, de couleur jaune clair, avec une légère opalescence ; un léger sédiment est autorisé.
pH 7,2-7,4
Formulaire d'autorisation : dans une boîte en carton accompagné d'un mode d'emploi.
Conditions de stockage : à une température de +2...8°C pendant 12 mois maximum, le stockage à des températures allant jusqu'à +25°C pendant 2 semaines maximum est autorisé.
Le milieu nutritif préparé peut être conservé dans des tubes à essai ou des boîtes de Pétri pendant 7 jours maximum.
Inscrit à Roszdravnadzor
Neisseria gonorrhoeae appartient à la famille des Neisseriaceae, genre Neisseria. Les gonocoques ont été découverts par Neisser en 1879 et toute la famille porte son nom.
Morphologie. Les gonocoques sont des diplocoques constitués de deux coques en forme de haricot concaves l'une par rapport à l'autre (rappelant les grains de café). La taille des gonocoques est de 1,2 à 1,3 × 0,7 à 0,8 microns. Elles sont polymorphes ; à côté des plus grandes, il existe de très petites bactéries en forme de L de forme irrégulière. Les gonocoques sont immobiles et ne sporulent pas. Une substance en forme de capsule se trouve dans le matériel pathologique (pus). Gram négatif. Sous l'influence de drogues et d'autres substances, ils évoluent rapidement : des formes à Gram positif apparaissent. Dans le matériel pathologique, ils sont localisés au niveau intracellulaire (dans un leucocyte), mais peuvent se trouver à l'extérieur de la cellule. On les retrouve sous forme de coques individuelles (voir Fig. 4).
Cultivation. Les gonocoques sont des aérobies. Très exigeant en milieux nutritifs. Ils poussent sur des milieux contenant des protéines natives (humaines) - sang, sérum, à une température de 37°C et un pH de 7,2-7,4. Le support doit être fraîchement préparé et humide. Le semis doit être effectué immédiatement après la prise du matériel. Sur milieu sérique, les gonocoques forment de petites colonies de 1 à 2 mm, transparentes, brillantes aux bords lisses, ressemblant à des gouttes de rosée. Il n'y a pas d'hémolyse dans le milieu sanguin. Dans le bouillon de lactosérum, ils donnent une légère turbidité et un film qui se dépose au fond du tube à essai. Si la croissance est mauvaise après 24 heures, les cultures sont laissées dans le thermostat pendant le deuxième jour.
Propriétés enzymatiques. Les propriétés saccharolytiques sont faiblement exprimées. Les gonocoques ne décomposent qu'un seul sucre, le glucose, produisant de l'acide. Ils n'ont pas de propriétés protéolytiques.
Formation de toxines. La paroi cellulaire des gonocoques contient une substance toxique - le lipopolysaccharide (peu étudié).
Structure antigénique. La structure antigénique est hétérogène et change facilement sous l'influence de facteurs environnementaux. Il n'existe pas de division généralement acceptée des gonocoques en sérovars et sérotypes.
Résistance aux facteurs environnementaux. Dans le milieu extérieur, les gonocoques ne sont pas très stables. A une température de 56-60° C, ils meurent. A une température de 40°C, leur viabilité diminue fortement. Les basses températures et le séchage les détruisent rapidement. Mais ils restent dans le pus jusqu'à 24 heures. Les solutions désinfectantes - solution de phénol à 1%, chlorure mercurique 1: 1000 tuent les gonocoques en quelques minutes. Les gonocoques sont particulièrement sensibles aux sels d'argent : une solution à 1 % de nitrate d'argent les tue immédiatement. Les rayons UV les tuent en quelques minutes.
Susceptibilité animale. Les animaux ne sont pas sensibles aux gonocoques. Cependant, l’injection intrapéritonéale de toxine gonococcique à des souris blanches provoque leur mort.
Sources d'infection. Une personne atteinte de gonorrhée.
Voies de transmission. Contact domestique (sexuel), moins souvent via des objets contaminés (serviette, éponges, etc.).
Maladies chez l'homme. Gonorrhée et blénorrhée.
Pathogénèse. L’hôte naturel des gonocoques est une personne malade. Les gonocoques pénètrent à travers les muqueuses de l'urètre (chez la femme, l'urètre et le col de l'utérus). Le facteur de pathogénicité des gonocoques est la présence de pili qui, se connectant aux microvillosités de l'épithélium cylindrique, facilitent la pénétration du gonocoque dans la cellule épithéliale, provoquant un processus inflammatoire aigu dans la membrane muqueuse.
Cliniquement, la gonorrhée se manifeste par des douleurs lors de la miction, un écoulement de pus de l'urètre et du vagin. La maladie est aiguë, mais elle devient parfois chronique. Les gonocoques peuvent provoquer une conjonctivite gonorrhéique - blénorrhée (inflammation purulente de la membrane muqueuse des yeux chez le nouveau-né). Les gonocoques pénètrent rarement de l'urètre vers d'autres organes, mais ils peuvent parfois provoquer de l'arthrite, une endocardite, etc.
Immunité. Il n’existe pas de résistance naturelle aux gonocoques. La maladie transférée ne crée pas non plus d'immunité. La phagocytose observée est incomplète.
La prévention. Éducation à la santé. Augmenter le niveau culturel et hygiénique. Il n'y a pas de prévention spécifique. Pour prévenir la blénorrhée, les enfants doivent recevoir une injection dans le sac conjonctival immédiatement après la naissance avec 1 à 2 gouttes d'une solution d'albucide à 30 %.
Traitement . Antibiotiques (pénicilline, bicilline, streptomycine, etc.). Des médicaments sulfamides sont également utilisés. Pour la forme chronique, le vaccin gonococcique est utilisé.
Questions de contrôle1. Décrire les propriétés morphologiques des gonocoques.
2. Quelle est l’activité enzymatique et la production de toxines des gonocoques ?
3. Quelle est la résistance des gonocoques. À quel médicament les gonocoques sont-ils particulièrement sensibles ?
4. Quelles maladies sont causées par les gonocoques et leur pathogenèse.
Examen microbiologiqueObjectif de l'étude : identification des gonocoques et des anticorps antigonococciques.
Matériel pour la recherche
1. Écoulement de la muqueuse urétrale chez l'homme.
2. Écoulement de la membrane muqueuse de l'urètre et du col de l'utérus chez la femme.
3. Écoulement purulent des yeux.
4. Du sang pour le sérum.
Note. Pour l'examen bactérioscopique et bactériologique, le matériel est prélevé : 1) avant le début du traitement antibiotique : 2) au plus tôt 10 jours après la fin du traitement antibiotique ; 3) au plus tôt 2 heures après la dernière miction ; 4) au plus tôt 2 heures après la douche.
Méthodes de recherche fondamentales
1. Microscopique (principalement utilisé pour les formes aiguës).
2. Microbiologique.
3. Sérologique.
Avancement de l'étude
Deuxième journée d'étude
Sortez les récoltes du thermostat et inspectez-les. Étudier les colonies. Ils font des frottis. En cas de présence suspecte de diplocoques à Gram négatif, les colonies sont repiquées sur un milieu incliné dans des tubes à essai (le milieu doit être fraîchement préparé et contenir une quantité suffisante de condensat) et testées pour l'oxydase. Pour ce faire, une goutte d'une solution de diméthylparaphénylènediamine à 1% est appliquée sur la colonie à l'aide d'une pipette ; les colonies changent de couleur du brun foncé au noir.
Troisième jour d'étude
Les cultures sont sorties du thermostat, des frottis sont réalisés à partir de la gélose inclinée, colorés au Gram et examinés au microscope. Inoculer sur milieu Hiss (lactose, glucose, mannitol et maltose). Ces glucides doivent contenir 30 % de sérum sanguin. Les tubes à essai inoculés sont placés dans un thermostat.
Quatrième jour de recherche
Retirez les tubes du thermostat ; s’il n’y a pas de croissance, laissez-les dans le thermostat pendant encore 1 à 2 jours. S'il y a croissance, les résultats sont pris en compte (tableau 28).
Diagnostic sérologique
Troisième semaine de maladie. Au cours de l’évolution chronique de la maladie et dans les cas douteux, la RSC est réalisée à partir du sérum du patient (voir chapitre 12). Une culture tuée de gonocoques, préparée dans des conditions industrielles, est utilisée comme antigène. Vous pouvez utiliser la réaction d'hémagglutination indirecte (voir chapitre 12).
Questions de contrôle
1. Quel matériel est utilisé pour identifier les gonocoques et comment est-il obtenu ?
2. Combien de temps après la miction (ou les douches vaginales chez la femme) le matériel peut-il être prélevé à des fins de recherche ?
3. Quelle méthode de recherche est la principale pour la forme aiguë et laquelle pour la forme chronique de la gonorrhée ?
4. Quand et quel test sérologique est réalisé en cas de suspicion de gonorrhée ?
5. De quels micro-organismes doivent-ils différencier les gonocoques ?
Obtenez les médicaments auprès de votre professeur. Étudiez-le et dessinez les gonocoques situés à l’intérieur et à l’extérieur du leucocyte à l’aide de la coloration de Gram.
Média culturel
Jaune moyen. A 100 ml de MPA de viande de lapin, ajoutez 15 ml de jaune (œuf de poule frais), 6 ml d'indicateur rouge de phénol, 1,5 ml de sucre dissous dans 1 ml d'eau distillée stérile.
Milieu nutritif ascite-agar. Au filtrat du bouillon préparé à partir de viande de lapin, ajouter 2% d'agar, 1% de peptone et 0,5% de chlorure de sodium. Chauffer jusqu'à ce que la gélose se dissolve, régler le pH entre 7,4 et 7,5 et alcaliniser avec de l'hydroxyde de sodium à 20 %. Le milieu est porté à ébullition, filtré, versé dans des flacons stériles et stérilisé en autoclave pendant 15 minutes à 115°C.
Recettes pour milieux de culture sans ascite (MPA pH 7,4-7,5).
1) eau de viande de viande de lapin ou de cœur de bœuf - 100 ml
hydrolysat de caséine - 2 ml
autolysat de levure - 2 ml
sérum sanguin de bovin - 20 ml
2) eau de viande de viande de lapin ou de cœur de bœuf - 100 ml
Solution à 5% d'hémohydrolysat - 2 ml
autolysat de levure - 2 ml
sérum de bovin - 20 ml
3) eau de viande de viande de lapin ou de cœur de bœuf - 100 ml
jaune d'oeuf de poule - 10 ml
sérum sanguin de bovin - 20 ml
La croissance des gonocoques sur ces supports est abondante. Les colonies de gonocoques peuvent être détectées à l'aide d'un test à l'oxydase, dans lequel elles deviennent rouges puis noires.
L'efficacité de la méthode de recherche bactériologique dans
est largement déterminé par la qualité du milieu nutritif. DANS
Dans notre pays, deux types sont les plus largement testés et utilisés
milieux nutritifs : milieux nutritifs ascite-agar et milieux nutritifs sans ascite.
La base des deux milieux est la gélose pentone à la viande (MPA) provenant de la viande.
lapins ou cœurs de bœuf frais. Méthode de préparation
est comme suit. La viande de lapin est débarrassée de la graisse et
tendons, passés au hachoir à viande ou hachés au couteau,
pesé, rempli d'un double volume d'eau du robinet et dans un tel
La forme est laissée au réfrigérateur à 4°C pendant une journée pour l'extraction.
Ensuite, la masse est portée à ébullition, bouillie pendant 10 minutes, refroidie et
filtrer sur une étamine. Au filtrat ajouter 2% d'agar-agar, 1%
peptone et 0,5% de chlorure de sodium, chauffer jusqu'à dissolution de l'agar-agar
et réglez le pH = 7,5-7,6 (l'alcalinisation est de 20 %
solution d'hydroxide de sodium). Porter le milieu à ébullition, filtrer
à travers un filtre en gaze de coton, versé dans des flacons stériles ou
flacons et stérilisés en autoclave pendant 15-20 minutes à 0,5 atmosphère
manomètre (112®).
La technique de préparation du MPA à partir de cœurs de bovins frais est la même que celle
il suffit de faire bouillir la masse de cœurs écrasés dans l'eau
produire 20 minutes au lieu de 10.
Il est possible de préparer la base du milieu nutritif sans peptone.
Dans ce cas, ils utilisent la méthode ci-dessus pour préparer le MPA, mais
la peptone est exclue de sa composition, la viande de lapin hachée est bouillie
5 minutes au lieu de 10 et stériliser le milieu en autoclave pendant 10
minutes à 0,8 atmosphère sur le manomètre (117®).
Gélose ascite
Le liquide d'ascite doit être prélevé chez les patients présentant
ascite causée par une insuffisance cardiaque, et
produit par un trocart dans un flacon stérile et ajouter 5 %
chloroforme pour l'anesthésie. Pendant 10 jours, le liquide est mélangé à
chloroforme en faisant tourner la bouteille, puis en la laissant à
température ambiante jusqu'à ce que le chloroforme se dépose complètement au fond de la bouteille
et éliminer le liquide. Après cela, si nécessaire, transparent
le liquide d'ascite est versé dans des flacons stériles de 50 ml avec
des tampons de coton et quotidiennement pendant 3 jours, ils sont placés dans
bain-marie à une température de 56°C pendant 1 heure pour évaporer le chloroforme
à travers un tampon en coton. Après avoir vérifié le liquide d'ascite pour
stérilité, il peut être utilisé pour l'enrichissement
milieu nutritif pour isoler les gonocoques à une concentration de 1/3 et 1/4
volume du milieu, qui est déterminé expérimentalement.
Recettes pour milieux de culture sans ascite
1. MPA issu de viande de lapin ou de cœurs de bovins frais
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, hydrolysat de caséine pour voie parentérale
nutrition protéique - 2 ml, autolysat de levure - 2 ml, lactosérum
sang de bovin - 20 ml (milieu KDS-1).
2. MPA issu de viande de lapin ou de cœurs de bovins frais
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, solution d'hémohydrolysat à 5% - 2 ml,
autolysat de levure - 2 ml, sérum sanguin bovin
bovins - 20 ml (milieu GDS-2).
3. MPA issu de viande de lapin ou de cœurs de bovins frais
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, milieu 199 pour cultures tissulaires sans
antibiotiques - 20 ml, autolysat de levure - 2 ml, sérum sanguin
bovins - 20 ml (milieu 199-SDS).
4. MPA issu de viande de lapin ou de cœurs de bovins frais
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, jaune d'œuf de poule frais - 10 ml,
sérum sanguin de bovin - 20 ml (milieu JS).
Le jaune d'œuf est obtenu stérilement à partir d'œufs de poule diététiques
immédiatement avant de préparer le milieu. Pour ça,
Après avoir été prétraitée à l'alcool, la coque est ouverte avec un stérilet
pince à épiler et versez le contenu de l’œuf dans un entonnoir stérile. Après
Une fois le blanc écoulé, le jaune restant dans l'entonnoir est transféré dans
des récipients stériles et une pipette doseuse prennent le
production de volume de milieu nutritif de jaune.
La préparation de l'autolysat de levure est la suivante.
La levure de boulangerie est broyée et placée dans une bouteille plus grande que
le volume de levure prélevé est de 4 à 5 fois et laissé en autolyse pendant deux
jours dans une étuve ou un thermostat à 60°C. Puis épais
la masse brune est diluée avec un triple volume d'eau tiède du robinet
eau, bien mélanger et centrifuger deux fois pendant 10 minutes à
1000 tr/min (jusqu'à ce que le liquide soit clair). Surnageant
le liquide est égoutté, on y ajoute 0,5% de chlorure de sodium, ajusté
pH à 7,4-7,5 et autoclave pendant 30 minutes à 1 atmosphère
manomètre (120°). Conserver en petits paquets au réfrigérateur à
L'autolysat de levure peut être remplacé par une solution à 1,5 %
extrait de levure alimentaire (EKD) dans la même quantité (2 ml) 1,5%
La solution EKD est préparée en laboratoire à partir d'EKD sec en la dissolvant dans
eau distillée stérile. Cuit de cette façon
l'extrait liquide est versé dans des tubes stériles et stérilisé dans
autoclave à 0,5 atmosphère sur le manomètre pendant 20 minutes.
Dans tous les milieux nutritifs ci-dessus, le sérum sanguin
le bétail peut être remplacé par des indigènes normaux
sérum pour milieux de culture bactériologique, qui
est le même sérum, mais avec l'ajout d'un conservateur.
Préparation du milieu enrichi
Le MPA, situé dans une bouteille ou un flacon, est fondu dans l'eau
bain, laisser refroidir à 56-58° et y ajouter les ingrédients
ratios spécifiés plus tôt dans les recettes. Enrichi en MPA 3-3.5
ml est versé dans des tubes stériles, le milieu est tondu et humidifié
0,5 ml de bouillon peptoné de viande stérile ou isotonique
solution de chlorure de sodium après durcissement. Pour chèque
Pour garantir la stérilité, le milieu est placé dans un thermostat à 35-37°C par jour.
Tous les milieux sans ascite ci-dessus, à l'exception des milieux ovules, sont transparents,
Il est facile d’y différencier des colonies de micro-organismes. Mercredi,
enrichi en œuf, il est trouble, il est jaune, cultivé sur
Ses colonies, notamment les gonocoques, sont peu distinguables. Cependant, la croissance
le gonocoque est abondant sur ce milieu et ses colonies peuvent facilement être
découvert en traitant la croissance avec une solution à 1 %
diméthylparaphénylènediamine ou autre réactif oxydase,
qui colore les colonies de gonocoques en rouge, bien
contrastant avec le fond jaune de l'environnement. Utilisation du jaune
environnements sans traiter la croissance des micro-organismes avec un réactif oxydase n'est pas
La qualité de chaque nouvelle série de milieu nutritif de laboratoire
la production doit être contrôlée en semant dessus
matériel pathologique provenant de patients avec examen bactérioscopique
des gonocoques ont été trouvés.
La durée de conservation du MPA au réfrigérateur à 4°C ne doit pas dépasser 1
mois, environnement enrichi - 7 jours.
Étant donné que pour l'environnement ci-dessus, une courte période de temps est possible
stockage, une méthode de production a été développée
milieu nutritif lyophilisé sans ascite, qui est sous
intitulé "Milieu nutritif pour l'isolement des gonocoques, sec"
Disponible en deux flacons : partie I (base moyenne) et partie II
(agents d'enrichissement). Préparer l’environnement de travail dans la première partie
vous devez ajouter 100 ml d'eau distillée stérile et chauffer
au bain-marie à 100° jusqu'à dissolution complète du contenu du flacon
(dans les 30 minutes). Temps supplémentaire pour maintenir le milieu dans l'eau
Il n'est pas nécessaire de prendre un bain, car cela réduit sa qualité. La deuxième partie comprend
24 ml d'eau distillée stérile (dissolution d'enrichissement
substances se produit immédiatement). Ensuite, si les conditions sont remplies
stérilité, la partie II est transférée dans la partie I, refroidie à 56°C,
mélangé, versé dans des tubes stériles, tondu et
hydrater comme décrit précédemment.
Le milieu sec est préparé à partir de viande de lapin ou de coeurs de bovins,
en plus des substances enrichissantes données dans la recette 1 (milieu KDS-1)
il contient de l'acide orotique à la concentration de 1 µg/ml. Mercredi
de haute qualité, pratique pour une utilisation en bactériologie
laboratoires, parce que pour transformer un environnement sec en environnement de travail, il est nécessaire
uniquement de l'eau distillée stérile.
Utilisation d'un milieu nutritif sans ascite avec ajout de
les antibiotiques et l'acide orotique donnent de bons résultats avec
diagnostics bactériologiques, y compris extragénétiques
gonorrhée : gonorrhée des amygdales et du pharynx, rectum. Antibiotiques
ajouté pour supprimer la croissance des gonocoques qui l'accompagnent
la flore bactérienne, qui augmente l'intensité de la croissance des gonocoques,
facilite la détection de colonies uniques et l'isolement en milieu pur
culture. Ajouter 20,0 U/ml de sulfate de polymyxine M et 6,2 U/ml
le sulfate de ristomycine; au lieu de ce dernier, vous pouvez utiliser
chlorhydrate de lincomycine - 2 mcg/ml. L'acide orotique est injecté dans
composition du milieu nutritif à raison de 1 µg/ml.
Pour ce faire, prélevez un échantillon d'acide orotique 1 mg (1000 μg) et
dilué dans 1,0 ml d'eau distillée stérile (obtenir
solution de travail contenant 1000 mcg qui peut être conservée dans
réfrigérateur pendant 10 jours) et stérilisé au bain-marie 15
minutes, puis prélevez 0,1 ml de la solution obtenue et ajoutez-la à
100 ml de milieu nutritif enrichi. Environnement avec des antibiotiques
doit être utilisé simultanément avec un milieu sans antibiotique
(un tube à essai avec un milieu contenant des antibiotiques, l'autre sans), car
bien que rares, il existe des souches de gonocoques sensibles à
les antibiotiques ci-dessus.
Support de stockage (transport)
Composition du milieu de conservation : 1) 1 litre d'eau distillée,
sans chlore, 30 g d'agar-agar ; 2) 900 ml distillés
eau sans chlore, 2 ml d'acide thioglycolique, 12 ml 1M
solution d'hydroxyde de sodium, 100 ml de solution aqueuse de sodium à 20 %
phosphate monosubstitué, 20 ml de solution de chlorure à 1%
calcium. Le dernier mélange (2) est ajouté au mélange fraîchement préparé
agar (1), ajuster le pH à 7,3-7,4, verser 10 ml de milieu dans
tubes à essai stériles, stérilisés à la vapeur pendant 1 heure.
Des cotons-tiges sur des bâtons ou des tiges en bois
en acier inoxydable d'un diamètre d'environ 2 mm, monté en coton
bouchons, faire bouillir 20 minutes dans du tampon phosphate, pH = 7,4, et
imprégner pendant 24 heures dans une suspension aqueuse à 1% en fine couche
charbon de bois broyé. Après séchage, des cotons-tiges
corrigé, inséré dans des tubes bactériologiques
diamètre approprié (égal au diamètre des tubes à essai avec le milieu) et
Stériliser en autoclave pendant 20 minutes à 1 atmosphère (température
Pour préparer le tampon phosphate, préparez deux solutions : 1
solution - 28,4 g de sodium dissous dans 1 litre d'eau distillée
phosphate disubstitué (0,2 M); 2 solutions - dans 1 l
dissoudre 27,8 g d'acide citrique (0,1 M) dans de l'eau distillée.
Mélanger 181,7 ml de solution 1 et 18,3 ml de solution 2.
Production de cultures à l'aide de milieux de conservation
s'effectue de la manière suivante. Médecin examinant un patient
retire un tampon du tube à essai, l'insère dans le site de la maladie sur
quelques secondes pour le trempage (vous pouvez faire quelques
mouvements dans le sens des aiguilles d'une montre et dans le sens inverse), le retire sans toucher
objets environnants dans un tube à essai avec un milieu de conservation. En haut
À l'aide d'un coton-tige, le tube à essai est fermé par une tétine en caoutchouc. Avant d'envoyer
matériel au laboratoire de bactériologie, les cultures sont conservées à 4°C
au réfrigérateur pendant une période minimale, mais pas plus d'une journée. Simultanément
prélever du matériel pathologique et faire des frottis pour
examen bactérioscopique, qui sont envoyés à
laboratoire avec culture. Au laboratoire de bactériologie
immédiatement après réception des écouvillons contenant du matériel pathologique
retiré du support de stockage et utilisé pour semer en surface
milieu nutritif incliné dans des tubes à essai. Chaque tampon fait
inoculation sur milieu nutritif dans deux tubes à essai. Semis en surface
le milieu nutritif doit être produit dans un mouvement en zigzag
le long de la surface du milieu, en faisant tourner l'écouvillon. Si le diamètre des tubes à essai est
le milieu de conservation et le milieu nutritif sont similaires, vous pouvez utiliser un écouvillon
après inoculation, laisser dans le deuxième tube à essai au contact de
milieu nutritif. Les cultures sont placées dans un thermostat et cultivées à
36-37е dans un dessicateur. Veuillez noter que lors de l'utilisation
environnement de préservation, la croissance des gonocoques peut survenir plus tard que dans
inoculation directe de matériel pathologique sur un élément nutritif
Travailler avec des cultures
La culture des gonocoques peut se faire dans des tubes à essai ou
Des boîtes de Pétri; la première méthode permet des économies importantes
environnement. Pour augmenter le pourcentage d'inoculation des gonocoques, inoculés
les milieux nutritifs sont placés dans un thermostat dans un dessicateur à 20%
réactions entre l'acide sulfurique et le bicarbonate de sodium : dans un dessicateur
d'un volume de 5 litres, placer un verre avec 50 ml d'acide sulfurique à 10%, dans