الوسائط المغذية لنمو المكورات البنية. وسط زراعة لعزل وزراعة التلقيح بالمكورات البنية لمرض السيلان من العين

يوصى باستخدام هذا الأجار المضاف إليه الدم أو الهيموجلوبين أو أي مواد مضافة أخرى للعزل الانتقائي للمكورات البنية.

مُجَمَّع**:

** يتم التحقق من التكوين وتقديمه إلى الامتثال للمعايير الضرورية

طبخ:

علق 7.2 جرام من المسحوق في 100 مل من الماء المقطر لتحضير وسط مزدوج القوة. سخنيها حتى الغليان حتى تذوب الجزيئات تمامًا. تعقيم بالبخار المضغوط عند 1.1 ضغط جوي (121 درجة مئوية) لمدة 15 دقيقة. بارد إلى 50 درجة مئوية وأضف بطريقة معقمة 100 مل من محلول الهيموجلوبين المعقم 2 ٪ (FD022) ومكمل GC (FD021) معقمًا بشكل منفصل. تخلط جيدا وتصب في أطباق بتري. لنقل خصائص انتقائية إلى الوسط ، يمكنك إضافة المضادات الحيوية المدرجة في الإضافات التالية: VNC (FD023) ، VCNT (FD024) ، لينكو T (FD026) ، فانكو (FD028).

لتحضير أجار الشوكولاتة ، يتم تحضير وسط تركيز قياسي بخلط 3.6 جم من المسحوق في 100 مل من الماء المقطر. تعقيم ، أضف ما يصل إلى 5٪ (حجم / حجم) من الدم المعقم منزوع الألياف ، وقم بتسخين الوسط عند 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

مبدأ النتيجة وتقييمها:

يوصى باستخدام هذا الأجار المضاف إليه الدم أو الهيموجلوبين والإضافات الأخرى للعزل الانتقائي وزراعة الكائنات الدقيقة الحساسة مثل المكورات البنية والمستدمية النزلية. طور جونستون آجار الشوكولاتة الذي يمكن أن ينمو في غضون 24 ساعة. النيسرية البنية(1). في وقت لاحق ، قام مؤلفون آخرون (2) بتحسين الوسط عن طريق إدخال الهيموجلوبين في تركيبته.

يحتوي Agar على ببتون خاص - مصدر للعناصر الغذائية للكائنات الحية الدقيقة. النشا يحيد المواد السامة التي تشكلها النيسرية ، والفوسفات يقاوم تحول الأس الهيدروجيني الناتج عن تكوين الأمينات ، والتي يمكن أن تؤثر أيضًا على نمو الكائنات الحية الدقيقة وحيويتها. يعمل الهيموغلوبين كمصدر للعامل X لبكتيريا الهيموفيليا. مادة مضافة أخرى تثري الوسط بالعامل الخامس (NAD ، nikoninamide adenine dinucleotide) ، الضروري للمستدمية النزلية ، وكذلك الأحماض الأمينية ، والفيتامينات ، وأيونات الحديد ، وما إلى ذلك ، مما يحفز نمو النيسرية المسببة للأمراض.

لا تستخدم أعواد قطنية لتجميع المواد. يتم البذر مباشرة بعد اختيار المادة. يجب أن يتم ذلك حتى توجد مناطق نمو كثيفة ونادرة. يتم تحضين البذر عند 37 درجة مئوية في جو من 5-10٪ ثاني أكسيد الكربون و 70٪ رطوبة. يجب فحص جميع المستعمرات المشبوهة في الاختبارات البيوكيميائية و / أو المصلية.

مراقبة الجودة: مظهر المسحوق:

مسحوق أصفر فاتح متدفق حر متجانس.

كثافة متوسطة منتهية:

يتم تكوين وسيط يتوافق مع كثافة جل أجار 1.0٪.

لون وشفافية الوسيط النهائي:

قاعدة الوسط صفراء فاتحة أو شفافة أو براق قليلاً. بعد إضافة الهيموجلوبين ، يتحول الوسط إلى لون الشوكولاتة البني وغير شفاف إذا تشكل الهلام في أطباق بتري.

حموضة البيئة:

عند 25 درجة مئوية ، يكون للمحلول المائي (3.6٪ وزن / حجم) أس هيدروجيني 7.2 ± 0.2.

الخصائص الثقافية:

خصائص نمو السلالة المرجعية بعد 40-48 ساعة عند 35-37 درجة مئوية على أجار الشوكولاتة المحضر على هذا الأساس ، في وجود 5-10٪ ثاني أكسيد الكربون و 70٪ رطوبة في الغلاف الجوي.

تستخدم الطرق المخبرية على نطاق واسع في تشخيص الأمراض المنقولة جنسياً للجهاز البولي التناسلي: السيلان ، الزهري ، داء المشعرات ، إلخ. يتطلب وجود المرض تدابير لتحديد سبب العدوى.

الوسيط الغذائي "SVG" مخصص لعزل وزراعة المكورات البنية في دراسة المواد من المريض. تم تصميم كل مجموعة لتحضير 110 مل من وسط المكورات البنية الجاهزة للاستخدام.

ضبط التكوين

يجب تخزين مجموعة للحصول على وسط غذائي عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن 12 شهرًا. يمكن تخزين المواد الغذائية الصلبة في أنابيب الاختبار أو أطباق بتري لمدة لا تزيد عن 7 أيام. تشتمل مجموعة تحضير الوسط الغذائي على:

• القاعدة: أجار ، مستخلص الخميرة ، الببتون ، النشا ، الأملاح.
• مادة مضافة انتقائية: الإنزيمات المساعدة ، محللة كرات الدم الحمراء ، مضادات الفطريات ، المضادات الحيوية ، السكريات.
• تعليمات لاستخدام المجموعة.

المنهجية

تتضمن المنهجية عدة مراحل ، يجب تنفيذ كل منها وفقًا لمتطلبات معينة. عند الانتهاء من جميع مراحل تشخيص المرض باستخدام طريقة زراعة العامل الممرض على وسط المكورات البنية ، يتم تسجيل النتائج بعد 24 ساعة و 48 ساعة و 72 ساعة. في مرض السيلان الحاد ، لوحظ نمو المكورات البنية خلال اليوم الأول ، في مرض السيلان المزمن - حتى 72 ساعة.

يتم تحضير المحلول الأساسي للوسيط للتشخيص الثقافي عن طريق صب القاعدة في وعاء يحتوي على ماء مقطر (100 مل) للتورم اللاحق. يتم وضع المعلق الناتج في حمام مائي وتقليب بشكل دوري حتى تذوب القاعدة تمامًا ، ثم يغلي المحلول لمدة دقيقتين. يتم تحضير محلول من مادة مضافة انتقائية بإذابة في ماء مقطر (10 مل) مع التحريك.

يتم تشكيل وسط المغذيات الجاهز عن طريق إضافة محلول مضاف انتقائي إلى محلول القاعدة. يتم سكب الوسط الناتج في أطباق بتري المعقمة. قبل الاختبار ، يجب الحفاظ على بيئة المكورات البنية لمدة ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. ثم يتم زرع المادة وفقًا لأمر وزارة الصحة "بشأن توحيد طرق البحث الميكروبيولوجية (البكتريولوجية) المستخدمة في مختبرات التشخيص الإكلينيكي للمؤسسات الطبية".

السعر عند الطلب

يمكنك إضافة عنصر إلى عربة التسوق الخاصة بك عن طريق تحديد الكمية

المُصنع: FBUN Research Institute of Epidemiology and Microbiology الذي يحمل اسم Pasteur

دولة روسيا

وحدة الوحدة: مجموعة

نوع التعبئة: صندوق من الورق المقوى

رمز البائع:

وصف

مجموعة من الكواشف لعزل المكورات البنية بالطريقة الثقافية في دراسة المواد السريرية من المرضى المصابين بأمراض التهابية في الجهاز البولي التناسلي. مصمم لتحضير 110 مل من وسط المغذيات الصلبة ، جاهز للاستخدام

الغرض الوظيفي

توفر مكونات مجموعة GHS الظروف المثلى لنمو Neisseria gonorrhoeae إلى الكميات المطلوبة لتشكيل مستعمرات مرئية ، وتثبط المادة المضافة الانتقائية نمو البروتوزوا والفطريات ومعظم النباتات الأخرى المرتبطة المحتمل احتوائها في العينة.
تتضمن المنهجية عدة مراحل ، يجب تنفيذ كل منها وفقًا لمتطلبات معينة. عند الانتهاء من جميع مراحل تشخيص المرض باستخدام طريقة زراعة العامل الممرض على وسط المكورات البنية ، يتم عمل سجل مرئي للنتائج بعد 18-24 ساعة و 48 و 72 ساعة. تم الكشف عن المستعمرات الدائرية ذات اللون الرمادي الفاتح والغائمة قليلاً النموذجية للمكورات البنية. في مرض السيلان الحاد ، لوحظ نمو المكورات البنية خلال اليوم الأول ، في مرض السيلان المزمن - حتى 72 ساعة. تعتبر النتيجة سلبية إذا لم يكن هناك نمو بعد 7 أيام من الحضانة.

تحديد

ضبط التكوين
1. أساس المغذيات ، جاف - 4.1 جم × 1 زجاجة ؛
أجار وخلاصة الخميرة والببتون والنشا والأملاح.
المظهر: مسحوق مسترطب أصفر فاتح.
2. مادة مضافة انتقائية ، مجففة بالتجميد - 1 قارورة ؛
الإنزيمات المساعدة ، محللة كرات الدم الحمراء ، مضادات الفطريات ، المضادات الحيوية ، السكريات.
المظهر: lyophilisate بيج وردي.
الوسط المحضر واضح ، أصفر فاتح اللون ، مع بريق طفيف ، يسمح بالرواسب الطفيفة.
الرقم الهيدروجيني 7.2- 7.4
نموذج الإصدار: في صندوق من الورق المقوى مع تعليمات للاستخدام.
شروط التخزين: عند درجة حرارة +2 ... 8 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن 12 شهرًا ، يُسمح بالتخزين في درجة حرارة تصل إلى + 25 درجة مئوية لمدة لا تزيد عن أسبوعين.
يمكن تخزين المواد الغذائية الجاهزة في أنابيب الاختبار أو أطباق بتري لمدة لا تزيد عن 7 أيام.
مسجلة في Roszdravnadzor

Neisseria gonorrhoeae هو عضو في عائلة Neisseriaceae ، جنس Neisseria. تم اكتشاف Gonococci بواسطة Neisser في عام 1879 وتم تسمية العائلة بأكملها باسمه.

علم التشكل المورفولوجيا. Gonococci هي مكورات ثنائية تتكون من نوعين من المكورات على شكل حبة البقول ملقاة بجوانب مقعرة لبعضهما البعض (تذكرنا بحبوب البن). حجم المكورات البنية هو 1.2-1.3 × 0.7-0.8 ميكرومتر. إنها متعددة الأشكال ؛ إلى جانب البكتيريا الكبيرة ، توجد بكتيريا صغيرة جدًا غير منتظمة الشكل على شكل حرف L. المكورات البنية غير متحركة وليس بها جراثيم. توجد مادة تشبه الكبسولة في المادة المرضية (القيح). الجرام سالب. تحت تأثير الأدوية وغيرها من المواد ، فإنها تتغير بسرعة: تظهر أشكال إيجابية الجرام. في المادة المرضية ، توجد داخل الخلايا (في الكريات البيض) ، ولكن قد تكون خارج الخلية. قد يكون في شكل مكورات فردية (انظر الشكل 4).

زراعة. المكورات البنية هي أيروب. متطلبة للغاية على وسائط المغذيات. تنمو على وسائط تحتوي على بروتين أصلي (بشري) - دم ، مصل ، عند درجة حرارة 37 درجة مئوية ودرجة حموضة 7.2-7.4. يجب أن تكون الوسائط طازجة ورطبة. يجب أن يتم البذر مباشرة بعد أخذ المادة. على وسط المصل ، تشكل المكورات البنية مستعمرات صغيرة 1-2 مم ، شفافة ، لامعة مع حواف ناعمة ، تشبه قطرات الندى. على وسط الدم ، لا يتم إعطاء انحلال الدم. في مرق مصل اللبن ، فإنها تعطي تعكرًا طفيفًا وطبقة تستقر في قاع الأنبوب. مع ضعف النمو بعد 24 ساعة ، تُترك المحاصيل في منظم الحرارة لليوم الثاني.

الخصائص الأنزيمية. يتم التعبير عن الخصائص المحللة للسكريات بشكل ضعيف. تكسر Gonococci سكرًا واحدًا فقط - الجلوكوز بتكوين الحمض. ليس لديهم خصائص الحالة للبروتين.

تكوين السموم. يوجد في جدار خلية المكورات البنية مادة سامة - عديدات السكاريد الدهنية (تمت دراستها قليلاً).

هيكل مستضد. التركيب المستضدي غير متجانس ويتغير بسهولة تحت تأثير العوامل البيئية. لا يوجد تقسيم مقبول بشكل عام للمكورات البنية إلى أنماط مصلية وأنماط مصلية حتى الآن.

مقاومة العوامل البيئية. في البيئة الخارجية ، المكورات البنية ليست مستقرة جدًا. عند درجة حرارة 56-60 درجة مئوية ، يموتون. عند درجة حرارة 40 درجة مئوية ، تقل صلاحيتها بشكل حاد. درجات الحرارة المنخفضة والجفاف تدمرها بسرعة. لكنها تبقى في القيح لمدة 24 ساعة محاليل مطهرة - محلول 1٪ من الفينول ، مادة تسامي 1: 1000 تقتل المكورات البنية في غضون دقائق قليلة. تعتبر Gonococci حساسة بشكل خاص لأملاح الفضة - فمحلول 1 ٪ من نترات الفضة يدمرها على الفور. تقتلهم الأشعة فوق البنفسجية في غضون دقائق.

حساسية الحيوانات. الحيوانات ليست عرضة للإصابة بالمكورات البنية. ومع ذلك ، فإن إعطاء سموم المكورات البنية داخل الصفاق للفئران البيضاء يؤدي إلى موتها.

مصادر العدوى. شخص مصاب بمرض السيلان.

مسارات الإرسال. الاتصال بالمنزل (الجنسي) ، في كثير من الأحيان من خلال الأشياء الملوثة (منشفة ، إسفنج ، إلخ).

أمراض البشر. السيلان والاسفنج.

طريقة تطور المرض. المضيف الطبيعي للمكورات البنية هو شخص مريض. تخترق المكورات البنية الأغشية المخاطية للإحليل (عند النساء - الإحليل وعنق الرحم). عامل الإمراضية للمكورات البنية هو وجود الشعيرات الدموية فيها ، والتي ترتبط بالميكروفيلي للظهارة الأسطوانية ، وتساهم في تغلغل المكورات البنية في الخلية الظهارية ، مما يتسبب في حدوث عملية التهابية حادة في الغشاء المخاطي.

سريريًا ، يتجلى السيلان في الألم أثناء التبول ، وإفراز القيح من مجرى البول والمهبل. المرض حاد ، لكنه أحيانًا يصبح مزمنًا. يمكن أن تسبب المكورات البنية التهاب الملتحمة السيلاني - السيلان البيني (التهاب صديدي في الغشاء المخاطي للعين عند الأطفال حديثي الولادة). نادرًا ما تنتشر المكورات البنية من مجرى البول إلى الأعضاء الأخرى ، ولكنها في بعض الأحيان يمكن أن تسبب التهاب المفاصل والتهاب الشغاف وما إلى ذلك.

حصانة. لا توجد مقاومة طبيعية للمكورات البنية. المرض المنقول أيضا لا يخلق مناعة. البلعمة المرصودة غير مكتملة.

وقاية. التثقيف الصحي. رفع المستوى الثقافي والصحي. لا يوجد منع محدد. للوقاية من مرض السيلان ، يجب حقن الأطفال بعد الولادة مباشرة في كيس الملتحمة 1-2 قطرات من محلول 30٪ من البوسيد.

علاج . المضادات الحيوية (البنسلين ، البيسيلين ، الستربتومايسين ، إلخ). كما تستخدم أدوية السلفا. في الشكل المزمن ، يتم استخدام لقاح المكورات البنية.

أسئلة التحكم

1. وصف الخصائص المورفولوجية للمكورات البنية.

2. ما هو النشاط الأنزيمي والتكوين السمي للمكورات البنية؟

3. ما هي مقاومة المكورات البنية. ما هو دواء المكورات البنية الحساسة بشكل خاص؟

4. ما هي الأمراض التي تسببها المكورات البنية ومرضها.

البحوث الميكروبيولوجية

الغرض من الدراسة: الكشف عن المكورات البنية والأجسام المضادة للمكورات البنية.

مواد بحثية

1. انفصال الغشاء المخاطي للإحليل عند الرجال.

2. إفرازات الغشاء المخاطي للإحليل وعنق الرحم عند النساء.

3. إفرازات قيحية من العين.

4. الدم للحصول على المصل.

ملحوظة. للفحص الجرثومي والبكتريولوجي ، يتم أخذ المادة: 1) قبل بدء العلاج بالمضادات الحيوية: 2) في موعد لا يتجاوز 10 أيام بعد انتهاء العلاج بالمضادات الحيوية ؛ 3) في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد التبول الأخير ؛ 4) في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد الغسل.

طرق البحث الأساسية

1. مجهري (يستخدم بشكل رئيسي في الأشكال الحادة).

2. علم الأحياء الدقيقة.

3. المصلي.

تقدم البحث

اليوم الثاني من البحث

أخرج المحاصيل من منظم الحرارة واعرضها. دراسة المستعمرات. يصنعون اللطاخات. في حالة وجود مكورات ثنائية سالبة الجرام مشبوهة ، تتم زراعة المستعمرات على وسط مائل في أنابيب الاختبار (يجب تحضير الوسط حديثًا ويحتوي على كمية كافية من المكثفات) ويتم أخذ عينة من الأوكسيداز. للقيام بذلك ، يتم تطبيق قطرة من محلول ثنائي ميثيل بارافينيلين ديامين بنسبة 1 ٪ على المستعمرة باستخدام ماصة ، وتغير المستعمرات لونها من البني الداكن إلى الأسود.

اليوم الثالث من البحث

يتم إخراج المزارع من منظم الحرارة ، ويتم أخذ المسحات من مائل الأجار ، وملطخة بالجرام ويتم فحصها بالميكروسكوب. يتم تلقيحها على وسط Hiss (اللاكتوز والجلوكوز والمانيتول والمالتوز). يجب أن تحتوي هذه الكربوهيدرات على 30٪ من مصل الدم. يتم وضع الأنابيب الملقحة في منظم الحرارة.

اليوم الرابع من البحث

قم بإزالة أنابيب الاختبار من منظم الحرارة ، وفي حالة عدم وجود نمو ، اتركها في منظم الحرارة لمدة 1-2 أيام أخرى. في ظل وجود نمو ، تؤخذ النتائج في الاعتبار (الجدول 28).

التشخيص المصلي

الأسبوع الثالث من المرض. في المسار المزمن للمرض وفي الحالات المشكوك فيها ، يتم وضع RSK مع مصل المريض (انظر الفصل 12). كمستضد ، يتم استخدام مزرعة المكورات البنية المقتولة ، والتي يتم تحضيرها في ظل الظروف الصناعية. يمكنك تطبيق تفاعل التراص الدموي غير المباشر (انظر الفصل 12).

أسئلة التحكم

1. ما هي المادة المستخدمة للكشف عن المكورات البنية وكيف يتم الحصول عليها؟

2. كم من الوقت بعد التبول (أو الغسل عند النساء) يمكن أخذ المواد للبحث؟

3. ما هي طريقة البحث الرئيسية لمرض السيلان الحاد وما هي طريقة علاج السيلان المزمن؟

4. متى وما هو نوع التفاعل المصلي الذي يُعطى لمرض السيلان المشتبه به؟

5. ما هي الكائنات الحية الدقيقة اللازمة للتمييز بين المكورات البنية؟

احصل على الدواء من المعلم. افحصها وارسم المكورات البنية الموجودة داخل وخارج الكريات البيض على صبغة جرام.

الوسائط الغذائية

بيئة صفار البيض. أضف إلى 100 مل من MPA من لحم الأرانب 15 مل من صفار البيض (بيض الدجاج الطازج) ، 6 مل من مؤشر الفينول الأحمر ، 1.5 مل من السكر المذاب في 1 مل من الماء المقطر المعقم.

استسقاء أجار متوسط ​​المغذيات. يتم إضافة 2٪ أجار ، 1٪ ببتون و 0.5٪ كلوريد صوديوم إلى ترشيح المرق المحضر من لحم الأرانب. تسخين حتى يذوب الآجار ، واضبط درجة الحموضة على 7.4-7.5 ، قلونة مع 20٪ هيدروكسيد الصوديوم. يتم إحضار الوسط إلى الغليان ، وتصفيته ، وصبه في قوارير معقمة وتعقيمه في الأوتوكلاف لمدة 15 دقيقة عند 115 درجة مئوية.

وصفات لوسائط المغذيات الاستسقاء (MPA pH 7.4-7.5).

1) ماء اللحم من لحم الأرانب أو قلوب الثور - 100 مل

تحلل الكازين - 2 مل

الخميرة ذاتية التحلل - 2 مل

مصل دم الماشية - 20 مل

2) ماء اللحم من لحم الأرانب أو قلوب الثور - 100 مل

محلول 5 ٪ من هيدروليزات - 2 مل

الخميرة ذاتية التحلل - 2 مل

مصل بقري - 20 مل

3) ماء اللحم من لحم الأرانب أو قلوب الثور - 100 مل

صفار بيض الدجاج - 10 مل

مصل دم الماشية - 20 مل

نمو المكورات البنية على هذه الوسائط وفير. يمكن الكشف عن مستعمرات المكورات البنية عن طريق اختبار أوكسيديز ، والذي يتحول إلى اللون الأحمر إلى الأسود.

فاعلية طريقة البحث البكتريولوجي في

يتحدد بشكل كبير من خلال جودة وسائط المغذيات. في

في بلدنا ، يتم اختبار واستخدام نوعين على نطاق واسع

وسائط المغذيات: وسط مغذيات استسقاء-أجار وغير استسقائي.

تعتمد كلتا الوسيطتين على أجار اللحم البنتون (MPA) من اللحوم

أرانب أو قلوب بقري طازج. طريقة تحضيره

على النحو التالي. يتم تحرير لحم الأرانب من الدهون و

الأوتار ، التي تمر عبر مفرمة اللحم أو تقطع بسكين ،

تزن ، مليئة بضعف حجم ماء الصنبور وهذا

يُترك النموذج في الثلاجة عند 4 درجات لمدة يوم للاستخراج.

ثم يتم تسخين الكتلة حتى الغليان ، وتغلي لمدة 10 دقائق ، وتبريدها و

يتم تصفيتها من خلال القماش القطني. أضف إلى المرشح 2٪ أجار أجار ، 1٪

الببتون و 0.5٪ كلوريد الصوديوم ، يسخن حتى يذوب أجار أجار

وضبط الرقم الهيدروجيني = 7.5-7.6 (تتم القلوية بنسبة 20٪

محلول هيدروكسيد الصوديوم). يتم إحضار الوسط إلى الغليان ، وتصفيته

من خلال مرشح شاش قطني ، تصب في قوارير معقمة أو

القوارير وتعقيمها في الأوتوكلاف لمدة 15-20 دقيقة عند 0.5 جو

مقياس الضغط (112 درجة).

تقنية تحضير MPA من قلوب الأبقار الطازجة هي نفسها

يتبع فقط غليان كتلة من القلوب المكسرة في الماء

تنتج 20 دقيقة بدلا من 10.

من الممكن تحضير أساس وسيط المغذيات بدون الببتون.

في هذه الحالة ، يتم استخدام الطريقة المذكورة أعلاه لإعداد MPA ، ولكن

يتم استبعاد الببتون من تكوينه ، يتم غلي لحم الأرانب المفروم

5 دقائق بدلا من 10 وعقم الوسيط في الأوتوكلاف لمدة 10

دقائق عند 0.8 ضغط جوي على مقياس ضغط (117 درجة).

استسقاء أجار

يجب الحصول على السائل الاستسقائي من المرضى الذين يعانون من

الاستسقاء بسبب قصور القلب ، و

يتم إنتاجه من خلال المبزل في زجاجة معقمة ويضاف إليه 5٪

كلوروفورم للتخدير. لمدة 10 أيام ، يخلط السائل مع

الكلوروفورم بتدوير الزجاجة ، ثم تركه

درجة حرارة الغرفة حتى يستقر الكلوروفورم تمامًا في قاع الزجاجة

وتوضيح السائل. بعد ذلك ، حسب الحاجة ، شفافة

يصب السائل الاستسقائي في قوارير معقمة سعة 50 مل مع

يتم وضع سدادات قطنية يوميًا لمدة 3 أيام

حمام مائي عند 56 درجة لمدة ساعة ليتبخر الكلوروفورم

من خلال سدادة قطنية. بعد فحص السائل الاستسقائي

العقم يمكن استخدامه للتخصيب

وسط غذائي لعزل المكورات البنية بتركيز 1/3 و 1/4

حجم الوسيط الذي يتم تحديده تجريبيا.

وصفات وسائل الإعلام الاستسقائية

1. الآلام والكروب الذهنية من لحم الأرانب أو قلوب الأبقار الطازجة

(рН = 7.4-7.5) - 100 مل ، الكازين المائي للحقن

تغذية البروتين - 2 مل ، الخميرة - 2 مل ، مصل اللبن

دم الماشية - 20 مل (الأربعاء KDS-1).

2. MPA من لحم الأرانب أو قلوب الأبقار الطازجة

(рН = 7.4-7.5) - 100 مل ، 5٪ محلول هيدروليزات - 2 مل ،

الخميرة الذاتية - 2 مل ، مصل الدم البقري

ماشية - 20 مل (متوسط ​​GDS-2).

3. MPA من لحم الأرانب أو قلوب الأبقار الطازجة

(рН = 7.4-7.5) - 100 مل ، متوسط ​​199 لمزارع الأنسجة بدون

المضادات الحيوية - 20 مل ، الخميرة الذاتية - 2 مل ، مصل الدم

الماشية - 20 مل (متوسط ​​199-SDS).

4. MPA من لحم الأرانب أو قلوب الأبقار الطازجة

(рН = 7.4-7.5) - 100 مل ، صفار بيض دجاج طازج - 10 مل ،

مصل دم الماشية - 20 مل (الأربعاء ZhS).

يتم الحصول على صفار البيض معقم من بيض الدجاج الغذائي.

مباشرة قبل الإعداد المتوسط. لهذا،

يتم معالجة القشرة مسبقًا بالكحول ، ويتم فتحها بعقم

بالملاقط وتسكب محتويات البيضة في قمع معقم. بعد

بعد تدفق البروتين ، يتم نقل الصفار المتبقي في القمع إلى

يتم أخذ أطباق معقمة وماصة قياس ضرورية

إنتاج متوسط ​​حجم المغذيات من صفار البيض.

يتم تحضير الخميرة تلقائيًا على النحو التالي.

يتم سحق خميرة الخباز ووضعها في زجاجة تزيد

كمية الخميرة المأخوذة من 4 إلى 5 مرات ، وتترك للتحلل الذاتي لمدة سنتين

أيام في خزانة تجفيف أو ترموستات عند 60 درجة. ثم سميكة

يتم تخفيف الكتلة البنية بحجم ثلاثي من ماء الصنبور الدافئ

يخلط الماء جيدًا مع جهاز الطرد المركزي مرتين لمدة 10 دقائق في

1000 دورة في الدقيقة (حتى يصبح السائل واضحًا). طاف

يتم تصريف السائل ، يضاف إليه 0.5٪ من كلوريد الصوديوم وتعديله

درجة الحموضة إلى 7.4-7.5 وتعقيمها لمدة 30 دقيقة في 1 جو من أجل

مقياس ضغط الدم (120 درجة). تخزينها في حاويات صغيرة في الثلاجة

يمكن استبدال التحلل التلقائي للخميرة بمحلول 1.5٪

مستخلص خميرة العلف (EKD) بنفس الكمية (2 مل) 1.5٪

يتم تحضير محلول EPC في المختبر من EPC الجاف عن طريق إذابته في

ماء مقطر معقم. أعد بهذه الطريقة

يُسكب المستخلص السائل في أنابيب اختبار معقمة ويعقم فيها

الأوتوكلاف عند 0.5 بار لمدة 20 دقيقة.

في جميع المواد الغذائية المذكورة أعلاه ، مصل الدم

يمكن استبدال الماشية من قبل مواطن طبيعي

مصل لوسائل المغذيات البكتريولوجية ، والتي

هو نفس المصل ولكن مع إضافة مادة حافظة.

تحضير الوسط المخصب

يتم إذابة MPA ، الموجود في قارورة أو قارورة ، في الماء

حمام ، مبرد إلى 56-58ё وأضف المكونات إليه

النسب المشار إليها في وقت سابق في الوصفات. المخصب مع MPA في 3-3.5

يسكب مل في أنابيب اختبار معقمة ، والوسيط مائل ومبلل

0.5 مل من مرق ببتون اللحم المعقم أو متساوي التوتر

محلول كلوريد الصوديوم بعد أن يصلب. لفحص

من أجل العقم ، يتم وضع الوسيط في منظم حرارة عند 35-37 درجة في اليوم.

جميع الوسائط غير الاستسقائية المذكورة أعلاه ، باستثناء البيض ، شفافة ،

من السهل التفريق بين مستعمرات الكائنات الحية الدقيقة عليها. الأربعاء،

غني بالبيض ، يختلف في التعكر ، فهو أصفر ، ينمو

مستعمراتها ، على وجه الخصوص ، المكورات البنية ، لا يمكن تمييزها بشكل جيد. ومع ذلك ، النمو

تتواجد المكورات البنية بكثرة في هذا الوسط ويمكن أن تكون مستعمراتها بسهولة

تم الكشف عنها بعلاج النمو بمحلول 1٪

ثنائي ميثيل بارافينيلين ديامين أو كاشف أوكسيديز آخر ،

الذي يصبغ مستعمرات المكورات البنية باللون الأحمر

على النقيض من الخلفية الصفراء للوسط. استخدام صفار البيض

وسائط بدون معالجة نمو جرثومي بكاشف أوكسيديز

جودة كل دفعة جديدة من وسط الثقافة المخبرية

يجب فحص الإنتاج عن طريق البذر

مادة مرضية من المرضى الذين يعانون من الجراثيم

تم العثور على المكورات البنية.

يجب ألا يتجاوز العمر الافتراضي لـ MPA في الثلاجة عند 4o 1

شهر ، بيئة غنية - 7 أيام.

نظرًا لحقيقة أنه بالنسبة للبيئة المذكورة أعلاه ، من الممكن توفير فترة زمنية قصيرة

التخزين ، طور طريقة التصنيع

وسط المغذيات الخالي من الاستسقاء المجفف بالتجميد ، والذي هو تحت

بعنوان "مستنبت لعزل المكورات البنية ، جاف".

متوفر في زجاجتين: الجزء الأول (قاعدة متوسطة) والجزء الثاني

(المعززات). لتهيئة بيئة العمل في الجزء الأول

أضف 100 مل من الماء المقطر المعقم والحرارة

في حمام مائي عند 100 درجة حتى تذوب محتويات القارورة تمامًا

(خلال 30 دقيقة). وقت إضافي لتحمل البيئة في الماء

لا ينبغي أن يكون الحمام ، tk. هذا يقلل من جودته. يتضمن الجزء الثاني

24 مل من الماء المقطر المعقم (تذويب التخصيب

المواد تحدث على الفور). بعد ذلك ، تخضع للشروط

العقم ، الجزء الثاني ينتقل إلى الجزء الأول المبرد إلى 56 درجة ،

مختلطة ، تصب في أنابيب اختبار معقمة ، مشطوفة و

ترطيب كما هو موضح سابقا.

يتم تحضير الوسط الجاف من لحم الأرانب أو قلوب الثور ،

بالإضافة إلى تلك المدرجة في الوصفة 1 (متوسط ​​KDS-1) من المواد المخصبة

يحتوي على حمض الأوروتيك بتركيز 1 ميكروغرام / مل. الأربعاء

جودة عالية ومريحة للاستخدام في علم البكتيريا

مختبرات لأن لتحويل البيئة الجافة إلى بيئة عاملة ، فهذا مطلوب

فقط الماء المقطر المعقم.

استخدام مادة مغذية خالية من الاستسقاء مع الإضافة

المضادات الحيوية وحمض الأوروتك يعطي نتائج جيدة مع

التشخيص البكتريولوجي ، بما في ذلك التشخيص خارج الجهاز التناسلي

السيلان: السيلان في اللوزتين والبلعوم والمستقيم. مضادات حيوية

يضاف لمنع نمو المكورات البنية المصاحبة

النباتات البكتيرية ، مما يزيد من معدل نمو المكورات البنية ،

يسهل الكشف عن مستعمراتها المفردة وعزلتها بشكل نقي

ثقافة. أضف 20.0 U / ml polymyxin M كبريتات و 6.2 U / ml

كبريتات الريستومايسين بدلاً من الأخير ، يمكنك استخدام ملفات

لينكومايسين هيدروكلوريد - 2 ميكروغرام / مل. يتم حقن حمض الأوروتيك في

تكوين وسط المغذيات بكمية 1 ميكروغرام / مل.

للقيام بذلك ، خذ عينة من حمض الأوروتيك 1 مجم (1000 ميكروغرام) و

مخفف في 1.0 مل من الماء المقطر المعقم (الحصول

محلول العمل يحتوي على 1000 ميكروغرام والتي يمكن تخزينها

ثلاجة لمدة 10 أيام) ومعقمة في حمام مائي 15

دقائق ، ثم خذ 0.1 مل من المحلول الناتج وأضف إليه

100 مل وسط مغذي غني. البيئة بالمضادات الحيوية

يجب استخدامه في وقت واحد مع وسط خالٍ من المضادات الحيوية

(أنبوب اختبار مع الوسط بالمضادات الحيوية ، والآخر بدونهما) ، لأن

على الرغم من ندرتها ، إلا أن هناك سلالات حساسة من المكورات البنية

المضادات الحيوية المذكورة أعلاه.

وسط التخزين (النقل)

تكوين وسط الحفظ: 1) 1 لتر ماء مقطر ،

خالية من الكلور ، 30 جم من أجار أجار ؛ 2) 900 مل مقطر

ماء خال من الكلور ، 2 مل حمض ثيوجليكوليك ، 12 مل 1 م

محلول هيدروكسيد الصوديوم ، 100 مل من 20٪ محلول صوديوم مائي

فوسفات أحادي الاستبدال ، 20 مل من محلول كلوريد 1٪

الكالسيوم. يضاف الخليط الأخير (2) إلى الخليط الطازج

أجار (1) ، اضبط درجة الحموضة إلى 7.3-7.4 ، صب 10 مل من الوسط

أنابيب اختبار معقمة ، معقمة بالبخار المتدفق لمدة ساعة.

أعواد قطنية على عصي خشبية أو قضبان

الفولاذ المقاوم للصدأ بقطر حوالي 2 مم ، مثبت في محشو

سدادات ، مغلية لمدة 20 دقيقة في محلول الفوسفات ، درجة الحموضة = 7.4 ، و

ينقع لمدة 24 ساعة في محلول مائي 1٪ ناعماً

فحم مطحون. بعد التجفيف ، مسحات قطنية

بشكل صحيح ، أدخلها في أنابيب الاختبار البكتريولوجية

من القطر المناسب (يساوي قطر أنابيب الاختبار بالوسيط) و

معقمة في الأوتوكلاف لمدة 20 دقيقة في جو واحد (درجة حرارة

لتحضير محلول الفوسفات ، يتم تحضير محلولين: 1

المحلول - يذاب 28.4 جم من الصوديوم في 1 لتر من الماء المقطر

الفوسفات غير المستبدلة (0.2 م) ؛ 2 حل - في 1 لتر

الماء المقطر يذوب 27.8 جم من حامض الستريك (0.1 م).

امزج 181.7 مل من المحلول 1 و 18.3 مل من المحلول 2.

إنتاج البذار باستخدام حفظ البيئة

يتم على النحو التالي. يقوم الطبيب بفحص المريض

يزيل السدادة القطنية من أنبوب الاختبار ، ويدخلها في بؤرة المرض

بضع ثوان للنقع (يمكنك عمل عدة

في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة) ، يزيلها دون لمسها

الأشياء المحيطة ، في أنبوب اختبار مع وسط الحفظ. زيادة

سدادة قطنية ، أنبوب الاختبار مغلق بحلمة مطاطية. قبل الشحن

المواد إلى المختبر البكتريولوجي ، يتم حفظ الثقافات في 4

في الثلاجة لمدة لا تقل عن يوم واحد. معًا

أخذ المواد المرضية وعمل مسحات

الفحص الجراثيم ، والتي يتم إرسالها إلى

المختبر مع الثقافة. في المختبر البكتريولوجي

مباشرة بعد تلقي مسحات من المواد المرضية

يتم إزالتها من وسط التخزين ويتم استخدامها للتلقيح على السطح

وسط مغذي مائل في أنابيب الاختبار. كل سدادة قطنية مصنوعة

البذر على وسط مغذي في أنبوبين اختبار. البذر على السطح

يجب عمل وسط المغذيات بحركات متعرجة

على طول سطح الوسط عن طريق تدوير المسحة. إذا كان قطر أنابيب الاختبار

وسط الحفظ ووسط النمو متشابهان ، يمكنك المسح

بعد التلقيح ، اترك أنبوب الاختبار الثاني ملامسًا

وسط المغذيات. توضع المحاصيل في منظم الحرارة وتنمو في

36-37yo في مجفف. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند استخدام

بيئة الحفظ ، قد يحدث نمو المكورات البنية في وقت لاحق من مع

البذر المباشر للمواد المرضية على المغذيات

العمل مع الثقافات

يمكن زراعة المكورات البنية في أنابيب الاختبار أو

أطباق بتري؛ الطريقة الأولى توفر وفورات كبيرة

بيئة. لزيادة نسبة بذر المكورات البنية ، المصنفة

يتم وضع وسائط المغذيات في منظم حرارة في مجفف بنسبة 20٪

التفاعلات بين حامض الكبريتيك وبيكربونات الصوديوم: في مجفف

بحجم 5 لترات ، ضع كوبًا يحتوي على 50 مل من حمض الكبريتيك بنسبة 10 ٪ ، في