Θρεπτικά μέσα για την καλλιέργεια γονόκοκκων. Θρεπτικό μέσο απομόνωσης και καλλιέργειας γονόκοκκου Καλλιέργεια για γονόρροια από το μάτι.
Αυτό το άγαρ με προσθήκη αίματος, αιμοσφαιρίνης ή άλλων πρόσθετων συνιστάται για την επιλεκτική απομόνωση των γονόκοκκων.
Χημική ένωση**:** Η σύνθεση έχει επαληθευτεί και προσαρμοστεί ώστε να πληροί τις απαιτούμενες παραμέτρους
Παρασκευή:Αναμείξτε 7,2 g σκόνης σε 100 ml απεσταγμένου νερού για να παρασκευαστεί ένα μέσο διπλής ισχύος. Ζεσταίνουμε μέχρι να βράσει για να διαλυθούν εντελώς τα σωματίδια. Αποστειρώστε σε αυτόκαυστο σε 1,1 atm (121°C) για 15 λεπτά. Ψύξτε στους 50°C και προσθέστε ασηπτικά 100 ml στείρου διαλύματος αιμοσφαιρίνης 2% (FD022) και συμπλήρωμα GC (FD021). Ανακατεύουμε καλά και αδειάζουμε σε πιάτα Petri. Για να προσδώσουν επιλεκτικές ιδιότητες, τα αντιβιοτικά που περιλαμβάνονται στα ακόλουθα πρόσθετα μπορούν να προστεθούν στο μέσο: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).
Για να παρασκευάσετε το άγαρ σοκολάτας, παρασκευάστε ένα μέσο κανονικής συγκέντρωσης ανακατεύοντας 3,6 g σκόνης σε 100 ml απεσταγμένου νερού. Αποστειρώστε, προσθέστε έως και 5% (v/v) στείρο απινιδωμένο αίμα και θερμάνετε το μέσο στους 80°C για 10 λεπτά.
Αρχή και αξιολόγηση του αποτελέσματος:Αυτό το άγαρ με την προσθήκη αίματος ή αιμοσφαιρίνης και άλλων πρόσθετων συνιστάται για την επιλεκτική απομόνωση και καλλιέργεια τέτοιων απαιτητικών μικροοργανισμών όπως οι γονόκοκκοι και τα βακτήρια Haemophilus influenzae. Ο Johnston ανέπτυξε άγαρ σοκολάτας στο οποίο η ανάπτυξη μπορούσε να επιτευχθεί εντός 24 ωρών Neisseria gonorrhoeae(1). Αργότερα, άλλοι συγγραφείς (2) βελτίωσαν το μέσο εισάγοντας αιμοσφαιρίνη στη σύνθεσή του.
Το άγαρ περιέχει μια ειδική πεπτόνη - μια πηγή θρεπτικών συστατικών για τους μικροοργανισμούς. Το άμυλο βοηθά στην εξουδετέρωση των τοξικών ουσιών που παράγονται από το Neisseria και τα φωσφορικά άλατα εξουδετερώνουν τη μετατόπιση του pH που προκύπτει από το σχηματισμό αμινών, οι οποίες μπορούν επίσης να επηρεάσουν την ανάπτυξη και τη βιωσιμότητα των μικροοργανισμών. Η αιμοσφαιρίνη χρησιμεύει ως πηγή του παράγοντα Χ για τα αιμοφιλικά βακτήρια. Ένα άλλο πρόσθετο εμπλουτίζει το μέσο με παράγοντα V (NAD, niconinamide adenine dinucleotide), απαραίτητο για τον Haemophilus influenzae, καθώς και με αμινοξέα, βιταμίνες, ιόντα σιδήρου κ.λπ., που διεγείρει την ανάπτυξη της παθογόνου neisseria.
Μην χρησιμοποιείτε μπατονέτες για τη συλλογή υλικού. Η σπορά πραγματοποιείται αμέσως μετά τη συλλογή του υλικού. Πρέπει να γίνει έτσι ώστε να υπάρχουν ζώνες πυκνής και αραιής ανάπτυξης. Ο εμβολιασμός επωάζεται στους 37°C σε ατμόσφαιρα 5-10% διοξειδίου του άνθρακα και 70% υγρασίας. Όλες οι ύποπτες αποικίες θα πρέπει να ελέγχονται με βιοχημικές ή/και ορολογικές εξετάσεις.
Ποιοτικός έλεγχος: Εμφάνιση σκόνης:Ομοιογενής, ελεύθερα ρέουσα ανοιχτοκίτρινη σκόνη.
Πυκνότητα τελικού μέσου:Σχηματίζεται ένα μέσο που αντιστοιχεί σε πυκνότητα σε γέλη άγαρ 1,0%.
Χρώμα και διαφάνεια του τελικού μέσου:Η βάση του μέσου είναι ανοιχτού κίτρινου χρώματος, διαφανής ή ελαφρώς ιριδίζουσα. Μετά την προσθήκη της αιμοσφαιρίνης, το μέσο γίνεται σοκολατί και αδιαφανές εάν σχηματιστεί γέλη στα πιάτα Petri.
Οξύτητα του περιβάλλοντος:Στους 25°C, το υδατικό διάλυμα (3,6% β/ο) έχει ρΗ 7,2 ± 0,2.
Πολιτιστικές ιδιότητες:Χαρακτηριστικά ανάπτυξης του στελέχους αναφοράς μετά από 40-48 ώρες στους 35-37°C σε σοκολατένιο άγαρ που παρασκευάστηκε με αυτή τη βάση, παρουσία ατμόσφαιρας 5-10% διοξειδίου του άνθρακα και 70% υγρασίας.
Οι εργαστηριακές μέθοδοι χρησιμοποιούνται ευρέως στη διάγνωση σεξουαλικά μεταδιδόμενων ασθενειών του ουρογεννητικού συστήματος: γονόρροια, σύφιλη, τριχομονάση κ.λπ. Η παρουσία της νόσου απαιτεί μέτρα για τον εντοπισμό της αιτίας της λοίμωξης.
Το θρεπτικό μέσο SVG προορίζεται για την απομόνωση και την καλλιέργεια γονόκοκκων κατά τη μελέτη υλικού από ασθενή. Κάθε κιτ έχει σχεδιαστεί για να παρασκευάζει 110 ml γονοκοκκικού μέσου, έτοιμο για χρήση.
Ορίστε τα περιεχόμεναΤο κιτ για τη λήψη του θρεπτικού μέσου θα πρέπει να φυλάσσεται σε θερμοκρασία 2 - 8 °C για όχι περισσότερο από 12 μήνες. Το στερεό θρεπτικό υλικό μπορεί να αποθηκευτεί σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή τρυβλία Petri για όχι περισσότερο από 7 ημέρες. Το κιτ για την προετοιμασία του θρεπτικού μέσου περιλαμβάνει:
- βάση: άγαρ, εκχύλισμα μαγιάς, πεπτόνη, άμυλο, άλατα.
- εκλεκτικό πρόσθετο: συνένζυμα, λύμα ερυθροκυττάρων, αντιμυκητιακά, αντιβιοτικά, σάκχαρα.
- οδηγίες χρήσης του κιτ.
Η τεχνική περιλαμβάνει διάφορα στάδια, καθένα από τα οποία πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με ορισμένες απαιτήσεις. Με την ολοκλήρωση όλων των σταδίων διάγνωσης της νόσου με τη χρήση της μεθόδου καλλιέργειας του παθογόνου σε γονοκοκκικό μέσο, τα αποτελέσματα καταγράφονται μετά από 24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες. Στην οξεία γονόρροια, η ανάπτυξη γονόκοκκου παρατηρείται κατά τη διάρκεια της πρώτης ημέρας, στη χρόνια γονόρροια - έως και 72 ώρες.
Η παρασκευή ενός διαλύματος της βάσης του μέσου για πολιτιστικές διαγνώσεις πραγματοποιείται με έκχυση της βάσης σε δοχείο που περιέχει απεσταγμένο νερό (100 ml) για επακόλουθη διόγκωση. Το προκύπτον εναιώρημα τοποθετείται σε λουτρό νερού και αναδεύεται περιοδικά έως ότου η βάση διαλυθεί πλήρως και στη συνέχεια το διάλυμα βράζει για 2 λεπτά. Ένα διάλυμα του εκλεκτικού πρόσθετου παρασκευάζεται με διάλυσή του σε απεσταγμένο νερό (10 ml) με ανάδευση.
Ένα έτοιμο θρεπτικό μέσο σχηματίζεται με την προσθήκη ενός διαλύματος ενός εκλεκτικού πρόσθετου σε ένα διάλυμα βάσης. Το προκύπτον μέσο χύνεται σε αποστειρωμένα τρυβλία Petri. Πριν από τη διεξαγωγή της μελέτης, το γονοκοκκικό μέσο πρέπει να διατηρείται για μία ώρα σε θερμοκρασία 37 °C. Στη συνέχεια το υλικό εμβολιάζεται σύμφωνα με την εντολή του Υπουργείου Υγείας «Περί ενοποίησης μεθόδων μικροβιολογικής (βακτηριολογικής) έρευνας που χρησιμοποιούνται σε κλινικά διαγνωστικά εργαστήρια ιατρικών ιδρυμάτων».
Τιμή κατόπιν αιτήματος
Μπορείτε να προσθέσετε ένα προϊόν στο καλάθι σας, προσδιορίζοντας την ποσότητα
Κατασκευαστής: Pasteur Research Institute of Epidemiology and Microbiology
Χώρα Ρωσία
Μονάδα Μεσ.: σετ
Τύπος συσκευασίας: κουτί από χαρτόνι
Κωδικός προμηθευτή:
Περιγραφή
Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για την απομόνωση γονόκοκκων με καλλιεργητική μέθοδο στη μελέτη κλινικού υλικού από ασθενείς με φλεγμονώδεις ασθένειες του ουρογεννητικού συστήματος. Σχεδιασμένο για την παρασκευή 110 ml πυκνού θρεπτικού υλικού, έτοιμο για χρήση
Λειτουργικός σκοπός
Τα συστατικά του κιτ SVG παρέχουν βέλτιστες συνθήκες για την ανάπτυξη της Neisseria gonorrhoeae στις ποσότητες που είναι απαραίτητες για το σχηματισμό ορατών αποικιών και το εκλεκτικό πρόσθετο αναστέλλει την ανάπτυξη πρωτόζωων, μυκήτων και της περισσότερης άλλης σχετικής χλωρίδας που ενδεχομένως περιέχεται στο δείγμα.
Η τεχνική περιλαμβάνει διάφορα στάδια, καθένα από τα οποία πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με ορισμένες απαιτήσεις. Με την ολοκλήρωση όλων των σταδίων διάγνωσης της νόσου με τη χρήση της μεθόδου καλλιέργειας του παθογόνου σε γονοκοκκικό μέσο, γίνεται οπτική καταγραφή των αποτελεσμάτων μετά από 18-24 ώρες, 48 και 72 ώρες. Ανιχνεύονται ανοιχτό γκρι, ελαφρώς νεφελώδεις στρογγυλές αποικίες τυπικές των γονόκοκκων. Στην οξεία γονόρροια, η ανάπτυξη γονόκοκκου παρατηρείται κατά τη διάρκεια της πρώτης ημέρας, στη χρόνια γονόρροια - έως και 72 ώρες. Το αποτέλεσμα θεωρείται αρνητικό εάν δεν υπάρχει ανάπτυξη μετά από 7 ημέρες επώασης
Ορίστε τα περιεχόμενα
1. Θρεπτική μεσαία βάση, ξηρή - 4,1 g x 1 φιάλη.
άγαρ, εκχύλισμα μαγιάς, πεπτόνη, άμυλο, άλατα.
εμφάνιση: υγροσκοπική σκόνη ανοιχτού κίτρινου χρώματος.
2. Επιλεκτικό πρόσθετο, λυοφιλοποιημένο - 1 φιάλη.
συνένζυμα, λύμα ερυθροκυττάρων, αντιμυκητιακά, αντιβιοτικά, σάκχαρα.
εμφάνιση: λυοφιλοποιημένο ροζ-μπεζ χρώμα.
Το παρασκευασμένο μέσο είναι διαφανές, χρώματος ανοιχτού κίτρινου, με ελαφρύ ωχρότητα· επιτρέπεται ελαφρύ ίζημα.
pH 7,2-7,4
Φόρμα έκδοσης: σε χάρτινο κουτί μαζί με οδηγίες χρήσης.
Συνθήκες αποθήκευσης: σε θερμοκρασία +2...8°C για όχι περισσότερο από 12 μήνες, επιτρέπεται η αποθήκευση σε θερμοκρασίες έως +25°C για όχι περισσότερες από 2 εβδομάδες.
Το παρασκευασμένο θρεπτικό μέσο μπορεί να αποθηκευτεί σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή τρυβλία Petri για όχι περισσότερο από 7 ημέρες.
Εγγεγραμμένος στο Roszdravnadzor
Το Neisseria gonorrhoeae ανήκει στην οικογένεια Neisseriaceae, το γένος Neisseria. Οι Gonococci ανακαλύφθηκαν από τον Neisser το 1879 και όλη η οικογένεια πήρε το όνομά του.
Μορφολογία. Οι γονόκοκκοι είναι διπλόκοκκοι που αποτελούνται από δύο κόκκους σε σχήμα κόκκου που βρίσκονται κοίλοι μεταξύ τους (θυμίζουν κόκκους καφέ). Το μέγεθος των γονόκοκκων είναι 1,2-1,3 × 0,7-0,8 μικρά. Είναι πολυμορφικά· μαζί με τα μεγάλα, υπάρχουν πολύ μικρά, ακανόνιστου σχήματος βακτήρια μορφής L. Οι γονόκοκκοι είναι ακίνητοι και δεν σπόροι. Στο παθολογικό υλικό (πύον) εντοπίζεται ουσία σε σχήμα κάψουλας. Αρνητικό γραμμάριο. Υπό την επήρεια φαρμάκων και άλλων ουσιών, αλλάζουν γρήγορα: εμφανίζονται θετικές κατά Gram μορφές. Σε παθολογικό υλικό εντοπίζονται ενδοκυτταρικά (σε ένα λευκοκύτταρο), αλλά μπορεί να είναι και έξω από το κύτταρο. Μπορούν να βρεθούν με τη μορφή μεμονωμένων κόκκων (βλ. Εικ. 4).
Καλλιέργεια. Οι γονόκοκκοι είναι αερόβιοι. Πολύ απαιτητικό σε θρεπτικά μέσα. Αναπτύσσονται σε μέσα που περιέχουν φυσική πρωτεΐνη (ανθρώπινη) - αίμα, ορό, σε θερμοκρασία 37 ° C και pH 7,2-7,4. Τα μέσα πρέπει να είναι πρόσφατα παρασκευασμένα και υγρά. Η σπορά πρέπει να γίνεται αμέσως μετά τη λήψη του υλικού. Σε ένα μέσο ορού, οι γονόκοκκοι σχηματίζουν μικρές αποικίες 1-2 mm, διαφανείς, γυαλιστερές με λείες άκρες, που μοιάζουν με σταγόνες δροσιάς. Δεν υπάρχει αιμόλυση στο μέσο αίματος. Στο ζωμό ορού γάλακτος δίνουν μια ελαφριά θολότητα και μια μεμβράνη που κατακάθεται στον πάτο του δοκιμαστικού σωλήνα. Εάν η ανάπτυξη είναι κακή μετά από 24 ώρες, οι καλλιέργειες αφήνονται στον θερμοστάτη για τη δεύτερη ημέρα.
Ενζυματικές ιδιότητες. Οι σακχαρολυτικές ιδιότητες εκφράζονται ασθενώς. Οι γονόκοκκοι διασπούν μόνο ένα σάκχαρο - τη γλυκόζη, παράγοντας οξύ. Δεν έχουν πρωτεολυτικές ιδιότητες.
Σχηματισμός τοξινών. Το κυτταρικό τοίχωμα των γονόκοκκων περιέχει μια τοξική ουσία - λιποπολυσακχαρίτη (λίγο μελετημένο).
Αντιγονική δομή. Η αντιγονική δομή είναι ετερογενής και αλλάζει εύκολα υπό την επίδραση περιβαλλοντικών παραγόντων. Δεν υπάρχει γενικά αποδεκτός διαχωρισμός των γονόκοκκων σε ορότυπους και ορότυπους.
Αντοχή σε περιβαλλοντικούς παράγοντες. Στο εξωτερικό περιβάλλον, οι γονόκοκκοι δεν είναι πολύ σταθεροί. Σε θερμοκρασία 56-60° C πεθαίνουν. Σε θερμοκρασία 40° C, η βιωσιμότητά τους μειώνεται απότομα. Οι χαμηλές θερμοκρασίες και το στέγνωμα τα καταστρέφουν γρήγορα. Όμως παραμένουν σε πύον έως και 24 ώρες Απολυμαντικά διαλύματα - διάλυμα φαινόλης 1%, χλωριούχος υδράργυρος 1:1000 σκοτώνουν τους γονόκοκκους μέσα σε λίγα λεπτά. Οι γονόκοκκοι είναι ιδιαίτερα ευαίσθητοι στα άλατα αργύρου - ένα διάλυμα 1% νιτρικού αργύρου τους σκοτώνει αμέσως. Οι ακτίνες UV τους σκοτώνουν μέσα σε λίγα λεπτά.
Ευαισθησία των ζώων. Τα ζώα δεν είναι ευαίσθητα στον γονόκοκκο. Ωστόσο, η ενδοπεριτοναϊκή ένεση γονοκοκκικής τοξίνης σε λευκά ποντίκια προκαλεί το θάνατό τους.
Πηγές μόλυνσης. Άτομο με γονόρροια.
Διαδρομές μετάδοσης. Επικοινωνήστε με το νοικοκυριό (σεξουαλική), λιγότερο συχνά μέσω μολυσμένων αντικειμένων (πετσέτα, σφουγγάρια κ.λπ.).
Ασθένειες στον άνθρωπο. Γονόρροια και βλενόρροια.
Παθογένεση. Ο φυσικός ξενιστής των γονόκοκκων είναι ένα άρρωστο άτομο. Οι γονόκοκκοι διεισδύουν μέσω των βλεννογόνων της ουρήθρας (στις γυναίκες, της ουρήθρας και του τραχήλου της μήτρας). Ο παράγοντας παθογένειας των γονόκοκκων είναι η παρουσία πυλώνων, οι οποίες, σε σύνδεση με τις μικρολάχνες του κυλινδρικού επιθηλίου, διευκολύνουν τη διείσδυση του γονόκοκκου στο επιθηλιακό κύτταρο, προκαλώντας οξεία φλεγμονώδη διαδικασία στη βλεννογόνο μεμβράνη.
Κλινικά, η γονόρροια εκδηλώνεται με πόνο κατά την ούρηση, έκκριση πύου από την ουρήθρα και τον κόλπο. Η ασθένεια είναι οξεία, αλλά μερικές φορές γίνεται χρόνια. Οι γονόκοκκοι μπορεί να προκαλέσουν βλεννόρροια επιπεφυκίτιδα - βλενόρροια (πυώδης φλεγμονή της βλεννογόνου μεμβράνης των ματιών στα νεογνά). Οι γονόκοκκοι σπάνια διεισδύουν από την ουρήθρα σε άλλα όργανα, αλλά μερικές φορές μπορεί να προκαλέσουν αρθρίτιδα, ενδοκαρδίτιδα κ.λπ.
Ασυλία, ανοσία. Δεν υπάρχει φυσική αντίσταση στους γονόκοκκους. Η μεταφερόμενη ασθένεια επίσης δεν δημιουργεί ανοσία. Η παρατηρούμενη φαγοκυττάρωση είναι ατελής.
Πρόληψη. Αγωγή υγείας. Αύξηση του πολιτιστικού και υγειονομικού επιπέδου. Δεν υπάρχει συγκεκριμένη πρόληψη. Για την πρόληψη της βλενόρροιας, τα παιδιά πρέπει να ενίονται στον επιπεφυκότατο σάκο αμέσως μετά τη γέννηση με 1-2 σταγόνες διαλύματος αλβουξίνης 30%.
Θεραπεία . Αντιβιοτικά (πενικιλλίνη, δικιλλίνη, στρεπτομυκίνη κ.λπ.). Χρησιμοποιούνται επίσης σουλφοναμιδικά φάρμακα. Για τη χρόνια μορφή, χρησιμοποιείται εμβόλιο για τον γονόκοκκο.
Ερωτήσεις ελέγχου1. Περιγράψτε τις μορφολογικές ιδιότητες των γονόκοκκων.
2. Ποια είναι η ενζυματική δραστηριότητα και η παραγωγή τοξινών των γονόκοκκων;
3. Ποια είναι η αντίσταση των γονόκοκκων. Σε ποιο φάρμακο είναι ιδιαίτερα ευαίσθητοι οι γονόκοκκοι;
4. Ποιες ασθένειες προκαλούνται από τους γονόκοκκους και η παθογένειά τους.
Μικροβιολογική εξέτασηΣκοπός της μελέτης: ταυτοποίηση γονόκοκκων και αντιγονοκοκκικών αντισωμάτων.
Υλικό για έρευνα
1. Έκκριση από τον βλεννογόνο της ουρήθρας στους άνδρες.
2. Απόρριψη από τον βλεννογόνο της ουρήθρας και του τραχήλου της μήτρας στις γυναίκες.
3. Πυώδης έκκριση από τα μάτια.
4. Αίμα για ορό.
Σημείωση. Για βακτηριοσκοπική και βακτηριολογική εξέταση, το υλικό λαμβάνεται: 1) πριν από την έναρξη της θεραπείας με αντιβιοτικά: 2) όχι νωρίτερα από 10 ημέρες μετά το τέλος της θεραπείας με αντιβιοτικά. 3) όχι νωρίτερα από 2 ώρες μετά την τελευταία ούρηση. 4) όχι νωρίτερα από 2 ώρες μετά το πλύσιμο.
Βασικές μέθοδοι έρευνας
1. Μικροσκοπικό (χρησιμοποιείται κυρίως για οξείες μορφές).
2. Μικροβιολογική.
3. Ορολογικός.
Πρόοδος της μελέτης
Δεύτερη μέρα της μελέτης
Βγάλτε τις καλλιέργειες από τον θερμοστάτη και επιθεωρήστε τις. Μελέτη αποικιών. Κάνουν κηλίδες. Εάν υπάρχουν ύποπτοι gram-αρνητικοί διπλόκοκκοι, οι αποικίες υποκαλλιεργούνται σε κεκλιμένο μέσο σε δοκιμαστικούς σωλήνες (το μέσο πρέπει να είναι πρόσφατα παρασκευασμένο και να περιέχει επαρκή ποσότητα συμπυκνώματος) και ελέγχονται για οξειδάση. Για να γίνει αυτό, μια σταγόνα διαλύματος διμεθυλπαραφαινυλενοδιαμίνης 1% εφαρμόζεται στην αποικία με μια πιπέτα· οι αποικίες αλλάζουν χρώμα από σκούρο καφέ σε μαύρο.
Τρίτη μέρα μελέτης
Οι καλλιέργειες αφαιρούνται από τον θερμοστάτη, γίνονται επιχρίσματα από το λοξό άγαρ, χρωματίζονται με Gram και εξετάζονται μικροσκοπικά. Εμβολιάστε σε μέσα Hiss (λακτόζη, γλυκόζη, μαννιτόλη και μαλτόζη). Αυτοί οι υδατάνθρακες πρέπει να περιέχουν 30% ορού αίματος. Οι ενοφθαλμισμένοι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη.
Τέταρτη μέρα έρευνας
Αφαιρέστε τα σωληνάρια από τον θερμοστάτη, εάν δεν υπάρχει ανάπτυξη, αφήστε τα στον θερμοστάτη για άλλες 1-2 ημέρες. Εάν υπάρχει ανάπτυξη, λαμβάνονται υπόψη τα αποτελέσματα (Πίνακας 28).
Ορολογική διάγνωση
Τρίτη εβδομάδα ασθένειας. Στη χρόνια πορεία της νόσου και σε αμφίβολες περιπτώσεις, το RSC πραγματοποιείται με τη χρήση ορού του ασθενούς (βλ. Κεφάλαιο 12). Ως αντιγόνο χρησιμοποιείται μια σκοτωμένη καλλιέργεια γονόκοκκων, η οποία παρασκευάζεται υπό βιομηχανικές συνθήκες. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (βλ. Κεφάλαιο 12).
Ερωτήσεις ελέγχου
1. Ποιο υλικό χρησιμοποιείται για την αναγνώριση των γονόκοκκων και πώς λαμβάνεται;
2. Πόσο καιρό μετά την ούρηση (ή το πλύσιμο σε γυναίκες) μπορεί να ληφθεί υλικό για έρευνα;
3. Ποια ερευνητική μέθοδος είναι η κυριότερη για την οξεία μορφή και ποια για τη χρόνια μορφή γονόρροιας;
4. Πότε και τι ορολογικός έλεγχος γίνεται εάν υπάρχει υποψία γονόρροιας;
5. Από ποιους μικροοργανισμούς χρειάζονται για να διαφοροποιήσουν τους γονόκοκκους;
Πάρτε το φάρμακο από τον δάσκαλό σας. Μελετήστε το και σκιαγραφήστε τους γονόκοκκους που βρίσκονται μέσα και έξω από το λευκοκύτταρο χρησιμοποιώντας χρώση Gram.
Πολιτιστικά μέσα
Κρόκος μέτριος. Σε 100 ml MPA από κρέας κουνελιού προσθέστε 15 ml κρόκου (φρέσκο αυγό κοτόπουλου), 6 ml δείκτη ερυθρού φαινόλης, 1,5 ml ζάχαρης διαλυμένη σε 1 ml αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού.
Θρεπτικό μέσο ασκίτης-άγαρ. Στο διήθημα του ζωμού που παρασκευάστηκε από κρέας κουνελιού, προσθέστε 2% άγαρ, 1% πεπτόνη και 0,5% χλωριούχο νάτριο. Ζεσταίνουμε μέχρι να διαλυθεί το άγαρ, ρυθμίζουμε το pH στο 7,4-7,5 και αλκαλίζουμε με 20% υδροξείδιο του νατρίου. Το μέσο φέρεται σε βρασμό, διηθείται, χύνεται σε αποστειρωμένα φιαλίδια και αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο για 15 λεπτά στους 115°C.
Συνταγές για μέσα καλλιέργειας χωρίς ασκίτη (MPA pH 7,4-7,5).
1) κρεατόνερο από κρέας κουνελιού ή καρδιές βοδιού - 100 ml
υδρόλυση καζεΐνης - 2 ml
αυτολύμα μαγιάς - 2 ml
ορός αίματος βοοειδών - 20 ml
2) κρεατόνερο από κρέας κουνελιού ή καρδιές βοδιού - 100 ml
Διάλυμα 5% αιμοϋδρολύματος - 2 ml
αυτολύμα μαγιάς - 2 ml
ορός βοοειδών - 20 ml
3) κρεατόνερο από κρέας κουνελιού ή καρδιές βοδιού - 100 ml
κρόκος αυγού κοτόπουλου - 10 ml
ορός αίματος βοοειδών - 20 ml
Η ανάπτυξη των γονόκοκκων σε αυτά τα μέσα είναι άφθονη. Οι αποικίες γονόκοκκου μπορούν να ανιχνευθούν χρησιμοποιώντας ένα τεστ οξειδάσης, στο οποίο γίνονται κόκκινες και μαύρες.
Η αποτελεσματικότητα της βακτηριολογικής μεθόδου έρευνας σε
καθορίζεται σε μεγάλο βαθμό από την ποιότητα των θρεπτικών μέσων. ΣΕ
Στη χώρα μας, δύο τύποι δοκιμάζονται και χρησιμοποιούνται ευρύτερα
θρεπτικά μέσα: θρεπτικά μέσα ασκίτη-άγαρ και ασκίτη.
Η βάση και των δύο μέσων είναι το άγαρ πεντόνης κρέατος (MPA) από κρέας
κουνέλια ή φρέσκες καρδιές βοδιών. Τρόπος παρασκευής του
είναι όπως ακολουθεί. Το κρέας κουνελιού απαλλάσσεται από λίπος και
τένοντες, περασμένοι από μηχανή κοπής κρέατος ή ψιλοκομμένοι με μαχαίρι,
ζυγισμένο, γεμάτο με διπλό όγκο νερού βρύσης και σε τέτοια
φόρμα αφήνεται στο ψυγείο στους 4°C για μια μέρα για εκχύλιση.
Στη συνέχεια, η μάζα θερμαίνεται σε βρασμό, βράζει για 10 λεπτά, ψύχεται και
φιλτράρετε μέσα από τυρόπανο. Στο διήθημα προσθέστε 2% άγαρ-άγαρ, 1%
πεπτόνη και 0,5% χλωριούχο νάτριο, θερμαίνετε μέχρι να διαλυθεί το άγαρ-άγαρ
και ορίστε pH=7,5-7,6 (η αλκαλοποίηση είναι 20%
διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου). Φέρτε το μέσο σε βρασμό, φιλτράρετε
μέσα από ένα φίλτρο βαμβακερής γάζας, χύνεται σε αποστειρωμένα μπουκάλια ή
φιάλες και αποστειρώνονται σε αυτόκλειστο για 15-20 λεπτά σε 0,5 ατμόσφαιρα
μανόμετρο (112о).
Η τεχνική παρασκευής MPA από φρέσκες καρδιές βοοειδών είναι η ίδια με
μόνο το βράσιμο της μάζας των θρυμματισμένων καρδιών σε νερό πρέπει
παράγουν 20 λεπτά αντί για 10.
Είναι δυνατή η παρασκευή της βάσης του θρεπτικού μέσου χωρίς πεπτόνη.
Σε αυτή την περίπτωση, χρησιμοποιούν την παραπάνω μέθοδο για την παρασκευή MPA, αλλά
Η πεπτόνη αποκλείεται από τη σύνθεσή της, το ψιλοκομμένο κρέας κουνελιού βράζεται
5 λεπτά αντί για 10 και αποστειρώστε το μέσο σε αυτόκλειστο για 10
λεπτά στις 0,8 ατμόσφαιρες στο μανόμετρο (117o).
Άγαρ ασκίτη
Το ασκητικό υγρό πρέπει να λαμβάνεται από ασθενείς με
ασκίτη που προκαλείται από καρδιακή ανεπάρκεια και
παράγεται μέσω trocar σε αποστειρωμένη φιάλη και προσθέτετε 5%
χλωροφόρμιο για αναισθησία. Για 10 ημέρες, το υγρό αναμιγνύεται με
χλωροφόρμιο περιστρέφοντας το μπουκάλι και μετά αφήνοντάς το
θερμοκρασία δωματίου μέχρι το χλωροφόρμιο να κατακαθίσει τελείως στον πάτο της φιάλης
και καθαρίζοντας το υγρό. Μετά από αυτό, εάν είναι απαραίτητο, διαφανές
ασκιτικό υγρό χύνεται σε στείρες φιάλες των 50 ml με
βαμβακερά βύσματα και τοποθετούνται καθημερινά για 3 ημέρες
υδατόλουτρο σε θερμοκρασία 56°C για 1 ώρα για να εξατμιστεί το χλωροφόρμιο
μέσω βαμβακερής τάπας. Μετά τον έλεγχο του ασκητικού υγρού για
στειρότητα μπορεί να χρησιμοποιηθεί για εμπλουτισμό
θρεπτικό μέσο για την απομόνωση του γονόκοκκου σε συγκέντρωση 1/3 και 1/4
όγκου του μέσου, ο οποίος προσδιορίζεται πειραματικά.
Συνταγές για μέσα καλλιέργειας χωρίς ασκίτη
1. MPA από κρέας κουνελιού ή φρέσκες καρδιές βοοειδών
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, υδρόλυση καζεΐνης για παρεντερική
πρωτεϊνική διατροφή - 2 ml, αυτολύμα μαγιάς - 2 ml, ορός γάλακτος
αίμα βοοειδών - 20 ml (μέσο KDS-1).
2. MPA από κρέας κουνελιού ή φρέσκες καρδιές βοοειδών
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, διάλυμα αιμοϋδρολύματος 5% - 2 ml,
αυτολύμα μαγιάς - 2 ml, ορός βοείου αίματος
βοοειδή - 20 ml (μέσο GDS-2).
3. MPA από κρέας κουνελιού ή φρέσκες καρδιές βοοειδών
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, μέσο 199 για καλλιέργειες ιστού χωρίς
αντιβιοτικά - 20 ml, αυτολύμα ζύμης - 2 ml, ορός αίματος
βοοειδή - 20 ml (μεσαίο 199-SDS).
4. MPA από κρέας κουνελιού ή φρέσκες καρδιές βοοειδών
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, φρέσκος κρόκος αυγού κοτόπουλου - 10 ml,
ορός αίματος βοοειδών - 20 ml (μέσο JS).
Ο κρόκος αυγού λαμβάνεται στείρα από διαιτητικά αυγά κοτόπουλου
αμέσως πριν την προετοιμασία του μέσου. Για αυτό,
Έχοντας προκατεργαστεί με οινόπνευμα, το κέλυφος ανοίγεται με αποστειρωμένο
τσιμπιδάκια και αδειάζουμε το περιεχόμενο του αυγού σε ένα αποστειρωμένο χωνί. Μετά
Αφού ρέει το ασπράδι, μεταφέρεται ο κρόκος που παραμένει στο χωνί
αποστειρωμένα δοχεία και μια πιπέτα μέτρησης λαμβάνουν τα απαιτούμενα
παραγωγή θρεπτικού μέσου όγκου κρόκου.
Η παρασκευή του αυτολύματος ζύμης έχει ως εξής.
Η μαγιά αρτοποιίας θρυμματίζεται και τοποθετείται σε μπουκάλι μεγαλύτερο από
ο όγκος της μαγιάς που λαμβάνεται είναι 4 - 5 φορές και αφήνεται για αυτόλυση για δύο
ημέρες σε στεγνωτήριο ή θερμοστάτη στους 60°C. Στη συνέχεια παχύ
η καφέ μάζα αραιώνεται με τριπλό όγκο ζεστού νερού βρύσης
νερό, ανακατέψτε καλά και φυγοκεντρήστε δύο φορές για 10 λεπτά σε
1000 rpm (μέχρι να καθαρίσει το υγρό). Υπερκείμενο
το υγρό στραγγίζεται, προστίθεται 0,5% χλωριούχο νάτριο σε αυτό, ρυθμισμένο
pH σε 7,4-7,5 και βάλτε σε αυτόκλειστο για 30 λεπτά σε 1 ατμόσφαιρα
μανόμετρο (120°). Φυλάσσεται σε μικρές συσκευασίες στο ψυγείο στο
Το αυτόλυμα ζύμης μπορεί να αντικατασταθεί με διάλυμα 1,5%.
εκχύλισμα μαγιάς ζωοτροφών (EKD) στην ίδια ποσότητα (2 ml) 1,5%
Το διάλυμα EKD παρασκευάζεται στο εργαστήριο από ξηρό EKD με διάλυσή του
αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό. Μαγειρεμένο με αυτόν τον τρόπο
το υγρό εκχύλισμα χύνεται σε αποστειρωμένα σωληνάρια και αποστειρώνεται μέσα
βάλτε σε αυτόκλειστο σε 0,5 ατμόσφαιρα στο μανόμετρο για 20 λεπτά.
Σε όλα τα παραπάνω θρεπτικά μέσα, ορός αίματος
τα βοοειδή μπορούν να αντικατασταθούν από κανονικά ντόπια
ορός για βακτηριολογικά μέσα καλλιέργειας, ο οποίος
είναι ο ίδιος ορός, αλλά με την προσθήκη συντηρητικού.
Παρασκευή εμπλουτισμένου μέσου
Το MPA, που βρίσκεται σε φιάλη ή φιάλη, τήκεται σε νερό
μπάνιο, ψύξτε στους 56-58° και προσθέστε τα υλικά σε αυτό μέσα
αναλογίες που καθορίστηκαν νωρίτερα στις συνταγές. Εμπλουτισμένο με MPA 3-3,5
ml χύνεται σε αποστειρωμένους σωλήνες, το μέσο κόβεται και υγραίνεται
0,5 ml αποστειρωμένου ζωμού πεπτόνης κρέατος ή ισοτονικό
διάλυμα χλωριούχου νατρίου αφού σκληρύνει. Για έλεγχο
Για να εξασφαλιστεί η στειρότητα, το μέσο τοποθετείται σε θερμοστάτη στους 35-37°C την ημέρα.
Όλα τα παραπάνω μέσα χωρίς ασκίτη, εκτός από τα μέσα αυγών, είναι διαφανή,
Είναι εύκολο να διαφοροποιηθούν αποικίες μικροοργανισμών πάνω τους. Τετάρτη,
εμπλουτισμένο με αυγό, είναι θολό, είναι κίτρινο, καλλιεργείται
Οι αποικίες του, ιδιαίτερα οι γονόκοκκοι, είναι ελάχιστα διακριτές. Ωστόσο, ανάπτυξη
Ο γονόκοκκος είναι άφθονος σε αυτό το μέσο και οι αποικίες του μπορούν εύκολα να είναι
ανακαλύφθηκε με επεξεργασία της ανάπτυξης με διάλυμα 1%.
διμεθυλπαραφαινυλενοδιαμίνη ή άλλο αντιδραστήριο οξειδάσης,
που χρωματίζει τις αποικίες γονόκοκκου κόκκινο, καλό
σε αντίθεση με το κίτρινο φόντο του περιβάλλοντος. Χρήση κρόκου
περιβάλλοντα χωρίς επεξεργασία της ανάπτυξης μικροοργανισμών με ένα αντιδραστήριο οξειδάσης δεν είναι
Η ποιότητα κάθε νέας σειράς εργαστηριακού θρεπτικού μέσου
η παραγωγή πρέπει να ελεγχθεί με σπορά σε αυτό
παθολογικό υλικό από ασθενείς με βακτηριοσκοπική
βρέθηκαν γονόκοκκοι.
Η διάρκεια ζωής του MPA στο ψυγείο στους 4°C δεν πρέπει να υπερβαίνει το 1
μήνα, εμπλουτισμένο περιβάλλον - 7 ημέρες.
Λόγω του ότι για το παραπάνω περιβάλλον είναι δυνατό ένα μικρό χρονικό διάστημα
αποθήκευσης, έχει αναπτυχθεί μια μέθοδος παραγωγής
λυοφιλοποιημένο θρεπτικό μέσο χωρίς ασκίτη, το οποίο βρίσκεται κάτω
με τίτλο "Θρεπτικό μέσο για απομόνωση γονόκοκκων, ξηρό"
Διατίθεται σε δύο φιάλες: Part I (μεσαία βάση) και Part II
(παράγοντες εμπλουτισμού). Προετοιμασία του εργασιακού περιβάλλοντος στο Μέρος Ι
πρέπει να προσθέσετε 100 ml αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού και να ζεστάνετε
σε λουτρό νερού στους 100° μέχρι να διαλυθεί τελείως το περιεχόμενο της φιάλης
(μέσα σε 30 λεπτά). Επιπλέον χρόνος για να διατηρήσετε το μέσο σε νερό
Δεν χρειάζεται μπάνιο, γιατί αυτό μειώνει την ποιότητά του. Το μέρος II περιλαμβάνει
24 ml αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού (διάλυση εμπλουτισμού
ουσίες εμφανίζονται αμέσως). Στη συνέχεια, εάν πληρούνται οι προϋποθέσεις
στειρότητα, το μέρος II μεταφέρεται στο μέρος I, ψύχεται στους 56°C,
αναμειγνύεται, χύνεται σε αποστειρωμένα σωληνάρια, κουρεύεται και
ενυδατώστε όπως περιγράφηκε προηγουμένως.
Το ξηρό υλικό παρασκευάζεται από κρέας κουνελιού ή καρδιές βοοειδών,
εκτός από τις εμπλουτιστικές ουσίες που δίνονται στη συνταγή 1 (μέσο KDS-1)
περιέχει οροτικό οξύ σε συγκέντρωση 1 μg/ml. Τετάρτη
υψηλής ποιότητας, βολικό για χρήση σε βακτηριολογικά
εργαστήρια, γιατί Για τη μετατροπή ενός ξηρού περιβάλλοντος σε περιβάλλον εργασίας απαιτείται
μόνο αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό.
Χρησιμοποιώντας ένα θρεπτικό μέσο χωρίς ασκίτη με την προσθήκη
αντιβιοτικά και οροτικό οξύ δίνει καλά αποτελέσματα με
βακτηριολογική διάγνωση, συμπεριλαμβανομένης της εξωγενετικής
γονόρροια: γονόρροια των αμυγδαλών και του φάρυγγα, του ορθού. Αντιβιοτικά
προστίθεται για την καταστολή της ανάπτυξης του συνοδού γονόκοκκου
βακτηριακή χλωρίδα, η οποία αυξάνει την ένταση της ανάπτυξης του γονόκοκκου,
διευκολύνει τον εντοπισμό μεμονωμένων αποικιών και την απομόνωση σε καθαρή μορφή
Πολιτισμός. Προσθέστε 20,0 U/ml θειικής πολυμυξίνης Μ και 6,2 U/ml
θειική ριστομυκίνη; αντί για το τελευταίο μπορείτε να χρησιμοποιήσετε
υδροχλωρική λινκομυκίνη - 2 mcg/ml. Το οροτικό οξύ εγχέεται σε
σύνθεση του θρεπτικού μέσου σε ποσότητα 1 μg/ml.
Για να το κάνετε αυτό, πάρτε ένα δείγμα οροτικού οξέος 1 mg (1000 μg) και
αραιωμένο σε 1,0 ml αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού (πάρτε
διάλυμα εργασίας που περιέχει 1000 mcg το οποίο μπορεί να αποθηκευτεί σε
ψυγείο για 10 ημέρες) και αποστειρώνεται σε υδατόλουτρο 15
λεπτά, μετά πάρτε 0,1 ml του προκύπτοντος διαλύματος και προσθέστε το σε
100 ml εμπλουτισμένο θρεπτικό μέσο. Περιβάλλον με αντιβιοτικά
πρέπει να χρησιμοποιείται ταυτόχρονα με μέσο χωρίς αντιβιοτικά
(ο ένας δοκιμαστικός σωλήνας με μέσο με αντιβιοτικά, ο άλλος χωρίς αυτά), γιατί
αν και σπάνια, υπάρχουν στελέχη γονόκοκκου που είναι ευαίσθητα
τα παραπάνω αντιβιοτικά.
Μέσο αποθήκευσης (μεταφοράς).
Σύνθεση του μέσου συντήρησης: 1) 1 λίτρο απεσταγμένο νερό,
χωρίς χλώριο, 30 g άγαρ-άγαρ. 2) 900 ml αποσταγμένο
νερό χωρίς χλώριο, 2 ml θειογλυκολικό οξύ, 12 ml 1Μ
διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου, 100 ml υδατικού διαλύματος νατρίου 20%.
μονουποκατεστημένο φωσφορικό, 20 ml διαλύματος χλωρίου 1%.
ασβέστιο. Το τελευταίο μείγμα (2) προστίθεται στο φρεσκοπαρασκευασμένο
άγαρ (1), ρυθμίστε το pH σε 7,3-7,4, ρίξτε 10 ml του μέσου σε
αποστειρωμένοι δοκιμαστικοί σωλήνες, αποστειρωμένοι με ρέον ατμό για 1 ώρα.
Βαμβακερές μπατονέτες σε ξύλινα ραβδιά ή ράβδους
ανοξείδωτο ατσάλι με διάμετρο περίπου 2 mm, τοποθετημένο σε βαμβάκι
φελλοί, βράστε για 20 λεπτά σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών, pH = 7,4 και
εμποτίστε για 24 ώρες σε αραιό υδατικό εναιώρημα 1%.
θρυμματισμένο κάρβουνο. Μετά το στέγνωμα, βαμβάκι
διορθώνεται, εισάγεται σε βακτηριολογικούς σωλήνες
κατάλληλη διάμετρο (ίση με τη διάμετρο των δοκιμαστικών σωλήνων με το μέσο) και
Αποστειρώστε σε αυτόκλειστο για 20 λεπτά σε 1 ατμόσφαιρα (θερμοκρασία
Για την παρασκευή ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών, παρασκευάστε δύο διαλύματα: 1
διάλυμα - 28,4 g νατρίου διαλυμένο σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού
διυποκατεστημένο φωσφορικό (0,2Μ); 2 διάλυμα - σε 1 λίτρο
διαλύονται 27,8 g κιτρικού οξέος (0,1 M) σε απεσταγμένο νερό.
Αναμείξτε 181,7 ml διαλύματος 1 και 18,3 ml διαλύματος 2.
Παραγωγή καλλιεργειών με μέσα συντήρησης
πραγματοποιείται ως εξής. Γιατρός που εξετάζει έναν ασθενή
αφαιρεί ένα ταμπόν από τον δοκιμαστικό σωλήνα, το εισάγει στο σημείο της νόσου
λίγα δευτερόλεπτα για μούλιασμα (μπορείτε να κάνετε μερικά
κινήσεις δεξιόστροφα και αριστερόστροφα), το αφαιρεί χωρίς να το αγγίζει
περιβάλλοντα αντικείμενα σε δοκιμαστικό σωλήνα με μέσο συντήρησης. Στην κορυφή
Χρησιμοποιώντας ένα βαμβακερό βύσμα, ο δοκιμαστικός σωλήνας κλείνει με μια λαστιχένια θηλή. Πριν την αποστολή
υλικό στο βακτηριολογικό εργαστήριο, οι καλλιέργειες αποθηκεύονται στους 4°C
στο ψυγείο για ελάχιστο χρονικό διάστημα, αλλά όχι περισσότερο από μία ημέρα. ΤΑΥΤΟΧΡΟΝΑ
πάρτε παθολογικό υλικό και κάντε επιχρίσματα για
βακτηριοσκοπική εξέταση, τα οποία αποστέλλονται στο
εργαστήριο μαζί με καλλιέργεια. Στο βακτηριολογικό εργαστήριο
αμέσως μετά τη λήψη επιχρισμάτων με παθολογικό υλικό
αφαιρείται από το μέσο αποθήκευσης και χρησιμοποιείται για σπορά στην επιφάνεια
κεκλιμένο θρεπτικό μέσο σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Κάθε ταμπόν κάνει
ενοφθαλμισμός σε θρεπτικό μέσο σε δύο δοκιμαστικούς σωλήνες. Σπορά στην επιφάνεια
το θρεπτικό μέσο πρέπει να παράγεται με τεθλασμένη κίνηση
κατά μήκος της επιφάνειας του μέσου, περιστρέφοντας τη μπατονέτα. Εάν η διάμετρος των δοκιμαστικών σωλήνων είναι
το μέσο συντήρησης και το θρεπτικό μέσο είναι παρόμοια, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια μπατονέτα
μετά τον εμβολιασμό, αφήστε το στο δεύτερο δοκιμαστικό σωλήνα σε επαφή με
θρεπτικό μέσο. Οι καλλιέργειες τοποθετούνται σε θερμοστάτη και καλλιεργούνται σε
36-37е σε ξηραντήρα. Σημειώστε ότι κατά τη χρήση
περιβάλλοντος διατήρησης, η ανάπτυξη του γονόκοκκου μπορεί να συμβεί αργότερα από ό,τι σε
άμεσος εμβολιασμός παθολογικού υλικού σε θρεπτικό συστατικό
Εργασία με καλλιέργειες
Η καλλιέργεια των γονόκοκκων μπορεί να γίνει σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή
Πιάτα Petri? η πρώτη μέθοδος παρέχει σημαντική εξοικονόμηση
περιβάλλον. Να αυξηθεί το ποσοστό εμβολιασμού των γονόκοκκων, που εμβολιάζονται
Τα θρεπτικά μέσα τοποθετούνται σε θερμοστάτη σε ξηραντήρα με 20%
αντιδράσεις μεταξύ θειικού οξέος και διττανθρακικού νατρίου: σε ξηραντήρα
με όγκο 5 λίτρων, τοποθετήστε ένα ποτήρι με 50 ml θειικού οξέος 10%,