Medii nutritive pentru creșterea gonococilor. Mediu de cultură pentru izolarea și cultivarea gonococului Inoculare pentru gonoree din ochi
Acest agar suplimentat cu sânge, hemoglobină sau alți aditivi este recomandat pentru izolarea selectivă a gonococilor.
Compus**:** Compoziția este verificată și adusă la conformitate cu parametrii necesari
Gătit:Suspendați 7,2 g de pulbere în 100 ml de apă distilată pentru a prepara un mediu de dublă tărie. Se încălzește până la fierbere pentru a dizolva complet particulele. Se sterilizează prin autoclavare la 1,1 atm (121°C) timp de 15 minute. Se răcește la 50°C și se adaugă aseptic 100 ml preparată separat de soluție de hemoglobină sterilă 2% (FD022) și supliment GC (FD021). Se amestecă bine și se toarnă în vase Petri. Pentru a conferi proprietăți selective mediului, puteți adăuga antibiotice incluse în următorii aditivi: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).
Pentru prepararea agarului de ciocolată se prepară un mediu de concentrație standard amestecând 3,6 g de pulbere în 100 ml apă distilată. Se sterilizează, se adaugă până la 5% (v/v) sânge defibrinat steril și se încălzește mediul la 80°C timp de 10 minute.
Principiul și evaluarea rezultatului:Acest agar suplimentat cu sânge sau hemoglobină și alți aditivi este recomandat pentru izolarea selectivă și cultivarea microorganismelor pretențioase precum gonococii și Haemophilus influenzae. Johnston a dezvoltat agar-ciocolată care ar putea crește în 24 de ore. Neisseria gonorrhoeae(1). Mai târziu, alți autori (2) au îmbunătățit mediul prin introducerea hemoglobinei în compoziția sa.
Agarul conține o peptonă specială - o sursă de nutrienți pentru microorganisme. Amidonul neutralizează substanțele toxice formate de Neisseria, iar fosfații contracarează schimbarea pH-ului rezultată din formarea aminelor, care pot afecta și creșterea și viabilitatea microorganismelor. Hemoglobina servește ca sursă de factor X pentru bacteriile hemofile. Un alt aditiv îmbogățește mediul cu factor V (NAD, nikoninamidă adenin dinucleotidă), necesar pentru Haemophilus influenzae, precum și cu aminoacizi, vitamine, ioni de fier etc., care stimulează creșterea neisseria patogenă.
Nu folosiți tampoane de bumbac pentru a colecta materialul. Semănatul se efectuează imediat după selectarea materialului. Trebuie făcut astfel încât să existe zone de creștere densă și rară. Semănatul se incubează la 37°C într-o atmosferă de 5-10% dioxid de carbon și 70% umiditate. Toate coloniile suspecte trebuie verificate prin teste biochimice și/sau serologice.
Controlul calității: Aspectul pulberii:Pulbere omogenă, cu curgere liberă, galben deschis.
Densitate medie finită:Se formează un mediu, care corespunde ca densitate unui gel de agar 1,0%.
Culoarea și transparența mediului finit:Baza mediului este galben deschis, transparentă sau ușor opalescentă. După adăugarea hemoglobinei, mediul devine maro ciocolată și opac dacă se formează un gel în cutiile Petri.
Aciditatea mediului:La 25°C, o soluţie apoasă (3,6% g/v) are un pH de 7,2 ± 0,2.
Proprietăți culturale:Caracteristicile de creștere ale tulpinii de referință după 40-48 ore la 35-37°C pe agar ciocolată preparat pe această bază, în prezența a 5-10% dioxid de carbon și 70% umiditate în atmosferă.
Metodele de laborator sunt utilizate pe scară largă în diagnosticul bolilor cu transmitere sexuală ale sistemului genito-urinar: gonoree, sifilis, tricomoniază etc. Prezența bolii necesită măsuri de identificare a cauzei infecției.
Mediul nutritiv „SVG” este destinat izolării și cultivării gonococilor în studiul materialului de la un pacient. Fiecare kit este conceput pentru a prepara 110 ml de mediu gonococic gata de utilizare.
Setați compozițiaUn set pentru obținerea unui mediu nutritiv trebuie păstrat la o temperatură de 2 - 8 ° C timp de cel mult 12 luni. Mediul nutritiv solid poate fi păstrat în eprubete sau vase Petri timp de cel mult 7 zile. Setul pentru prepararea unui mediu nutritiv include:
- bază: agar, extract de drojdie, peptonă, amidon, săruri;
- aditiv selectiv: coenzime, lizat eritrocitar, antifungice, antibiotice, zaharuri;
- instrucțiuni de utilizare a trusei.
Metodologia include mai multe etape, fiecare dintre ele trebuie realizată în conformitate cu anumite cerințe. După finalizarea tuturor etapelor de diagnosticare a bolii folosind metoda de cultivare a agentului patogen pe mediul gonococic, rezultatele sunt înregistrate după 24 de ore, 48 de ore și 72 de ore. În gonoreea acută, creșterea gonococului se observă în prima zi, în gonoreea cronică - până la 72 de ore.
Prepararea soluției de bază a mediului pentru diagnosticul cultural se realizează prin turnarea bazei într-un recipient care conține apă distilată (100 ml) pentru umflarea ulterioară. Suspensia rezultată se pune într-o baie de apă și se agită periodic până când baza este complet dizolvată, apoi soluția se fierbe timp de 2 minute. O soluție de aditiv selectiv se prepară prin dizolvarea acesteia în apă distilată (10 ml) cu agitare.
Mediul nutritiv gata se formează prin adăugarea soluției de aditiv selectiv la soluția de bază. Mediul rezultat este turnat în vase Petri sterile. Înainte de testare, mediul gonococic trebuie menținut timp de o oră la o temperatură de 37 ° C. Apoi materialul este însămânțat în conformitate cu ordinul Ministerului Sănătății „Cu privire la unificarea metodelor de cercetare microbiologică (bacteriologică) utilizate în laboratoarele de diagnostic clinic ale instituțiilor medicale”.
Pret la cerere
Puteți adăuga un articol în coșul de cumpărături specificând cantitatea
Producător: Institutul de Cercetare de Epidemiologie și Microbiologie FBUN, numit după Pasteur
Țara Rusia
Unitate unitate: set
Tip ambalaj: cutie de carton
Cod furnizor:
Descriere
Un set de reactivi pentru izolarea gonococilor prin metoda culturală în studiul materialului clinic de la pacienții cu boli inflamatorii ale sistemului genito-urinar. Conceput pentru a prepara 110 ml de mediu nutritiv solid, gata de utilizare
Scop functional
Componentele trusei GHS oferă condiții optime pentru creșterea Neisseria gonorrhoeae la cantitățile necesare pentru a forma colonii vizibile, iar aditivul selectiv inhibă creșterea protozoarelor, ciupercilor și a majorității altor flore asociate potențial conținute în probă.
Metodologia include mai multe etape, fiecare dintre ele trebuie realizată în conformitate cu anumite cerințe. După finalizarea tuturor etapelor de diagnosticare a bolii folosind metoda de cultivare a agentului patogen pe mediul gonococic, se face o înregistrare vizuală a rezultatelor după 18-24 de ore, 48 și 72 de ore. Sunt dezvăluite colonii rotunde de culoare gri deschis, ușor tulburi, tipice gonococilor. În gonoreea acută, creșterea gonococului se observă în prima zi, în gonoreea cronică - până la 72 de ore. Rezultatul este considerat negativ dacă nu există creștere după 7 zile de incubație.
Setați compoziția
1. Baza mediului nutritiv, uscat - 4,1 g x 1 sticlă;
agar, extract de drojdie, peptonă, amidon, săruri;
Aspect: pulbere higroscopică galben deschis;
2. Aditiv selectiv, liofilizat - 1 flacon;
coenzime, lizat eritrocitar, antifungice, antibiotice, zaharuri;
Aspect: liofilizat roz-bej.
Mediul preparat este limpede, de culoare galben deschis, cu ușoară opalescență, se admite puțin sediment.
pH 7,2- 7,4
Formular de eliberare: într-o cutie de carton împreună cu instrucțiuni de utilizare.
Conditii de pastrare: la o temperatura de +2...8°C timp de cel mult 12 luni, este acceptabila pastrarea la o temperatura de pana la +25°C timp de cel mult 2 saptamani.
Mediul nutritiv gata poate fi păstrat în eprubete sau vase Petri timp de cel mult 7 zile.
Înregistrat în Roszdravnadzor
Neisseria gonorrhoeae este un membru al familiei Neisseriaceae, genul Neisseria. Gonococii au fost descoperiți de Neisser în 1879 și întreaga familie poartă numele lui.
Morfologie. Gonococii sunt diplococi alcătuiți din doi coci în formă de boabe așezați cu laturile concave unul față de celălalt (amintesc de boabele de cafea). Dimensiunea gonococilor este de 1,2-1,3 × 0,7-0,8 μm. Sunt polimorfe; alături de cele mari, există bacterii foarte mici, în formă de L, în formă neregulată. Gonococii sunt imobili și nu au spori. O substanță asemănătoare capsulei se găsește în materialul patologic (puroi). Gram-negativ. Sub influența medicamentelor și a altor substanțe, acestea se schimbă rapid: apar forme gram-pozitive. În materialul patologic, ele sunt localizate intracelular (într-un leucocit), dar pot fi în afara celulei. Poate fi sub formă de coci individuali (vezi Fig. 4).
Cultivare. Gonococii sunt aerobi. Foarte solicitant cu mediile nutritive. Ele cresc pe medii care conțin proteine native (umane) - sânge, ser, la o temperatură de 37 ° C și un pH de 7,2-7,4. Suporturile trebuie să fie proaspăt preparate și umede. Semănatul trebuie făcut imediat după preluarea materialului. Pe mediu seric, gonococii formează colonii mici de 1-2 mm, transparente, strălucitoare cu margini netede, asemănătoare cu picăturile de rouă. Pe mediul sanguin nu se administrează hemoliză. În bulionul de zer dau o ușoară turbiditate și o peliculă care se așează pe fundul tubului. Cu o creștere slabă după 24 de ore, culturile sunt lăsate într-un termostat pentru a doua zi.
proprietăți enzimatice. Proprietățile zaharolitice sunt slab exprimate. Gonococii descompun un singur zahăr - glucoza cu formarea de acid. Nu au proprietăți proteolitice.
Formarea toxinelor. În peretele celular al gonococilor există o substanță toxică - lipopolizaharidă (puțin studiată).
Structura antigenică. Structura antigenică este eterogenă și se modifică ușor sub influența factorilor de mediu. Nu există încă o împărțire general acceptată a gonococilor în serovarii și serotipuri.
Rezistenta la factorii de mediu. În mediul extern, gonococii nu sunt foarte stabili. La o temperatură de 56-60 ° C, ei mor. La o temperatură de 40 ° C, viabilitatea lor scade brusc. Temperaturile scăzute și uscarea le distrug rapid. Dar în puroi rămân până la 24 de ore.Soluții dezinfectante - soluție 1% de fenol, sublimează 1:1000 ucide gonococii în câteva minute. Gonococii sunt deosebit de sensibili la sarurile de argint - o solutie de 1% de azotat de argint le distruge imediat. Razele UV îi distrug în câteva minute.
Susceptibilitatea animalelor. Animalele nu sunt sensibile la gonococ. Cu toate acestea, administrarea intraperitoneală a toxinei gonococice la șoarecii albi provoacă moartea acestora.
Surse de infecție. O persoană cu gonoree.
căi de transmisie. Contact-casnic (sexual), mai rar prin obiecte contaminate (prosop, bureti etc.).
Boli la oameni. Gonoree și blennoree.
Patogeneza. Gazda naturală a gonococilor este o persoană bolnavă. Gonococii pătrund prin membranele mucoase ale uretrei (la femei - uretra și colul uterin). Factorul de patogenitate al gonococilor este prezența pili în ei, care, conectându-se cu microvilozitățile epiteliului cilindric, contribuie la pătrunderea gonococului în celula epitelială, provocând un proces inflamator acut în membrana mucoasă.
Din punct de vedere clinic, gonoreea se manifesta prin durere in timpul urinarii, evacuare de puroi din uretra si vagin. Boala este acută, dar uneori devine cronică. Gonococii pot provoca conjunctivită gonoreică - blenoree (inflamația purulentă a mucoasei oculare la nou-născuți). Gonococii se răspândesc rar din uretră către alte organe, dar uneori pot provoca artrită, endocardită etc.
Imunitate. Nu există rezistență naturală la gonococi. De asemenea, boala transferată nu creează imunitate. Fagocitoza observată este incompletă.
Prevenirea. Educație sanitară. Creșterea nivelului cultural și igienic. Nu există o prevenire specifică. Pentru prevenirea blennoreei, copiii imediat după naștere trebuie să fie injectați în sacul conjunctival 1-2 picături dintr-o soluție 30% de albucid.
Tratament . Antibiotice (penicilină, bicilină, streptomicina etc.). De asemenea, se folosesc medicamente sulfatice. În forma cronică, se utilizează un vaccin gonococic.
Întrebări de control1. Descrieți proprietățile morfologice ale gonococilor.
2. Care sunt activitatea enzimatică și formarea toxinelor gonococilor?
3. Care este rezistența gonococilor. La ce medicament sunt gonococii deosebit de sensibili?
4. Ce boli sunt cauzate de gonococi și patogeneza lor.
Cercetare microbiologicăScopul studiului: detectarea gonococilor și a anticorpilor anti-gonococi.
Material de cercetare
1. Membrană mucoasă detașabilă a uretrei la bărbați.
2. Secreția mucoasei uretrei și a colului uterin la femei.
3. Secreții purulente din ochi.
4. Sânge pentru a obține ser.
Notă. Pentru examenul bacterioscopic și bacteriologic, materialul se preia: 1) înainte de începerea tratamentului cu antibiotice: 2) nu mai devreme de 10 zile de la terminarea tratamentului cu antibiotice; 3) nu mai devreme de 2 ore de la ultima urinare; 4) nu mai devreme de 2 ore după dușuri.
Metode de cercetare de bază
1. Microscopic (folosit în principal în forme acute).
2. Microbiologic.
3. Serologic.
Progresul cercetării
A doua zi de cercetare
Scoateți recoltele din termostat și vizualizați-le. Studiind coloniile. Ei fac frotiuri. În prezența diplococilor gram negativi suspecti, coloniile sunt subcultivate pe mediu oblic în eprubete (mediul trebuie să fie proaspăt preparat și să conțină o cantitate suficientă de condensat) și se prelevează o probă pentru oxidază. Pentru a face acest lucru, se aplică o picătură de 1% soluție de dimetil parafenilendiamină pe colonie cu o pipetă, coloniile își schimbă culoarea de la maro închis la negru.
A treia zi de cercetare
Culturile se scot din termostat, se iau tampoane din agar-agar, se colorează cu Gram și se microscopează. Inoculat pe mediu Hiss (lactoză, glucoză, manitol și maltoză). Acești carbohidrați ar trebui să conțină 30% din ser din sânge. Tuburile inoculate sunt plasate într-un termostat.
A patra zi de cercetare
Scoateți eprubetele din termostat, în absența creșterii, lăsați-le în termostat încă 1-2 zile. În prezența creșterii, rezultatele sunt luate în considerare (Tabelul 28).
Diagnosticul serologic
a treia săptămână de boală. În cursul cronic al bolii și în cazurile îndoielnice, RSK este plasat împreună cu serul pacientului (vezi capitolul 12). Ca antigen, se folosește o cultură ucisă de gonococi, care este preparată în condiții industriale. Puteți aplica reacția de hemaglutinare indirectă (vezi capitolul 12).
Întrebări de control
1. Ce material este folosit pentru detectarea gonococilor și cum se obține?
2. Cât timp după urinare (sau dusuri la femei) poate fi luat material pentru cercetare?
3. Ce metodă de cercetare este cea principală pentru gonoreea acută și ce metodă pentru gonoreea cronică?
4. Când și ce fel de reacție serologică se administrează pentru suspiciunea de gonoree?
5. Din ce microorganisme este necesar să se diferențieze gonococii?
Ia drogul de la profesor. Examinează-l și desenează gonococii localizați în interiorul și în exteriorul leucocitei pe o colorație Gram.
Medii nutritive
Mediul gălbenușului. La 100 ml de MPA din carne de iepure adăugați 15 ml gălbenuș (ou proaspăt de pui), 6 ml indicator roșu fenol, 1,5 ml zahăr dizolvat în 1 ml apă distilată sterilă.
Mediu nutritiv ascita-agar. La filtratul bulionului preparat din carne de iepure se adaugă 2% agar, 1% peptonă și 0,5% clorură de sodiu. Se încălzește până când agarul se dizolvă, se stabilește pH-ul la 7,4-7,5, se alcalinizează cu hidroxid de sodiu 20%. Mediul este adus la fierbere, filtrat, turnat în flacoane sterile și sterilizat într-o autoclavă timp de 15 minute la 115°C.
Rețete pentru medii nutritive ascitice (MPA pH 7,4-7,5).
1) apă de carne din carne de iepure sau inimi de taur - 100 ml
hidrolizat de cazeină - 2 ml
autolizat de drojdie - 2 ml
ser de sânge de bovine - 20 ml
2) apă de carne din carne de iepure sau inimioare de taur - 100 ml
soluție 5% de hemohidrolizat - 2 ml
autolizat de drojdie - 2 ml
ser bovin - 20 ml
3) apă de carne din carne de iepure sau inimioare de taur - 100 ml
gălbenuș de ou de pui - 10 ml
ser de sânge de bovine - 20 ml
Creșterea gonococilor pe aceste medii este abundentă. Coloniile de gonococ pot fi detectate printr-un test de oxidază, care devine roșu în negru.
Eficacitatea metodei de cercetare bacteriologică în
în mare măsură determinată de calitatea mediilor nutritive. ÎN
În țara noastră, două tipuri sunt cele mai testate și utilizate
medii nutritive: medii nutritive ascite-agar și medii nutritive non-ascitice.
Ambele medii se bazează pe agar pentonic de carne (MPA) din carne
iepuri sau inimi proaspete de bovine. Metoda de preparare a acestuia
este după cum urmează. Carnea de iepure este eliberată de grăsime și
tendoane, trecute printr-o mașină de tocat carne sau tăiate cu un cuțit,
cântărit, umplut cu volumul dublu de apă de la robinet și în aceasta
forma se lasa la frigider la 4° o zi pentru extragere.
Apoi masa se încălzește până la fierbere, se fierbe timp de 10 minute, se răcește și
filtrat prin pânză de brânză. La filtrat se adaugă 2% agar-agar, 1%
peptonă și clorură de sodiu 0,5%, încălzite până se dizolvă agar-agar
și setați pH-ul = 7,5-7,6 (alcalinizarea se realizează cu 20%
soluție de hidroxid de sodiu). Mediul se aduce la fierbere, se filtrează
printr-un filtru din tifon de bumbac, se toarnă în flacoane sterile sau
baloane și sterilizate în autoclavă timp de 15-20 minute la 0,5 atmosfere
manometru (112ё).
Tehnica de preparare a MPA din inimi proaspete de bovine este aceeași ca
urmează doar fierberea unei mase de inimi zdrobite în apă
produce 20 de minute în loc de 10.
Este posibil să se pregătească baza mediului nutritiv fără peptonă.
În acest caz, se utilizează metoda de mai sus pentru prepararea MPA, dar
peptona este exclusă din compoziția sa, carnea de iepure tocată este fiartă
5 minute în loc de 10 și sterilizați mediul într-o autoclavă timp de 10
minute la 0,8 atmosfere pe un manometru (117ё).
Agar ascită
Lichidul ascitic trebuie obținut de la pacienții cu
ascită din cauza insuficienței cardiace și
produs printr-un trocar într-o sticlă sterilă și adăugați 5% la acesta
cloroform pentru anestezie. Timp de 10 zile, lichidul este amestecat cu
cloroform prin rotirea sticlei, apoi lăsați-l la
temperatura camerei până când cloroformul se depune complet pe fundul sticlei
și limpezirea lichidului. După aceea, după cum este necesar, transparent
lichid ascitic se toarnă în baloane sterile de 50 ml cu
dopuri de bumbac și zilnic timp de 3 zile se pun în ele
baie de apă la 56 ° timp de 1 oră pentru a se evapora cloroformul
printr-un dop de bumbac. După verificarea lichidului ascitic pentru
sterilitate poate fi folosit pentru îmbogățire
mediu nutritiv pentru izolarea gonococului la o concentrație de 1/3 și 1/4
volumul mediului, care este determinat empiric.
Rețete media ascitice
1. MPA din carne de iepure sau inimi proaspete de bovine
(рН=7,4-7,5) - 100 ml, hidrolizat de cazeină pentru parenteral
nutriție proteică - 2 ml, autolizat de drojdie - 2 ml, zer
sânge de bovine - 20 ml (miercuri KDS-1).
2. MPA din carne de iepure sau inimi proaspete de bovine
(рН=7,4-7,5) - 100 ml, soluție de hemohidrolizat 5% - 2 ml,
autolizat de drojdie - 2 ml, ser din sânge bovin
bovine - 20 ml (mediu GDS-2).
3. MPA din carne de iepure sau inimi proaspete de bovine
(рН=7,4-7,5) - 100 ml, mediu 199 pentru culturi de țesuturi fără
antibiotice - 20 ml, autolizat de drojdie - 2 ml, ser de sânge
bovine - 20 ml (mediu 199-SDS).
4. MPA din carne de iepure sau inimi proaspete de bovine
(рН=7,4-7,5) - 100 ml, gălbenuș de ou de pui proaspăt - 10 ml,
ser de sânge de bovine - 20 ml (miercuri ZhS).
Gălbenușul de ou se obține steril din ouă de găină dietetice.
imediat înainte de prepararea medie. Pentru aceasta,
pretratată cu alcool, coaja se deschide cu un steril
cu penseta si continutul oului se toarna intr-o palnie sterila. După
după ce proteina curge afară, gălbenușul rămas în pâlnie este transferat în
se iau vase sterile si o pipeta de masurare necesare pt
producerea volumului mediu nutritiv al gălbenușului.
Prepararea autolizatului de drojdie este după cum urmează.
Drojdia de panificație se zdrobește și se pune într-o sticlă care depășește
volum luat drojdie de 4 - 5 ori, și lăsați pentru autoliză pentru două
zile într-un dulap de uscare sau termostat la 60 °. Apoi gros
masa maro este diluată cu un volum triplu de apă caldă de la robinet
apa, amestecati bine si centrifugeti de doua ori timp de 10 minute la
1000 rpm (până când lichidul devine limpede). supernatant
lichidul se scurge, se adaugă clorură de sodiu 0,5%, se ajustează
pH la 7,4-7,5 și autoclavat timp de 30 de minute la 1 atmosferă pentru
manometru (120ё). Păstrați în recipiente mici la frigider
Autolizatul de drojdie poate fi înlocuit cu o soluție de 1,5%.
extract de drojdie furajeră (EKD) în aceeași cantitate (2 ml) 1,5%
Soluția EPC este preparată în laborator din EPC uscat prin dizolvarea acesteia în
apă distilată sterilă. Pregătit astfel
extractul lichid este turnat în eprubete sterile și sterilizat în
se autoclavează la 0,5 barg timp de 20 de minute.
În toate mediile nutritive de mai sus, ser de sânge
vitele pot fi înlocuite cu native normale
ser pentru medii nutritive bacteriologice, care
este același ser, dar cu adaos de conservant.
Prepararea mediului îmbogățit
MPA, situat într-un flacon sau un balon, este topit în apă
baie, răcită la 56-58ё și adăugați ingrediente la ea
proporțiile indicate mai devreme în rețete. Îmbogățit cu MPA la 3-3,5
ml se toarnă în eprubete sterile, mediul este înclinat și umezit
0,5 ml bulion steril de carne-peptonă sau izotonic
soluție de clorură de sodiu după ce se întărește. Pentru verificare
pentru sterilitate mediul se pune intr-un termostat la 35-37o pe zi.
Toate mediile non-ascitice de mai sus, cu excepția oului, sunt transparente,
este ușor să diferențiezi coloniile de microorganisme pe ele. Miercuri,
îmbogățit cu ou, diferă prin turbiditate, este galben, crescut pe
coloniile ei, în special gonococii, sunt puțin distinse. Cu toate acestea, creșterea
gonococul este abundent pe acest mediu și coloniile sale pot fi ușor
detectat prin tratament de creștere cu soluție 1%.
dimetil parafenilendiamină sau alt reactiv oxidază,
care colorează coloniile de gonococ în roșu, bine
contrastând cu fundalul galben al mediului. Utilizarea gălbenușului
medii fără tratament de creștere microbiană cu un reactiv de oxidază
Calitatea fiecărui lot nou de mediu de cultură de laborator
producția trebuie verificată prin însămânțare pe ea
material patologic de la pacienţi la care bacterioscopic
s-au găsit gonococi.
Perioada de valabilitate a MPA într-un frigider la 4o nu trebuie să depășească 1
lună, mediu îmbogățit - 7 zile.
Datorită faptului că pentru mediul de mai sus este posibilă o perioadă scurtă de timp
depozitare, a dezvoltat o metodă de fabricație
mediu nutritiv liofilizat fără ascita, care este sub
intitulat „Mediu de cultură de izolare gonococică, uscat”
disponibil în două sticle: partea I (bază medie) și partea II
(fortificatori). Pregătirea mediului de lucru în partea I
se adaugă 100 ml apă distilată sterilă și se încălzește
într-o baie de apă la 100 ° până când conținutul flaconului este complet dizolvat
(în 30 de minute). Timp suplimentar pentru a rezista la mediul înconjurător în apă
baie nu ar trebui să fie, tk. aceasta îi reduce calitatea. Partea a II-a include
24 ml apă distilată sterilă (îmbogățire prin dizolvare
substanțe apare imediat). Apoi, sub rezerva condițiilor
sterilitate, partea II este transferată în partea I răcită la 56°,
amestecat, turnat în eprubete sterile, teșit și
hidratați așa cum este descris anterior.
Mediul uscat este preparat din carne de iepure sau inimi de taur,
pe lângă cele enumerate în rețeta 1 (KDS-1 mediu) substanțe de îmbogățire
conține acid orotic la o concentrație de 1 µg/ml. miercuri
de înaltă calitate, convenabil pentru utilizare în bacteriologic
laboratoare, deoarece pentru a transforma un mediu uscat într-unul de lucru, este necesar
numai apă distilată sterilă.
Utilizarea unui mediu nutritiv fără ascită cu adaos
antibiotice si acid orotic da rezultate bune cu
diagnostic bacteriologic, inclusiv extragenital
gonoree: gonoree a amigdalelor și faringelui, rectului. Antibiotice
adăugat pentru a inhiba creșterea gonococului concomitent
flora bacteriană, care crește rata de creștere a gonococului,
facilitează detectarea coloniilor sale unice și izolarea în stare pură
cultură. Se adaugă 20,0 U/ml sulfat de polimixină M și 6,2 U/ml
sulfat de ristomicină; în loc de acesta din urmă, puteți folosi
clorhidrat de lincomicină - 2 μg / ml. Acidul orotic este injectat în
compoziția mediului nutritiv în cantitate de 1 µg/ml.
Pentru a face acest lucru, luați o probă de acid orotic 1 mg (1000 μg) și
diluat în 1,0 ml apă distilată sterilă (se obține
soluție de lucru care conține 1000 mcg care poate fi stocată în
frigider timp de 10 zile) și sterilizat în baie de apă 15
minute, apoi luați 0,1 ml din soluția rezultată și adăugați la
100 ml mediu nutritiv îmbogățit. Mediu cu antibiotice
trebuie utilizat concomitent cu mediu fără antibiotice
(o eprubetă cu mediul cu antibiotice, cealaltă fără ele), pentru că
deși rare, există tulpini de gonococ care sunt sensibile la
antibioticele de mai sus.
Mediu de stocare (transport)
Compoziția mediului de conservare: 1) 1 litru de apă distilată,
fără clor, 30 g agar-agar; 2) 900 ml distilat
apă fără clor, 2 ml acid tioglicolic, 12 ml 1M
soluție de hidroxid de sodiu, 100 ml soluție apoasă de sodiu 20%.
fosfat monosubstituit, 20 ml soluție de clorură 1%.
calciu. Ultimul amestec (2) se adaugă la cea proaspăt preparată
agar (1), se ajustează pH-ul la 7,3-7,4, se toarnă 10 ml de mediu în
eprubete sterile, sterilizate cu abur curgător timp de 1 oră.
Tampoane de bumbac pe bastoane de lemn sau tije din
oțel inoxidabil cu diametrul de aproximativ 2 mm, montat în vată
dopuri, fierte timp de 20 minute în tampon fosfat, pH=7,4, și
se impregnează timp de 24 de ore într-o suspensie apoasă 1% fin
cărbune zdrobit. După uscare, tampoane de bumbac
corect, introduceți în eprubete bacteriologice
de diametrul corespunzător (egal cu diametrul eprubetelor cu mediul) și
sterilizat în autoclavă timp de 20 de minute la 1 atmosferă (temperatura
Pentru prepararea tamponului fosfat, se prepară două soluții: 1
soluție - 28,4 g de sodiu se dizolvă în 1 litru de apă distilată
fosfat disubstituit (0,2 M); 2 soluție - în 1 l
apa distilată se dizolvă 27,8 g de acid citric (0,1 M).
Se amestecă 181,7 ml de soluție 1 și 18,3 ml de soluție 2.
Semănarea producției folosind mediul de salvare
se realizează după cum urmează. Doctor care examinează un pacient
scoate un tampon din eprubetă, îl introduce în focarul bolii pe
câteva secunde pentru înmuiere (puteți face mai multe
mișcări în sensul acelor de ceasornic și în sens invers acelor de ceasornic), îl îndepărtează fără atingere
obiectele din jur, într-o eprubetă cu mediu de conservare. peste
dop de bumbac, eprubeta este închisă cu un niplu de cauciuc. Înainte de expediere
material la laboratorul bacteriologic, culturile se păstrează la 4
la frigider pentru o perioadă minimă, dar nu mai mult de o zi. Simultan
se ia material patologic si se fac frotiuri pt
examen bacterioscopic, care sunt trimise la
laborator împreună cu cultura. în laboratorul bacteriologic
imediat după primirea tampoane cu material patologic
scoase din mediul de depozitare si se folosesc la inocularea la suprafata
mediu nutritiv înclinat în eprubete. Se face fiecare tampon
semănat pe mediu nutritiv în două eprubete. Semănat la suprafață
mediul nutritiv trebuie făcut în mișcări în zig-zag
de-a lungul suprafeței mediului prin rotirea tamponului. Dacă diametrul eprubetelor
mediul de conservare și mediu de creștere este similar, puteți tampona
după inoculare se lasă în a doua eprubetă în contact cu
mediu nutritiv. Culturile sunt plasate într-un termostat și cultivate la
36-37 ani într-un esicator. Trebuie avut în vedere faptul că atunci când utilizați
mediu de conservare, creșterea gonococului poate apărea mai târziu decât cu
însămânțarea directă a materialului patologic pe nutrient
Lucrul cu culturile
Gonococii pot fi cultivați în eprubete sau
vase Petri; Prima metodă oferă economii semnificative
mediu inconjurator. Pentru a crește procentul de însămânțare a gonococilor, însămânțați
mediile nutritive sunt plasate într-un termostat într-un esicator cu 20%
reacții dintre acidul sulfuric și bicarbonatul de sodiu: într-un desicator
cu un volum de 5 litri se pune un pahar cu 50 ml acid sulfuric 10%, in