Գոնոկոկի աճեցման համար սննդարար միջավայր. Գոնոկոկի մեկուսացման և աճեցման միջավայր Գոնորեայի պատվաստում աչքից

Արյունով, հեմոգլոբինով կամ այլ հավելումներով համալրված այս ագարը խորհուրդ է տրվում գոնոկոկի ընտրովի մեկուսացման համար:

Միացություն**:

** Կազմը ստուգված է և համապատասխանեցվում է անհրաժեշտ պարամետրերին

Խոհարարություն:

7,2 գ փոշին կասեցրեք 100 մլ թորած ջրի մեջ՝ կրկնակի ուժգնությամբ միջավայր պատրաստելու համար: Ջերմացրեք մինչև եռալ, որպեսզի մասնիկները ամբողջությամբ լուծվեն: Մանրէազերծել ավտոկլավով 1,1 ատմ (121°C) 15 րոպե: Հովացրեք մինչև 50°C և ասեպտիկ եղանակով ավելացրեք առանձին պատրաստված 100 մլ 2% ստերիլ հեմոգլոբինի լուծույթ (FD022) և GC հավելում (FD021): Մանրակրկիտ խառնել և լցնել Պետրիի ուտեստների մեջ։ Միջավայրին ընտրողական հատկություններ հաղորդելու համար կարող եք հակաբիոտիկներ ավելացնել հետևյալ հավելումներում ներառված՝ VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028):

Շոկոլադե ագարի պատրաստման համար պատրաստում են ստանդարտ կոնցենտրացիայի միջավայր՝ 3,6 գ փոշի խառնելով 100 մլ թորած ջրի մեջ: Մանրէազերծել, ավելացնել մինչև 5% (v/v) ստերիլ դեֆիբրինացված արյուն և ջերմացնել միջավայրը 80°C-ում 10 րոպե:

Արդյունքի սկզբունքը և գնահատումը.

Արյունով կամ հեմոգլոբինով և այլ հավելումներով համալրված այս ագարը խորհուրդ է տրվում ընտիր միկրոօրգանիզմների ընտրովի մեկուսացման և աճեցման համար, ինչպիսիք են gonococci-ը և Haemophilus influenzae-ն: Ջոնսթոնը մշակել է շոկոլադե ագար, որը կարող է աճել 24 ժամվա ընթացքում: Neisseria gonorrhoeae(1). Հետագայում այլ հեղինակներ (2) բարելավեցին միջավայրը՝ դրա բաղադրության մեջ ներմուծելով հեմոգլոբին։

Ագարը պարունակում է հատուկ պեպտոն՝ միկրոօրգանիզմների համար սննդանյութերի աղբյուր: Օսլան չեզոքացնում է Neisseria-ի կողմից ձևավորված թունավոր նյութերը, իսկ ֆոսֆատները հակազդում են ամինների ձևավորման արդյունքում pH-ի փոփոխությանը, ինչը կարող է նաև ազդել միկրոօրգանիզմների աճի և կենսունակության վրա: Հեմոգլոբինը ծառայում է որպես X գործոնի աղբյուր հեմոֆիլ բակտերիաների համար: Մեկ այլ հավելում միջավայրը հարստացնում է V գործոնով (NAD, նիկոնինամիդ ադենին դինուկլեոտիդ), որն անհրաժեշտ է Haemophilus influenzae-ի համար, ինչպես նաև ամինաթթուներով, վիտամիններով, երկաթի իոններով և այլն, ինչը խթանում է պաթոգեն նեյսերիաների աճը:

Նյութը հավաքելու համար մի օգտագործեք բամբակյա շվաբրեր: Ցանքն իրականացվում է նյութի ընտրությունից անմիջապես հետո։ Պետք է այնպես անել, որ խիտ ու հազվադեպ աճի գոտիներ լինեն։ Սերմնացանը ինկուբացնում են 37°C ջերմաստիճանում 5-10% ածխածնի երկօքսիդի և 70% խոնավության մթնոլորտում։ Բոլոր կասկածելի գաղութները պետք է ստուգվեն կենսաքիմիական և/կամ շճաբանական թեստերում:

Որակի հսկողություն. Փոշի տեսք.

Միատարր ազատ հոսող բաց դեղին փոշի:

Ավարտված միջին խտություն.

Ձևավորվում է միջավայր, որը խտությամբ համապատասխանում է 1,0% ագար գելին:

Պատրաստի միջավայրի գույնը և թափանցիկությունը.

Միջավայրի հիմքը բաց դեղին է, թափանցիկ կամ թեթևակի բաց գույնի: Հեմոգլոբինի ավելացումից հետո միջավայրը դառնում է շոկոլադե շագանակագույն և անթափանց, եթե Պետրիի ափսեների մեջ գել է գոյանում:

Շրջակա միջավայրի թթվայնությունը.

25°C-ում ջրային լուծույթը (3,6% w/v) ունի pH 7,2 ± 0,2:

Մշակութային հատկություններ.

Հղման շտամի աճի բնութագրերը 40-48 ժամ հետո 35-37°C ջերմաստիճանում այս հիման վրա պատրաստված շոկոլադե ագարի վրա, մթնոլորտում 5-10% ածխածնի երկօքսիդի և 70% խոնավության առկայության դեպքում:

Լաբորատոր մեթոդները լայնորեն կիրառվում են միզասեռական համակարգի սեռական ճանապարհով փոխանցվող հիվանդությունների ախտորոշման համար՝ գոնորեա, սիֆիլիս, տրիխոմոնիզ և այլն: Հիվանդության առկայությունը պահանջում է միջոցներ՝ վարակի պատճառը բացահայտելու համար:

Սննդային միջավայր «SVG» նախատեսված է հիվանդից նյութի ուսումնասիրության ժամանակ գոնոկոկի մեկուսացման և աճեցման համար: Յուրաքանչյուր հավաքածու նախատեսված է 110 մլ գոնոկոկային միջավայր պատրաստելու համար, պատրաստ օգտագործման համար:

Սահմանել կազմը

Սնուցող միջավայր ստանալու համար նախատեսված հավաքածուն պետք է պահվի 2 - 8 ° C ջերմաստիճանում ոչ ավելի, քան 12 ամիս: Պինդ սննդային միջավայրը կարող է պահվել փորձանոթներում կամ Պետրի ափսեներում ոչ ավելի, քան 7 օր: Սնուցող միջավայրի պատրաստման հավաքածուն ներառում է.

• հիմք՝ ագար, խմորիչի քաղվածք, պեպտոն, օսլա, աղեր;
• ընտրովի հավելում` կոենզիմներ, էրիթրոցիտների լիզատ, հակասնկային միջոցներ, հակաբիոտիկներ, շաքարներ;
• հավաքածուի օգտագործման հրահանգներ.

Մեթոդաբանությունը

Մեթոդաբանությունը ներառում է մի քանի փուլ, որոնցից յուրաքանչյուրը պետք է իրականացվի որոշակի պահանջներին համապատասխան: Հիվանդության ախտորոշման բոլոր փուլերի ավարտից հետո՝ օգտագործելով պաթոգենը գոնոկոկային միջավայրի վրա մշակելու մեթոդը, արդյունքները գրանցվում են 24 ժամ, 48 ժամ և 72 ժամ հետո: Սուր գոնորեայի ժամանակ գոնոկոկի աճը նշվում է առաջին օրվա ընթացքում, քրոնիկական գոնորեայի դեպքում՝ մինչև 72 ժամ։

Մշակութային ախտորոշման համար միջավայրի բազային լուծույթի պատրաստումն իրականացվում է հիմքը լցնելով թորած ջուր պարունակող տարայի մեջ (100 մլ) հետագա այտուցման համար։ Ստացված կախոցը տեղադրվում է ջրային բաղնիքում և պարբերաբար հարում, մինչև հիմքն ամբողջությամբ լուծարվի, ապա լուծույթը եռացնում են 2 րոպե։ Ընտրովի հավելումների լուծույթ են պատրաստվում՝ խառնելով այն լուծելով թորած ջրի մեջ (10 մլ):

Պատրաստ սնուցող միջավայրը ձևավորվում է բազային լուծույթին ավելացնելով ընտրովի հավելանյութի լուծույթը: Ստացված միջավայրը լցնում են ստերիլ Պետրի ափսեների մեջ։ Փորձարկումից առաջ գոնոկոկային միջավայրը պետք է պահպանվի մեկ ժամ 37 ° C ջերմաստիճանում: Այնուհետև նյութը ցանում է առողջապահության նախարարության «Բժշկական հաստատությունների կլինիկական ախտորոշիչ լաբորատորիաներում կիրառվող մանրէաբանական (մանրէաբանական) հետազոտական ​​մեթոդները միավորելու մասին» հրամանի համաձայն։

Գինը ըստ ցանկության

Դուք կարող եք ապրանք ավելացնել ձեր զամբյուղում՝ նշելով քանակությունը

Արտադրող՝ FBUN Պաստերի անվան համաճարակաբանության և մանրէաբանության գիտահետազոտական ​​ինստիտուտ

Երկիր Ռուսաստան

Միավոր միավոր՝ հավաքածու

Փաթեթավորման տեսակը՝ ստվարաթղթե տուփ

Վաճառողի կոդը.

Նկարագրություն

Գոնոկոկի մշակութային մեթոդով մեկուսացման ռեակտիվների մի շարք միզասեռական համակարգի բորբոքային հիվանդություններ ունեցող հիվանդների կլինիկական նյութի ուսումնասիրության ժամանակ: Նախատեսված է 110 մլ պինդ սննդանյութ պատրաստելու համար, պատրաստ օգտագործման համար

Ֆունկցիոնալ նպատակ

GHS փաթեթի բաղադրիչները օպտիմալ պայմաններ են ապահովում Neisseria gonorrhoeae-ի աճի համար այնքան, որքան անհրաժեշտ է տեսանելի գաղութներ ձևավորելու համար, և ընտրովի հավելումը արգելակում է նախակենդանիների, սնկերի և այլ հարակից ֆլորայի աճը, որոնք պոտենցիալ պարունակվում են նմուշում:
Մեթոդաբանությունը ներառում է մի քանի փուլ, որոնցից յուրաքանչյուրը պետք է իրականացվի որոշակի պահանջներին համապատասխան: Հիվանդության ախտորոշման բոլոր փուլերի ավարտից հետո՝ օգտագործելով պաթոգենը գոնոկոկային միջավայրի վրա մշակելու մեթոդը, արդյունքների տեսողական արձանագրությունը կատարվում է 18-24 ժամ, 48 և 72 ժամ հետո: Բացահայտվում են գոնոկոկին բնորոշ բաց մոխրագույն, մի փոքր ամպամած կլոր գաղութներ։ Սուր գոնորեայի ժամանակ գոնոկոկի աճը նշվում է առաջին օրվա ընթացքում, քրոնիկական գոնորեայի դեպքում՝ մինչև 72 ժամ։ Արդյունքը համարվում է բացասական, եթե ինկուբացիայից 7 օր հետո աճ չկա։

Տեխնիկական պայմաններ

Սահմանել կազմը
1. Սնուցող միջավայրի հիմքը՝ չոր - 4,1 գ x 1 շիշ;
ագար, խմորիչի քաղվածք, պեպտոն, օսլա, աղեր;
Արտաքին տեսք՝ բաց դեղին հիգրոսկոպիկ փոշի;
2. Ընտրովի հավելում, լիոֆիլացված - 1 սրվակ;
կոֆերմենտներ, էրիթրոցիտների լիզատ, հակասնկային միջոցներ, հակաբիոտիկներ, շաքարներ;
Արտաքին տեսք՝ վարդագույն-բեժ լիոֆիլիզատ:
Պատրաստված միջավայրը թափանցիկ է, բաց դեղին գույնի, թեթև թափանցիկությամբ, թույլատրվում է թեթև նստվածք:
pH 7,2- 7,4
Թողարկման ձևը՝ ստվարաթղթե տուփի մեջ՝ օգտագործման ցուցումների հետ միասին:
Պահպանման պայմանները՝ +2...8°C ջերմաստիճանում 12 ամսից ոչ ավել, ընդունելի է մինչև +25°C ջերմաստիճանում 2 շաբաթից ոչ ավել պահպանումը։
Պատրաստի սնուցող միջավայրը կարելի է պահել փորձանոթներում կամ Պետրի ափսեներում ոչ ավելի, քան 7 օր:
Գրանցված է Ռոսդրավնաձորում

Neisseria gonorrhoeae-ն Neisseriaceae ընտանիքի, Neisseria ցեղի ներկայացուցիչ է։ Գոնոկոկը հայտնաբերվել է Նայսերի կողմից 1879 թվականին և ամբողջ ընտանիքը կրում է նրա անունը։

Մորֆոլոգիա. Գոնոկոկները դիպլոկոկներ են, որոնք կազմված են երկու հատիկաձև կոկիկներից, որոնք ընկած են գոգավոր կողքերով միմյանց (սուրճի հատիկներ հիշեցնող): Գոնոկոկի չափը 1,2-1,3 × 0,7-0,8 մկմ է: Դրանք պոլիմորֆ են, խոշորների հետ մեկտեղ կան շատ փոքր, անկանոն ձևի L-ման բակտերիաներ։ Գոնոկոկները անշարժ են և չունեն սպոր։ Պաթոլոգիական նյութում (թարախ) հայտնաբերվում է պարկուճանման նյութ։ Գրամ-բացասական. Դեղորայքային և այլ նյութերի ազդեցության տակ արագ փոխվում են՝ առաջանում են գրամ դրական ձևեր։ Պաթոլոգիական նյութում դրանք գտնվում են ներբջջային (լեյկոցիտում), բայց կարող են լինել բջիջից դուրս։ Կարող է լինել առանձին կոկիկների տեսքով (տես նկ. 4):

Մշակություն. Գոնոկոկները աերոբներ են: Շատ պահանջկոտ է սննդարար կրիչների նկատմամբ: Նրանք աճում են բնածին սպիտակուց (մարդ) պարունակող միջավայրերի վրա՝ արյուն, շիճուկ, 37°C ջերմաստիճանի և 7,2-7,4 pH-ի վրա: Մեդիան պետք է լինի թարմ և խոնավ: Ցանքը պետք է կատարել նյութը վերցնելուց անմիջապես հետո։ Շիճուկային միջավայրի վրա գոնոկոկները կազմում են 1-2 մմ փոքր գաղութներ, թափանցիկ, փայլուն, հարթ եզրերով, հիշեցնող ցողի կաթիլներ: Արյան միջավայրի վրա հեմոլիզ չի տրվում: Շիճուկի արգանակում նրանք տալիս են մի փոքր պղտորություն և թաղանթ, որը նստում է խողովակի հատակին: 24 ժամ հետո վատ աճի դեպքում մշակաբույսերը երկրորդ օրը մնում են թերմոստատում:

ֆերմենտային հատկություններ. Սախարոլիտիկ հատկությունները թույլ են արտահայտված։ Գոնոկոկները քայքայում են միայն մեկ շաքար՝ գլյուկոզա՝ թթվի ձևավորմամբ։ Նրանք չունեն պրոտեոլիտիկ հատկություններ։

Տոքսինների ձևավորում. Գոնոկոկի բջջային պատում կա թունավոր նյութ՝ լիպոպոլիսաքարիդ (քիչ ուսումնասիրված):

Հակագենային կառուցվածքը. Հակագենային կառուցվածքը տարասեռ է և հեշտությամբ փոփոխվում է շրջակա միջավայրի գործոնների ազդեցության տակ: Դեռևս չկա գոնոկոկների ընդհանուր ընդունված բաժանում սերովարների և սերոտիպերի։

Դիմադրություն շրջակա միջավայրի գործոններին: Արտաքին միջավայրում գոնոկոկներն այնքան էլ կայուն չեն։ 56-60 ° C ջերմաստիճանում նրանք մահանում են: 40 ° C ջերմաստիճանի դեպքում դրանց կենսունակությունը կտրուկ նվազում է: Ցածր ջերմաստիճանը և չորացումը արագ ոչնչացնում են դրանք: Բայց թարախի մեջ դրանք մնում են մինչև 24 ժամ։Ախտահանիչ լուծույթները՝ ֆենոլի 1%-անոց լուծույթ, սուբլիմում 1։1000 սուբլիմում, սպանում են գոնոկոկներին մի քանի րոպեում։ Գոնոկոկերը հատկապես զգայուն են արծաթի աղերի նկատմամբ՝ արծաթի նիտրատի 1%-անոց լուծույթն անմիջապես ոչնչացնում է դրանք։ Ուլտրամանուշակագույն ճառագայթները նրանց սպանում են րոպեների ընթացքում:

Կենդանիների զգայունությունը. Կենդանիները ենթակա չեն գոնոկոկի: Այնուամենայնիվ, սպիտակ մկներին գոնոկոկային տոքսինի ներերակային կիրառումը հանգեցնում է նրանց մահվան:

Վարակման աղբյուրները. Գոնորեայով հիվանդ մարդ.

փոխանցման ուղիները. Կոնտակտային-կենցաղային (սեռական), ավելի հազվադեպ՝ վարակված առարկաների միջոցով (սրբիչ, սպունգ և այլն):

Հիվանդություններ մարդկանց մեջ. Գոնորիա և բլենորիա.

Պաթոգենեզ. Գոնոկոկի բնական տանտերը հիվանդ մարդն է: Գոնոկոկները թափանցում են միզուկի լորձաթաղանթներով (կանանց մոտ՝ միզածորան և արգանդի վզիկ): Գոնոկոկերի պաթոգենության գործոնը դրանցում պիլիների առկայությունն է, որոնք, միանալով գլանաձև էպիթելի միկրովիլիների հետ, նպաստում են գոնոկոկի ներթափանցմանը էպիթելային բջիջ՝ առաջացնելով սուր բորբոքային պրոցես լորձաթաղանթում։

Կլինիկական առումով գոնորեան դրսևորվում է միզելու ժամանակ ցավերով, միզածորանից և հեշտոցից թարախի արտահոսքով։ Հիվանդությունը սուր է, բայց երբեմն դառնում է քրոնիկ: Գոնոկոկը կարող է առաջացնել գոնորեային կոնյուկտիվիտ՝ բլենորիա (նորածինների մոտ աչքերի լորձաթաղանթի թարախային բորբոքում): Գոնոկոկները հազվադեպ են տարածվում միզուկից այլ օրգաններ, սակայն երբեմն դրանք կարող են առաջացնել արթրիտ, էնդոկարդիտ և այլն:

Իմունիտետ. Գոնոկոկի նկատմամբ բնական դիմադրություն չկա: Տեղափոխված հիվանդությունը նույնպես իմունիտետ չի ստեղծում։ Դիտարկվող ֆագոցիտոզը թերի է։

Կանխարգելում. Առողջապահական կրթություն. Մշակութային և հիգիենիկ մակարդակի բարձրացում. Չկա կոնկրետ կանխարգելում։ Բլենորեայի կանխարգելման համար երեխաներին ծնվելուց անմիջապես հետո պետք է ներարկել կոնյուկտիվային պարկի մեջ 1-2 կաթիլ ալբուցիդի 30% լուծույթ:

Բուժում . Հակաբիոտիկներ (պենիցիլին, բիցիլին, ստրեպտոմիցին և այլն): Օգտագործվում են նաև սուլֆա դեղամիջոցներ։ Խրոնիկական ձևով օգտագործվում է գոնոկոկային պատվաստանյութ:

Վերահսկիչ հարցեր

1. Նկարագրե՛ք գոնոկոկի մորֆոլոգիական հատկությունները:

2. Որո՞նք են գոնոկոկի ֆերմենտային ակտիվությունը և տոքսինների ձևավորումը:

3. Ինչպիսի՞ն է գոնոկոկի դիմադրողականությունը: Ո՞ր դեղամիջոցի նկատմամբ են հատկապես զգայուն գոնոկոկները:

4. Ինչ հիվանդություններ են առաջացնում գոնոկոկները և դրանց պաթոգենեզը:

Մանրէաբանական հետազոտություն

Հետազոտության նպատակը՝ գոնոկոկի և հակագոնոկոկային հակամարմինների հայտնաբերում։

Հետազոտական ​​նյութ

1. Տղամարդկանց մոտ միզուկի անջատվող լորձաթաղանթ.

2. Կանանց մոտ միզածորանի և արգանդի վզիկի լորձաթաղանթի արտանետումը:

3. Թարախային արտահոսք աչքերից.

4. Արյուն՝ շիճուկ ստանալու համար:

Նշում. Բակտերիոսկոպիկ և մանրէաբանական հետազոտության համար նյութը վերցվում է` 1) մինչև հակաբիոտիկ բուժման մեկնարկը. 3) վերջին միզումից ոչ շուտ, քան 2 ժամ հետո. 4) լվացվելուց ոչ շուտ, քան 2 ժամ հետո.

Հիմնական հետազոտական ​​մեթոդներ

1. Միկրոսկոպիկ (հիմնականում օգտագործվում է սուր ձևերով):

2. Մանրէաբանական.

3. Շճաբանական.

Հետազոտության առաջընթաց

Հետազոտության երկրորդ օր

Հեռացրեք բերքը թերմոստատից և դիտեք դրանք: Գաղութների ուսումնասիրություն. Նրանք քսուքներ են պատրաստում: Կասկածելի գրամ-բացասական դիպլոկոկների առկայության դեպքում գաղութները ենթամշակվում են թեք միջավայրի վրա փորձանոթներում (միջավայրը պետք է թարմ պատրաստված լինի և պարունակի բավարար քանակությամբ կոնդենսատ) և օքսիդազի համար նմուշ է վերցվում: Դրա համար 1% դիմեթիլ պարաֆենիլենդիամինի լուծույթի կաթիլը պիպետտով կիրառվում է գաղութի վրա, գաղութները փոխում են գույնը մուգ շագանակագույնից մինչև սև:

Հետազոտության երրորդ օր

Կուլտուրաները հանվում են թերմոստատից, շվաբրերը վերցվում են ագարի թեքությունից, ներկվում Գրամով և մանրադիտակով: Պատվաստված է Hiss միջավայրի վրա (լակտոզա, գլյուկոզա, մանիտոլ և մալտոզա): Այս ածխաջրերը պետք է պարունակեն արյան շիճուկի 30%-ը: Պատվաստված խողովակները տեղադրվում են թերմոստատի մեջ:

Հետազոտության չորրորդ օր

Հեռացրեք փորձանոթները թերմոստատից, աճի բացակայության դեպքում թողեք թերմոստատի մեջ ևս 1-2 օր։ Աճի առկայության դեպքում արդյունքները հաշվի են առնվում (Աղյուսակ 28):

Շճաբանական ախտորոշում

հիվանդության երրորդ շաբաթ. Հիվանդության քրոնիկական ընթացքի և կասկածելի դեպքերում RSK-ը տեղադրվում է հիվանդի շիճուկի հետ (տես գլ. 12): Որպես անտիգեն՝ օգտագործվում է գոնոկոկի սպանված կուլտուրան, որը պատրաստվում է արդյունաբերական պայմաններում։ Դուք կարող եք կիրառել անուղղակի հեմագլյուտինացիայի արձագանքը (տես Գլուխ 12):

Վերահսկիչ հարցեր

1. Ի՞նչ նյութ է օգտագործվում գոնոկոկի հայտնաբերման համար և ինչպես է այն ստանում:

2. Միզելուց (կամ կանանց մոտ լվանումից) հետո որքա՞ն ժամանակ կարող է նյութ վերցնել հետազոտության համար:

3. Հետազոտության ո՞ր մեթոդն է հիմնականը սուր գոնորեայի, իսկ ո՞ր մեթոդը քրոնիկական գոնորեայի դեպքում:

4. Ե՞րբ և ինչպիսի՞ շճաբանական ռեակցիա է տրվում գոնորեայի կասկածելի դեպքում:

5. Ո՞ր միկրոօրգանիզմներից է անհրաժեշտ տարբերակել գոնոկոկները.

Ստացեք դեղը ուսուցչից: Քննեք այն և նկարեք գոնոկոկները, որոնք գտնվում են լեյկոցիտների ներսում և դրսում, գրամ բիծի վրա:

Սնուցող կրիչներ

Դեղնուցային միջավայր. Նապաստակի մսից 100 մլ ՄՊԱ-ին ավելացրեք 15 մլ դեղնուց (թարմ հավի ձու), 6 մլ ֆենոլ կարմիր ցուցիչ, 1,5 մլ շաքար՝ լուծված 1 մլ ստերիլ թորած ջրի մեջ։

Սնուցող միջավայր ասցիտ-ագար: Ճագարի մսից պատրաստված արգանակի ֆիլտրատին ավելացնում են 2% ագար, 1% պեպտոն և 0,5% նատրիումի քլորիդ։ Տաքացնել մինչև ագարը լուծվի, pH սահմանել 7,4-7,5, ալկալիացնել 20% նատրիումի հիդրօքսիդով։ Միջավայրը հասցնում են եռման, ֆիլտրում, լցնում ստերիլ սրվակների մեջ և մանրէազերծում ավտոկլավում 15 րոպե 115°C ջերմաստիճանում:

Ասցիտիկ սնուցող միջավայրի բաղադրատոմսեր (MPA pH 7,4-7,5):

1) մսաջուր նապաստակի մսից կամ ցլի սրտից՝ 100 մլ

կազեին հիդրոլիզատ - 2 մլ

խմորիչ autolysate - 2 մլ

տավարի արյան շիճուկ - 20 մլ

2) մսաջուր նապաստակի մսից կամ ցլի սրտից՝ 100 մլ

5% լուծույթ hemohydrolyzate - 2 մլ

խմորիչ autolysate - 2 մլ

տավարի շիճուկ - 20 մլ

3) մսաջուր նապաստակի մսից կամ ցլի սրտից՝ 100 մլ

հավի ձվի դեղնուց - 10 մլ

տավարի արյան շիճուկ - 20 մլ

Այս լրատվամիջոցների վրա գոնոկոկի աճը առատ է: Գոնոկոկի գաղութները կարելի է հայտնաբերել օքսիդազի թեստի միջոցով, որը կարմիրից դառնում է սև:

Մանրէաբանական հետազոտության մեթոդի արդյունավետությունը

հիմնականում որոշվում է սննդանյութերի որակով: IN

Մեր երկրում ամենալայն փորձարկվում և օգտագործվում է երկու տեսակ

սնուցող միջավայր՝ ասցիտ-ագար և ոչ ասցիտային սննդանյութեր:

Երկու միջավայրերն էլ հիմնված են մսից ստացված միս-պենտոն ագարի (MPA) վրա

նապաստակներ կամ թարմ եղջերավոր սրտեր: Դրա պատրաստման եղանակը

հետեւյալն է. Ճագարի միսն ազատվում է ճարպից և

ջլեր՝ անցած մսաղացով կամ դանակով թակած,

կշռված, լցված ծորակի ջրի կրկնակի ծավալով և այս

ձևը մեկ օր թողնում են սառնարանում 4° ջերմաստիճանում, հանելու համար։

Այնուհետեւ զանգվածը տաքացնում են եռման աստիճանի, 10 րոպե եռացնում, սառեցնում եւ

զտված է շղարշով: Ֆիլտրատին ավելացնել 2% ագար-ագար, 1%

պեպտոն և 0,5% նատրիումի քլորիդ, տաքացվում է մինչև ագար-ագարը լուծարվի

և սահմանել pH = 7,5-7,6 (ալկալիզացումն իրականացվում է 20%-ով

նատրիումի հիդրօքսիդի լուծույթ): Միջոցը բերվում է եռման աստիճանի, ֆիլտրացված

բամբակյա շղարշ ֆիլտրի միջոցով, լցնել ստերիլ սրվակների մեջ կամ

կոլբաներ և մանրէազերծել ավտոկլավում 15-20 րոպե 0,5 մթնոլորտում

ճնշման չափիչ (112ё):

Տավարի թարմ սրտերից MPA պատրաստելու տեխնիկան նույնն է, ինչ

հետևում է միայն տրորված սրտերի զանգվածը ջրի մեջ եռացնելը

արտադրել 20 րոպե 10-ի փոխարեն:

Սննդային միջավայրի հիմքը հնարավոր է պատրաստել առանց պեպտոնի։

Այս դեպքում օգտագործվում է MPA պատրաստելու վերը նշված մեթոդը, սակայն

Պեպտոնը բացառվում է դրա բաղադրությունից, եփում են նապաստակի կտրատած միսը

10-ի փոխարեն 5 րոպե և 10-ով մանրէազերծեք միջավայրը ավտոկլավի մեջ

րոպե 0,8 մթնոլորտում ճնշման չափիչի վրա (117ё):

Ասցիտ ագար

Ասցիտիկ հեղուկը պետք է ձեռք բերվի հիվանդներից

ասցիտ սրտի անբավարարության պատճառով, և

արտադրվում է տրոկարի միջոցով ստերիլ շշի մեջ և դրան ավելացնում 5%

քլորոֆորմ անզգայացման համար. 10 օրվա ընթացքում հեղուկը խառնվում է

քլորոֆորմ՝ պտտելով շիշը, այնուհետև թողնել այն տեղում

սենյակային ջերմաստիճանը մինչև քլորոֆորմը ամբողջությամբ նստի շշի հատակին

և հեղուկի պարզաբանում: Դրանից հետո, ըստ անհրաժեշտության, թափանցիկ

ասցիտիկ հեղուկը լցնում են 50 մլ ստերիլ կոլբայի մեջ

բամբակյա խրոցակներ և ամեն օր 3 օր դրանք տեղադրվում են

ջրային բաղնիք 56 ° 1 ժամվա ընթացքում քլորոֆորմը գոլորշիացնելու համար

բամբակյա խրոցակի միջոցով: Ասցիտիկ հեղուկը ստուգելուց հետո

ստերիլություն այն կարող է օգտագործվել հարստացման համար

1/3 և 1/4 կոնցենտրացիաներում գոնոկոկի մեկուսացման համար սննդարար միջավայր

միջավայրի ծավալը, որը որոշվում է էմպիրիկ եղանակով։

Ascitic Media Recipes

1. MPA նապաստակի մսից կամ տավարի թարմ սրտերից

(рН=7.4-7.5) - 100 մլ, կազեին հիդրոլիզատ՝ պարենտերալ.

սպիտակուցային սնուցում - 2 մլ, խմորիչ autolysate - 2 մլ, շիճուկ

տավարի արյուն - 20 մլ (չորեքշաբթի KDS-1):

2. MPA նապաստակի մսից կամ տավարի թարմ սրտերից

(рН=7.4-7.5) - 100 մլ, 5% հեմոհիդրոլիզատի լուծույթ - 2 մլ,

խմորիչ autolysate - 2 մլ, խոշոր եղջերավոր անասունի արյան շիճուկ

խոշոր եղջերավոր անասուններ - 20 մլ (GDS-2 միջին):

3. MPA նապաստակի մսից կամ տավարի թարմ սրտերից

(рН=7.4-7.5) - 100 մլ, միջին 199 հյուսվածքային կուլտուրաների համար՝ առանց

հակաբիոտիկներ - 20 մլ, խմորիչ autolysate - 2 մլ, արյան շիճուկ

խոշոր եղջերավոր անասուններ - 20 մլ (միջին 199-SDS):

4. MPA նապաստակի մսից կամ տավարի թարմ սրտերից

(рН=7,4-7,5) - 100 մլ, թարմ հավի ձվի դեղնուց - 10 մլ,

տավարի արյան շիճուկ - 20 մլ (չորեքշաբթի ԺՍ):

Ձվի դեղնուցը ստացվում է ստերիլ դիետիկ հավի ձվերից:

միջին պատրաստումից անմիջապես առաջ: Սրա համար,

նախապես մշակված ալկոհոլով, կեղևը բացվում է ստերիլով

պինցետով և ձվի պարունակությունը լցնում են ստերիլ ձագարի մեջ։ հետո

սպիտակուցը դուրս հոսելուց հետո ձագարում մնացած դեղնուցը տեղափոխվում է

համար անհրաժեշտ է ստերիլ սպասք և չափիչ խողովակ

դեղնուցի սննդարար միջին ծավալի արտադրություն.

Խմորիչի ավտոլիզատի պատրաստումը հետևյալն է.

Հացթուխի թթխմորը մանրացված է և դրվում շշի մեջ գերազանցող

ծավալը վերցված է խմորիչը 4-5 անգամ, իսկ երկուսի համար թողնում են ավտոլիզի

օրեր չորացման կաբինետում կամ թերմոստատում 60 °: Հետո հաստ

շագանակագույն զանգվածը նոսրացվում է ծորակի տաք ջրով եռակի ծավալով

ջուր, լավ խառնել և ցենտրիֆուգել երկու անգամ 10 րոպե ժ

1000 rpm (մինչև հեղուկը թափանցիկ դառնա): գերնույն

հեղուկը քամվում է, վրան ավելացվում է 0,5% նատրիումի քլորիդ, ճշգրտվում

pH մինչև 7,4-7,5 և 30 րոպե ավտոկլավացված 1 մթնոլորտում

մանոմետր (120ё): Պահպանեք փոքր տարաներով սառնարանում

Խմորիչ ավտոլիզատը կարող է փոխարինվել 1,5% լուծույթով

կերային խմորիչի քաղվածք (EKD) նույն քանակությամբ (2 մլ) 1,5%

EPC լուծույթը լաբորատորիայում պատրաստվում է չոր EPC-ից՝ լուծարելով այն

ստերիլ թորած ջուր: Պատրաստված է այսպես

հեղուկ էքստրակտը լցնում են ստերիլ փորձանոթների մեջ և ստերիլիզացնում

20 րոպե ավտոկլավ 0,5 պարգևով:

Բոլոր վերը նշված սննդանյութերի միջավայրում, արյան շիճուկ

խոշոր եղջերավոր անասունները կարող են փոխարինվել նորմալ բնիկով

շիճուկ մանրէաբանական սնուցիչ միջավայրի համար, որը

նույն շիճուկն է, բայց կոնսերվանտի ավելացմամբ։

Հարստացված միջավայրի պատրաստում

MPA-ն, որը գտնվում է սրվակի կամ կոլբայի մեջ, հալեցնում են ջրի մեջ

լոգանք, սառեցված մինչև 56-58° և դրա մեջ ավելացրեք բաղադրիչները

հարաբերակցությունները, որոնք նշված են ավելի վաղ բաղադրատոմսերում: Հարստացված է MPA-ով 3-3,5

մլ լցնում են ստերիլ փորձանոթների մեջ, միջավայրը թեքվում և խոնավացվում է

0,5 մլ ստերիլ միս-պեպտոն արգանակ կամ իզոտոնիկ

նատրիումի քլորիդի լուծույթը կարծրանալուց հետո: Ստուգման համար

ստերիլության համար միջավայրը տեղադրվում է թերմոստատի մեջ օրական 35-37o ջերմաստիճանում:

Բոլոր վերը նշված ոչ ասցիտային միջավայրերը, բացառությամբ ձվի, թափանցիկ են,

դրանց վրա հեշտ է տարբերակել միկրոօրգանիզմների գաղութները։ չորեքշաբթի,

հարստացված է ձվով, տարբերվում է պղտորությամբ, դեղին է, աճեցված է

նրա գաղութները, մասնավորապես՝ գոնոկոկները, վատ են տարբերվում: Այնուամենայնիվ, աճ

gonococcus-ը շատ է այս միջավայրում, և նրա գաղութները հեշտությամբ կարող են լինել

հայտնաբերվում է աճի մշակմամբ 1% լուծույթով

դիմեթիլ պարաֆենիլենդիամին կամ այլ օքսիդազային ռեակտիվ,

որը գոնոկոկի գաղութները կարմիր է ներկում, լավ

հակադրվում է միջինի դեղին ֆոնի վրա: Դեղնուցի օգտագործումը

կրիչներ առանց մանրէների աճի մշակման օքսիդազային ռեագենտով

Լաբորատոր կուլտուրայի յուրաքանչյուր նոր խմբաքանակի որակը

արտադրությունը պետք է ստուգվի՝ դրա վրա ցանելով

պաթոլոգիական նյութ այն հիվանդներից, որոնցում բակտերիոսկոպիկ կերպով

հայտնաբերվել են գոնոկոկներ.

MPA-ի պահպանման ժամկետը 4o սառնարանում չպետք է գերազանցի 1-ը

ամիս, հարստացված միջավայր՝ 7 օր.

Շնորհիվ այն բանի, որ վերը նշված միջավայրի համար հնարավոր է կարճ ժամանակահատված

պահեստավորումը, մշակել է արտադրության մեթոդ

լիոֆիլացված ասցիտից զերծ սնուցող միջավայր, որը գտնվում է տակ

վերնագրված «Գոնոկոկային մեկուսացման կուլտուրա, չոր»

հասանելի է երկու շշով` մաս I (միջին հիմք) և մաս II

(ամրացուցիչներ): Աշխատանքային միջավայրը պատրաստել I մասով

ավելացնել 100 մլ ստերիլ թորած ջուր և տաքացնել

ջրի բաղնիքում 100 ° ջերմաստիճանում, մինչև սրվակի պարունակությունը ամբողջությամբ լուծարվի

(30 րոպեի ընթացքում): Լրացուցիչ ժամանակ ջրի մեջ շրջակա միջավայրին դիմակայելու համար

լոգանք չպետք է լինի, tk. սա նվազեցնում է դրա որակը: II մասը ներառում է

24 մլ ստերիլ թորած ջուր (լուծվող հարստացնող

նյութերը հայտնվում են անմիջապես): Այնուհետև՝ պայմաններին համապատասխան

ստերիլություն, II մասը տեղափոխվում է I մաս սառեցված մինչև 56°,

խառնել, լցնել ստերիլ փորձանոթների մեջ, փորել և

խոնավացնել, ինչպես նախկինում նկարագրված է:

Չոր միջավայրը պատրաստվում է նապաստակի մսից կամ ցլի սրտից,

բացի 1-ին բաղադրատոմսում թվարկվածներից (KDS-1 միջավայր) հարստացնող նյութերից

այն պարունակում է օրոտիկ թթու 1 մկգ/մլ կոնցենտրացիայով: չորեքշաբթի

բարձրորակ, հարմար է մանրէաբանական օգտագործման համար

լաբորատորիաներ, քանի որ չոր միջավայրը աշխատանքային միջավայրի վերածելու համար պահանջվում է

միայն ստերիլ թորած ջուր:

Ասցիտից զերծ սննդանյութի օգտագործումը հավելումով

հակաբիոտիկները և օրոտիկ թթուն լավ արդյունքներ են տալիս

մանրէաբանական ախտորոշում, ներառյալ էքստրագենիտալ

գոնորիա՝ նշագեղձերի և կոկորդի, ուղիղ աղիքի գոնորիա: Հակաբիոտիկներ

ավելացվել է ուղեկցող գոնոկոկի աճը արգելակելու համար

բակտերիալ ֆլորան, որը մեծացնում է գոնոկոկի աճի տեմպը,

հեշտացնում է իր առանձին գաղութների հայտնաբերումը և մաքուր մեկուսացումը

մշակույթը։ Ավելացնել 20.0 U/ml պոլիմիքսին M սուլֆատ և 6.2 U/ml

ռիստոմիցին սուլֆատ; վերջինիս փոխարեն կարող եք օգտագործել

lincomycin հիդրոքլորիդ - 2 մկգ / մլ: Օրոտիկ թթու ներարկվում է

սնուցող միջավայրի բաղադրությունը՝ 1 մկգ/մլ.

Դա անելու համար վերցրեք օրոտիկ թթվի նմուշ 1 մգ (1000 մկգ) և

նոսրացված 1,0 մլ ստերիլ թորած ջրի մեջ (ստացեք

1000 մկգ պարունակող աշխատանքային լուծույթ, որը կարող է պահվել

սառնարանում 10 օր) և ստերիլիզացված ջրային բաղնիքում 15

րոպե, ապա վերցրեք 0,1 մլ ստացված լուծույթից և ավելացրեք

100 մլ հարստացված սննդարար միջավայր: Հակաբիոտիկներով միջավայր

պետք է օգտագործվի միաժամանակ հակաբիոտիկներից զերծ կրիչի հետ

(մեկ փորձանոթը կրողով հակաբիոտիկներով, մյուսը՝ առանց դրանց), քանի որ

չնայած հազվադեպ, կան գոնոկոկի շտամներ, որոնք զգայուն են

վերը նշված հակաբիոտիկները.

Պահպանման միջոց (տրանսպորտ)

Պահպանման միջոցի բաղադրությունը՝ 1) 1 լիտր թորած ջուր,

զերծ քլորից, 30 գ ագար-ագար; 2) 900 մլ թորած

քլոր չպարունակող ջուր, 2 մլ թիոգլիկոլաթթու, 12 մլ 1 մ

նատրիումի հիդրօքսիդի լուծույթ, 100 մլ 20% նատրիումի ջրային լուծույթ

մոնոփոխարինված ֆոսֆատ, 20 մլ 1% քլորիդ լուծույթ

կալցիում. Վերջին խառնուրդը (2) ավելացվում է թարմ պատրաստվածին

ագար (1), կարգավորել pH-ը 7,3-7,4, լցնել 10 մլ միջավայրը

ստերիլ փորձանոթներ, 1 ժամ ստերիլիզացված հոսող գոլորշու միջոցով:

Բամբակյա շվաբրեր փայտե ձողերի կամ դրանցից պատրաստված ձողերի վրա

չժանգոտվող պողպատ՝ մոտ 2 մմ տրամագծով, ամրացված թաղանթով

խցաններ, 20 րոպե եփած ֆոսֆատային բուֆերի մեջ, pH=7,4 և.

ներծծել 24 ժամ 1% ջրային կախույթի մեջ մանրակրկիտ

մանրացված փայտածուխ. Չորացնելուց հետո բամբակյա շվաբրեր

ճիշտ, մտցրեք մանրէաբանական փորձանոթների մեջ

համապատասխան տրամագծով (հավասար է միջավայրի հետ փորձանոթների տրամագծին) և

մանրէազերծված ավտոկլավում 20 րոպե 1 մթնոլորտում (ջերմաստիճան

Ֆոսֆատային բուֆեր պատրաստելու համար պատրաստվում են երկու լուծույթ՝ 1

լուծույթ - 28,4 գ նատրիում լուծվում է 1 լիտր թորած ջրի մեջ

դիփոխարինված ֆոսֆատ (0,2 մ); 2 լուծում - 1 լ-ում

թորած ջուրը լուծում է 27,8 գ կիտրոնաթթու (0,1 մ):

Խառնեք 181,7 մլ լուծույթ 1 և 18,3 մլ լուծույթ 2։

Սերմերի արտադրություն՝ օգտագործելով խնայող միջավայրը

իրականացվում է հետևյալ կերպ. Բժիշկը զննում է հիվանդին

հեռացնում է տամպոնը փորձանոթից, մտցնում այն ​​հիվանդության կիզակետում

մի քանի վայրկյան թրջելու համար (կարող եք անել մի քանի

շարժումներ ժամացույցի սլաքի ուղղությամբ և հակառակ ուղղությամբ), հեռացնում է այն առանց դիպչելու

շրջակա առարկաները, փորձանոթի մեջ՝ պահպանման միջավայրով: ավարտվել է

բամբակյա խցան, փորձանոթը փակված է ռետինե խուլով: Առաքումից առաջ

նյութը մանրէաբանական լաբորատորիա, կուլտուրաները պահվում են 4

սառնարանում նվազագույն ժամկետով, բայց ոչ ավելի, քան մեկ օր: Միաժամանակ

վերցնել պաթոլոգիական նյութ և կատարել քսուքներ

բակտերիոսկոպիկ հետազոտություն, որոնք ուղարկվում են

լաբորատորիա կուլտուրայի հետ մեկտեղ: մանրէաբանական լաբորատորիայում

անմիջապես ստանալուց հետո շվաբրեր պաթոլոգիական նյութով

հեռացվում է պահեստային միջավայրից և օգտագործվում են մակերեսին պատվաստելու համար

թեք սնուցող միջավայր փորձանոթներում: Յուրաքանչյուր տամպոն պատրաստվում է

ցանել սննդային միջավայրի վրա երկու փորձանոթներում։ Մակերեւույթի վրա սերմնացան

սնուցող միջավայրը պետք է պատրաստվի զիգզագի շարժումներով

միջավայրի մակերեսի երկայնքով՝ պտտելով շվաբրը: Եթե ​​փորձանոթների տրամագիծը

պահպանման միջավայրը և աճի միջավայրը նման են, դուք կարող եք շվաբր քսել

պատվաստումից հետո թողնել երկրորդ փորձանոթի մեջ՝ շփվելով

սնուցող միջավայր. Մշակաբույսերը տեղադրվում են թերմոստատի մեջ և աճեցնում են

36-37 տարեկան չորանոցում: Պետք է նկատի ունենալ, որ օգտագործելիս

շրջակա միջավայրի պահպանումը, գոնոկոկի աճը կարող է առաջանալ ավելի ուշ, քան հետ

պաթոլոգիական նյութի ուղղակի ցանքս սննդանյութի վրա

Մշակույթների հետ աշխատելը

Գոնոկոկը կարելի է աճեցնել փորձանոթներում կամ

Petri ուտեստներ; Առաջին մեթոդը զգալի խնայողություններ է ապահովում

միջավայրը։ Բարձրացնել գոնոկոկի սերմնավորման տոկոսը, սերմնացան

սնուցող միջավայրը տեղադրվում է 20% թերմոստատի մեջ չորացուցիչի մեջ

ռեակցիաներ ծծմբաթթվի և նատրիումի բիկարբոնատի միջև՝ չորացուցիչի մեջ

5 լիտր ծավալով բաժակը դնել 50 մլ 10% ծծմբաթթվով,