गोनोकोकी उगाने के लिए पोषक तत्व मीडिया। आंख से गोनोरिया के लिए गोनोकोकस टीकाकरण के अलगाव और संवर्धन के लिए संस्कृति माध्यम

गोनोकोकी के चयनात्मक अलगाव के लिए रक्त, हीमोग्लोबिन या अन्य योजक के साथ पूरक इस एगर की सिफारिश की जाती है।

मिश्रण**:

** रचना को सत्यापित किया जाता है और आवश्यक मापदंडों के अनुपालन में लाया जाता है

खाना बनाना:

दोगुनी ताकत वाला माध्यम तैयार करने के लिए 100 मिलीलीटर आसुत जल में 7.2 ग्राम पाउडर डालें। कणों को पूरी तरह से घोलने के लिए उबाल लें। 15 मिनट के लिए 1.1 एटीएम (121 डिग्री सेल्सियस) पर ऑटोक्लेविंग द्वारा स्टरलाइज़ करें। 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा करें और सड़न रोकनेवाला तरीके से अलग से तैयार 100 मिलीलीटर 2% बाँझ हीमोग्लोबिन समाधान (एफडी022) और जीसी पूरक (एफडी021) डालें। अच्छी तरह मिलाएं और पेट्री डिश में डालें। माध्यम में चयनात्मक गुण प्रदान करने के लिए, आप निम्नलिखित एडिटिव्स में शामिल एंटीबायोटिक्स जोड़ सकते हैं: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028)।

चॉकलेट अगर की तैयारी के लिए, 100 मिलीलीटर आसुत जल में 3.6 ग्राम पाउडर मिलाकर एक मानक एकाग्रता माध्यम तैयार किया जाता है। स्टरलाइज़ करें, 5% (v/v) स्टेराइल डिफाइब्रिनेटेड रक्त डालें, और माध्यम को 10 मिनट के लिए 80°C पर गर्म करें।

परिणाम का सिद्धांत और मूल्यांकन:

रक्त या हीमोग्लोबिन और अन्य योजक के साथ पूरक इस एगर को गोनोकोकी और हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा जैसे तीव्र सूक्ष्मजीवों के चयनात्मक अलगाव और खेती के लिए अनुशंसित किया जाता है। जॉनसन ने चॉकलेट एगर विकसित किया जो 24 घंटों के भीतर विकसित हो सकता है। नेइसेरिया गोनोरहोई(1). बाद में, अन्य लेखकों (2) ने इसकी संरचना में हीमोग्लोबिन को शामिल करके माध्यम में सुधार किया।

अगर में एक विशेष पेप्टोन होता है - सूक्ष्मजीवों के लिए पोषक तत्वों का एक स्रोत। स्टार्च निसेरिया द्वारा निर्मित विषाक्त पदार्थों को बेअसर करता है, और फॉस्फेट एमाइन के गठन के परिणामस्वरूप पीएच बदलाव का प्रतिकार करता है, जो सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और व्यवहार्यता को भी प्रभावित कर सकता है। हीमोग्लोबिन हीमोफिलिक बैक्टीरिया के लिए कारक एक्स के स्रोत के रूप में कार्य करता है। एक अन्य योजक माध्यम को हेमोफिलस इन्फ्लुएंजा के लिए आवश्यक कारक वी (एनएडी, निकोइनैमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड) के साथ-साथ अमीनो एसिड, विटामिन, लौह आयन आदि से समृद्ध करता है, जो रोगजनक निसेरिया के विकास को उत्तेजित करता है।

सामग्री एकत्र करने के लिए कपास के फाहे का उपयोग न करें। सामग्री के चयन के तुरंत बाद बुआई की जाती है। ऐसा अवश्य किया जाना चाहिए ताकि घने और दुर्लभ विकास वाले क्षेत्र हों। बीजारोपण 37°C पर 5-10% कार्बन डाइऑक्साइड और 70% आर्द्रता वाले वातावरण में किया जाता है। सभी संदिग्ध कॉलोनियों की जैव रासायनिक और/या सीरोलॉजिकल परीक्षणों में जाँच की जानी चाहिए।

गुणवत्ता नियंत्रण: पाउडर उपस्थिति:

सजातीय मुक्त बहने वाला हल्का पीला पाउडर।

समाप्त मध्यम घनत्व:

1.0% अगर जेल के घनत्व के अनुरूप एक माध्यम बनता है।

तैयार माध्यम का रंग और पारदर्शिता:

माध्यम का आधार हल्का पीला, पारदर्शी या थोड़ा ओपलेसेंट है। हीमोग्लोबिन जोड़ने के बाद, यदि पेट्री डिश में एक जेल बन जाता है तो माध्यम चॉकलेट ब्राउन और अपारदर्शी हो जाता है।

पर्यावरण की अम्लता:

25° C पर, एक जलीय घोल (3.6% w/v) का pH 7.2 ± 0.2 होता है।

सांस्कृतिक गुण:

वातावरण में 5-10% कार्बन डाइऑक्साइड और 70% आर्द्रता की उपस्थिति में, इस आधार पर तैयार चॉकलेट एगर पर 35-37 डिग्री सेल्सियस पर 40-48 घंटों के बाद संदर्भ तनाव की वृद्धि विशेषताएँ।

जननांग प्रणाली के यौन संचारित रोगों के निदान में प्रयोगशाला विधियों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है: गोनोरिया, सिफलिस, ट्राइकोमोनिएसिस, आदि। रोग की उपस्थिति के लिए संक्रमण के कारण की पहचान करने के उपायों की आवश्यकता होती है।

पोषक तत्व माध्यम "एसवीजी" एक रोगी से सामग्री के अध्ययन में गोनोकोकी के अलगाव और खेती के लिए है। प्रत्येक किट को उपयोग के लिए तैयार 110 मिलीलीटर गोनोकोकल माध्यम तैयार करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।

रचना सेट करें

पोषक माध्यम प्राप्त करने के लिए एक सेट को 12 महीने से अधिक समय तक 2 - 8 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए। ठोस पोषक माध्यम को टेस्ट ट्यूब या पेट्री डिश में 7 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जा सकता है। पोषक तत्व माध्यम की तैयारी के लिए सेट में शामिल हैं:

• आधार: अगर, खमीर अर्क, पेप्टोन, स्टार्च, लवण;
• चयनात्मक योजक: कोएंजाइम, एरिथ्रोसाइट लाइसेट, एंटीफंगल, एंटीबायोटिक्स, शर्करा;
• किट का उपयोग करने के निर्देश.

क्रियाविधि

कार्यप्रणाली में कई चरण शामिल हैं, जिनमें से प्रत्येक को कुछ आवश्यकताओं के अनुसार पूरा किया जाना चाहिए। गोनोकोकल माध्यम पर रोगज़नक़ की खेती की विधि का उपयोग करके रोग के निदान के सभी चरणों के पूरा होने पर, परिणाम 24 घंटे, 48 घंटे और 72 घंटे के बाद दर्ज किए जाते हैं। तीव्र गोनोरिया में, गोनोकोकस की वृद्धि पहले दिन के दौरान देखी जाती है, पुरानी गोनोरिया में - 72 घंटों तक।

सांस्कृतिक निदान के लिए माध्यम के आधार समाधान की तैयारी आधार को बाद की सूजन के लिए आसुत जल (100 मिलीलीटर) वाले कंटेनर में डालकर की जाती है। परिणामी निलंबन को पानी के स्नान में रखा जाता है और समय-समय पर हिलाया जाता है जब तक कि आधार पूरी तरह से भंग न हो जाए, फिर समाधान को 2 मिनट के लिए उबाला जाता है। एक चयनात्मक योज्य का घोल आसुत जल (10 मिली) में हिलाकर घोलकर तैयार किया जाता है।

आधार घोल में चयनात्मक योज्य घोल मिलाने से तैयार पोषक माध्यम बनता है। परिणामी माध्यम को बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है। परीक्षण से पहले, गोनोकोकल वातावरण को 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक घंटे तक बनाए रखा जाना चाहिए। फिर सामग्री को स्वास्थ्य मंत्रालय के आदेश के अनुसार "चिकित्सा संस्थानों की नैदानिक ​​​​निदान प्रयोगशालाओं में उपयोग किए जाने वाले सूक्ष्मजीवविज्ञानी (बैक्टीरियोलॉजिकल) अनुसंधान विधियों के एकीकरण पर" बोया जाता है।

विनती पर मुल्य

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निर्माता: एफबीयूएन रिसर्च इंस्टीट्यूट ऑफ एपिडेमियोलॉजी एंड माइक्रोबायोलॉजी का नाम पाश्चर के नाम पर रखा गया है

देश रूस

इकाई इकाई: सेट

पैकिंग प्रकार: कार्डबोर्ड बॉक्स

विक्रेता कोड:

विवरण

जननांग प्रणाली की सूजन संबंधी बीमारियों वाले रोगियों से नैदानिक ​​​​सामग्री के अध्ययन में सांस्कृतिक विधि द्वारा गोनोकोकी के अलगाव के लिए अभिकर्मकों का एक सेट। उपयोग के लिए तैयार 110 मिलीलीटर ठोस पोषक माध्यम तैयार करने के लिए डिज़ाइन किया गया

कार्यात्मक उद्देश्य

जीएचएस किट के घटक दृश्य कालोनियों को बनाने के लिए आवश्यक मात्रा में निसेरिया गोनोरिया के विकास के लिए इष्टतम स्थिति प्रदान करते हैं, और चयनात्मक योजक नमूने में संभावित रूप से निहित प्रोटोजोआ, कवक और अधिकांश अन्य संबंधित वनस्पतियों के विकास को रोकता है।
कार्यप्रणाली में कई चरण शामिल हैं, जिनमें से प्रत्येक को कुछ आवश्यकताओं के अनुसार पूरा किया जाना चाहिए। गोनोकोकल माध्यम पर रोगज़नक़ की खेती की विधि का उपयोग करके रोग के निदान के सभी चरणों के पूरा होने पर, परिणामों का एक दृश्य रिकॉर्ड 18-24 घंटे, 48 ​​और 72 घंटों के बाद बनाया जाता है। गोनोकोकी की विशिष्ट हल्के भूरे, थोड़े बादलदार गोल कालोनियां प्रकट होती हैं। तीव्र गोनोरिया में, गोनोकोकस की वृद्धि पहले दिन के दौरान देखी जाती है, पुरानी गोनोरिया में - 72 घंटों तक। यदि ऊष्मायन के 7 दिनों के बाद कोई वृद्धि नहीं होती है तो परिणाम नकारात्मक माना जाता है।

विशेष विवरण

रचना सेट करें
1. पोषक माध्यम का आधार, सूखा - 4.1 ग्राम x 1 बोतल;
अगर, खमीर अर्क, पेप्टोन, स्टार्च, लवण;
प्रकटन: हल्का पीला हीड्रोस्कोपिक पाउडर;
2. चयनात्मक योजक, लियोफिलिज्ड - 1 शीशी;
कोएंजाइम, एरिथ्रोसाइट लाइसेट, एंटीफंगल, एंटीबायोटिक्स, शर्करा;
प्रकटन: गुलाबी-बेज लियोफिलिसेट।
तैयार माध्यम साफ है, हल्के पीले रंग का है, हल्की ओपेलेसेंस के साथ, हल्की तलछट की अनुमति है।
पीएच 7.2- 7.4
रिलीज फॉर्म: उपयोग के निर्देशों के साथ एक कार्डबोर्ड बॉक्स में।
भंडारण की स्थिति: +2...8°C के तापमान पर 12 महीने से अधिक नहीं, +25°C तक के तापमान पर 2 सप्ताह से अधिक के लिए भंडारण स्वीकार्य है।
तैयार पोषक माध्यम को टेस्ट ट्यूब या पेट्री डिश में 7 दिनों से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जा सकता है।
Roszdravnadzor में पंजीकृत

निसेरिया गोनोरिया, निसेरियासी परिवार, जीनस निसेरिया का एक सदस्य है। गोनोकोकी की खोज 1879 में नीसर ने की थी और पूरे परिवार का नाम उन्हीं के नाम पर रखा गया है।

आकृति विज्ञान। गोनोकोकी डिप्लोकोकी है जिसमें दो बीन के आकार के कोक्सी एक दूसरे के अवतल पक्षों के साथ लेटे हुए होते हैं (कॉफी बीन्स की याद दिलाते हैं)। गोनोकोकी का आकार 1.2-1.3 × 0.7-0.8 माइक्रोमीटर है। वे बहुरूपी हैं; बड़े बैक्टीरिया के साथ-साथ, बहुत छोटे, अनियमित आकार के एल-आकार के बैक्टीरिया भी होते हैं। गोनोकोकी गतिहीन होते हैं और उनमें बीजाणु नहीं होते हैं। रोगजन्य पदार्थ (मवाद) में एक कैप्सूल जैसा पदार्थ पाया जाता है। ग्राम-नकारात्मक. औषधीय और अन्य पदार्थों के प्रभाव में, वे जल्दी से बदल जाते हैं: ग्राम-पॉजिटिव रूप दिखाई देते हैं। पैथोलॉजिकल सामग्री में, वे इंट्रासेल्युलर (ल्यूकोसाइट में) स्थित होते हैं, लेकिन कोशिका के बाहर भी हो सकते हैं। व्यक्तिगत कोक्सी के रूप में हो सकता है (चित्र 4 देखें)।

खेती। गोनोकोकी एरोबिक्स हैं। पोषक मीडिया पर बहुत मांग है। वे देशी प्रोटीन (मानव) - रक्त, सीरम युक्त मीडिया पर 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान और 7.2-7.4 के पीएच पर बढ़ते हैं। मीडिया को ताज़ा तैयार और नम होना चाहिए। सामग्री लेने के तुरंत बाद बुआई कर देनी चाहिए. सीरम माध्यम पर, गोनोकोकी 1-2 मिमी की छोटी कॉलोनियां बनाते हैं, पारदर्शी, चिकने किनारों के साथ चमकदार, ओस की बूंदों के समान। रक्त माध्यम पर, हेमोलिसिस नहीं दिया जाता है। मट्ठा शोरबा में, वे थोड़ी सी मैलापन देते हैं और एक फिल्म बनाते हैं जो ट्यूब के नीचे तक जम जाती है। 24 घंटों के बाद खराब वृद्धि के साथ, फसलों को दूसरे दिन के लिए थर्मोस्टेट में छोड़ दिया जाता है।

एंजाइमैटिक गुण. सैकेरोलाइटिक गुण कमजोर रूप से व्यक्त किए जाते हैं। गोनोकोकी एसिड के निर्माण के साथ केवल एक शर्करा - ग्लूकोज को तोड़ता है। इनमें प्रोटियोलिटिक गुण नहीं होते हैं।

विष निर्माण. गोनोकोकी की कोशिका भित्ति में एक विषैला पदार्थ होता है - लिपोपॉलीसेकेराइड (बहुत कम अध्ययन किया गया)।

प्रतिजनी संरचना. एंटीजेनिक संरचना विषम है और पर्यावरणीय कारकों के प्रभाव में आसानी से बदल जाती है। गोनोकोकी का सेरोवर्स और सीरोटाइप में अभी तक कोई आम तौर पर स्वीकृत विभाजन नहीं है।

पर्यावरणीय कारकों का प्रतिरोध। बाहरी वातावरण में, गोनोकोकी बहुत स्थिर नहीं होते हैं। 56-60 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर वे मर जाते हैं। 40 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, उनकी व्यवहार्यता तेजी से घट जाती है। कम तापमान और सूखने से वे जल्दी नष्ट हो जाते हैं। लेकिन मवाद में वे 24 घंटे तक रहते हैं। कीटाणुनाशक समाधान - फिनोल का 1% समाधान, सब्लिमेट 1:1000 कुछ ही मिनटों में गोनोकोकी को मार देते हैं। गोनोकोकी विशेष रूप से सिल्वर लवण के प्रति संवेदनशील होते हैं - सिल्वर नाइट्रेट का 1% घोल उन्हें तुरंत नष्ट कर देता है। यूवी किरणें उन्हें मिनटों में मार देती हैं।

जानवरों की संवेदनशीलता. जानवर गोनोकोकस के प्रति संवेदनशील नहीं होते हैं। हालाँकि, सफेद चूहों को गोनोकोकल टॉक्सिन का इंट्रापेरिटोनियल प्रशासन उनकी मृत्यु का कारण बनता है।

संक्रमण के स्रोत. सूजाक से पीड़ित व्यक्ति.

संचरण पथ. संपर्क-घरेलू (यौन), कम अक्सर दूषित वस्तुओं (तौलिया, स्पंज, आदि) के माध्यम से।

मनुष्यों में रोग. सूजाक और ब्लेनोरिया।

रोगजनन. गोनोकोकी का प्राकृतिक मेजबान एक बीमार व्यक्ति है। गोनोकोकी मूत्रमार्ग (महिलाओं में - मूत्रमार्ग और गर्भाशय ग्रीवा) के श्लेष्म झिल्ली के माध्यम से प्रवेश करती है। गोनोकोकी का रोगजनकता कारक उनमें पिली की उपस्थिति है, जो बेलनाकार उपकला के माइक्रोविली से जुड़कर उपकला कोशिका में गोनोकोकस के प्रवेश में योगदान देता है, जिससे श्लेष्म झिल्ली में तीव्र सूजन प्रक्रिया होती है।

चिकित्सकीय रूप से, गोनोरिया पेशाब के दौरान दर्द, मूत्रमार्ग और योनि से मवाद निकलने से प्रकट होता है। रोग तीव्र है, लेकिन कभी-कभी पुराना भी हो जाता है। गोनोकोकी गोनोरियाल नेत्रश्लेष्मलाशोथ का कारण बन सकता है - ब्लेनोरिया (नवजात शिशुओं में आंखों के श्लेष्म झिल्ली की शुद्ध सूजन)। गोनोकोकी शायद ही कभी मूत्रमार्ग से अन्य अंगों में फैलता है, लेकिन कभी-कभी वे गठिया, एंडोकार्डिटिस आदि का कारण बन सकते हैं।

रोग प्रतिरोधक क्षमता। गोनोकोकी के प्रति कोई प्राकृतिक प्रतिरोध नहीं है। स्थानांतरित रोग भी प्रतिरोधक क्षमता का निर्माण नहीं कर पाता। देखा गया फागोसाइटोसिस अधूरा है।

रोकथाम। स्वास्थ्य शिक्षा। सांस्कृतिक एवं स्वच्छता स्तर को बढ़ाना। कोई विशेष रोकथाम नहीं है. ब्लेनोरिया की रोकथाम के लिए, जन्म के तुरंत बाद बच्चों को एल्ब्यूसिड के 30% घोल की 1-2 बूंदों को कंजंक्टिवल थैली में इंजेक्ट किया जाना चाहिए।

इलाज । एंटीबायोटिक्स (पेनिसिलिन, बाइसिलिन, स्ट्रेप्टोमाइसिन, आदि)। सल्फा औषधियों का भी प्रयोग किया जाता है। जीर्ण रूप में, गोनोकोकल वैक्सीन का उपयोग किया जाता है।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. गोनोकोकी के रूपात्मक गुणों का वर्णन करें।

2. गोनोकोकी की एंजाइमिक गतिविधि और विष निर्माण क्या हैं?

3. गोनोकोकी का प्रतिरोध कितना है? गोनोकोकी किस दवा के प्रति विशेष रूप से संवेदनशील हैं?

4. गोनोकोकी और उनके रोगजनन के कारण कौन से रोग होते हैं।

सूक्ष्मजैविक अनुसंधान

अध्ययन का उद्देश्य: गोनोकोकी और एंटी-गोनोकोकल एंटीबॉडी का पता लगाना।

शोध सामग्री

1. पुरुषों में मूत्रमार्ग की वियोज्य श्लेष्मा झिल्ली।

2. महिलाओं में मूत्रमार्ग और गर्भाशय ग्रीवा की श्लेष्मा झिल्ली का स्राव।

3. आंखों से पीप स्राव होना।

4. सीरम प्राप्त करने के लिए रक्त.

टिप्पणी। बैक्टीरियोस्कोपिक और बैक्टीरियोलॉजिकल जांच के लिए, सामग्री ली जाती है: 1) एंटीबायोटिक उपचार शुरू होने से पहले: 2) एंटीबायोटिक उपचार समाप्त होने के 10 दिन से पहले नहीं; 3) आखिरी बार पेशाब करने के 2 घंटे से पहले नहीं; 4) वाउचिंग के बाद 2 घंटे से पहले नहीं।

बुनियादी अनुसंधान विधियाँ

1. सूक्ष्मदर्शी (मुख्य रूप से तीव्र रूपों में उपयोग किया जाता है)।

2. सूक्ष्मजीवविज्ञानी।

3. सीरोलॉजिकल।

अनुसंधान प्रगति

शोध का दूसरा दिन

फसलों को थर्मोस्टेट से बाहर निकालें और उन्हें देखें। कालोनियों का अध्ययन. वे धब्बा लगाते हैं. संदिग्ध ग्राम-नेगेटिव डिप्लोकॉसी की उपस्थिति में, कालोनियों को टेस्ट ट्यूब में एक तिरछे माध्यम पर उपसंस्कृत किया जाता है (माध्यम ताज़ा तैयार किया जाना चाहिए और इसमें पर्याप्त मात्रा में कंडेनसेट होना चाहिए) और ऑक्सीडेज के लिए एक नमूना लिया जाता है। ऐसा करने के लिए, पिपेट के साथ कॉलोनी पर 1% डाइमिथाइल पैराफेनिलिनेडियम समाधान की एक बूंद लगाई जाती है, कॉलोनियां गहरे भूरे से काले रंग में बदल जाती हैं।

शोध का तीसरा दिन

संस्कृतियों को थर्मोस्टेट से बाहर निकाला जाता है, स्वैब को अगर तिरछा से लिया जाता है, ग्राम द्वारा दाग दिया जाता है और माइक्रोस्कोप किया जाता है। हिस मीडिया (लैक्टोज, ग्लूकोज, मैनिटोल और माल्टोज) पर टीका लगाया गया। इन कार्बोहाइड्रेट में रक्त सीरम का 30% होना चाहिए। इनोक्यूलेटेड ट्यूबों को थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

शोध का चौथा दिन

थर्मोस्टेट से टेस्ट ट्यूब निकालें, वृद्धि के अभाव में, उन्हें अगले 1-2 दिनों के लिए थर्मोस्टेट में छोड़ दें। वृद्धि की उपस्थिति में, परिणामों को ध्यान में रखा जाता है (तालिका 28)।

सीरोलॉजिकल निदान

बीमारी का तीसरा सप्ताह. रोग की पुरानी अवस्था और संदिग्ध मामलों में, आरएसके को रोगी के सीरम के साथ रखा जाता है (अध्याय 12 देखें)। एंटीजन के रूप में, गोनोकोकी की एक मृत संस्कृति का उपयोग किया जाता है, जो औद्योगिक परिस्थितियों में तैयार किया जाता है। आप अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया लागू कर सकते हैं (अध्याय 12 देखें)।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. गोनोकोकी का पता लगाने के लिए किस सामग्री का उपयोग किया जाता है और इसे कैसे प्राप्त किया जाता है?

2. पेशाब करने (या महिलाओं में शौच करने) के कितने समय बाद शोध के लिए सामग्री ली जा सकती है?

3. तीव्र सूजाक के लिए कौन सी शोध विधि मुख्य है और पुरानी सूजाक के लिए कौन सी विधि मुख्य है?

4. संदिग्ध गोनोरिया के लिए कब और किस प्रकार की सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया दी जाती है?

5. गोनोकोकी को किन सूक्ष्मजीवों से अलग करना आवश्यक है?

शिक्षक से दवा प्राप्त करें. इसकी जांच करें और ग्राम दाग पर ल्यूकोसाइट के अंदर और बाहर स्थित गोनोकोकी को चित्रित करें।

पोषक मीडिया

जर्दी पर्यावरण. खरगोश के मांस से 100 मिलीलीटर एमपीए में 15 मिलीलीटर जर्दी (ताजा चिकन अंडा), 6 मिलीलीटर फिनोल रेड इंडिकेटर, 1 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल में 1.5 मिलीलीटर चीनी मिलाएं।

पोषक माध्यम जलोदर-अगर. खरगोश के मांस से तैयार शोरबा के छानने में 2% अगर, 1% पेप्टोन और 0.5% सोडियम क्लोराइड मिलाया जाता है। एगर के घुलने तक गर्म करें, पीएच को 7.4-7.5 पर सेट करें, 20% सोडियम हाइड्रॉक्साइड के साथ क्षारीय करें। माध्यम को उबाल में लाया जाता है, फ़िल्टर किया जाता है, बाँझ शीशियों में डाला जाता है और 115 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है।

जलोदर पोषक मीडिया के लिए व्यंजन विधि (एमपीए पीएच 7.4-7.5)।

1) खरगोश के मांस या बैल के दिल से मांस का पानी - 100 मिली

कैसिइन हाइड्रोलाइज़ेट - 2 मिली

यीस्ट ऑटोलिसेट - 2 मिली

मवेशियों का रक्त सीरम - 20 मिली

2) खरगोश के मांस या बैल के दिल से मांस का पानी - 100 मिली

हेमोहाइड्रोलाइज़ेट का 5% घोल - 2 मिली

यीस्ट ऑटोलिसेट - 2 मिली

गोजातीय सीरम - 20 मिली

3) खरगोश के मांस या बैल के दिल से मांस का पानी - 100 मिली

चिकन अंडे की जर्दी - 10 मिली

मवेशियों का रक्त सीरम - 20 मिली

इन माध्यमों पर गोनोकोकी की वृद्धि प्रचुर मात्रा में होती है। गोनोकोकस कालोनियों का पता ऑक्सीडेज परीक्षण द्वारा लगाया जा सकता है, जो लाल से काले रंग में बदल जाता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान पद्धति की प्रभावशीलता

यह काफी हद तक पोषक माध्यमों की गुणवत्ता से निर्धारित होता है। में

हमारे देश में, दो प्रकारों का सबसे अधिक परीक्षण और उपयोग किया जाता है

पोषक माध्यम: जलोदर-अगर और गैर जलोदर पोषक माध्यम।

दोनों मीडिया मांस से मीट-पेंटोन अगर (एमपीए) पर आधारित हैं

खरगोश या ताजा गोजातीय दिल. इसे बनाने की विधि

इस प्रकार है। खरगोश का मांस वसा से मुक्त होता है और

टेंडन, मांस की चक्की से गुजारे गए या चाकू से काटे गए,

तौला गया, नल के पानी की दोगुनी मात्रा से भरा गया और इसमें

फॉर्म को निष्कर्षण के लिए एक दिन के लिए रेफ्रिजरेटर में 4° पर छोड़ दिया जाता है।

फिर द्रव्यमान को उबालने के लिए गर्म किया जाता है, 10 मिनट तक उबाला जाता है, ठंडा किया जाता है

चीज़क्लोथ के माध्यम से फ़िल्टर किया गया। छानने के लिए 2% अगर-अगर, 1% जोड़ें

पेप्टोन और 0.5% सोडियम क्लोराइड, अगर-अगर घुलने तक गर्म किया जाता है

और पीएच = 7.5-7.6 सेट करें (क्षारीकरण 20% द्वारा किया जाता है)

सोडियम हाइड्रॉक्साइड विलयन)। माध्यम को उबालकर फ़िल्टर किया जाता है

एक कपास-धुंध फिल्टर के माध्यम से, बाँझ शीशियों में डालें या

फ्लास्क और 0.5 वायुमंडल पर 15-20 मिनट के लिए आटोक्लेव में निष्फल किया गया

दबाव नापने का यंत्र (112ё)।

ताजा गोजातीय हृदय से एमपीए तैयार करने की तकनीक वही है

केवल कुचले हुए दिलों के द्रव्यमान को पानी में उबालना ही है

10 के बजाय 20 मिनट का उत्पादन करें।

पेप्टोन के बिना पोषक माध्यम का आधार तैयार करना संभव है।

इस मामले में, एमपीए तैयार करने के लिए उपरोक्त विधि का उपयोग किया जाता है, लेकिन

पेप्टोन को इसकी संरचना से बाहर रखा गया है, कटा हुआ खरगोश का मांस उबाला गया है

10 के बजाय 5 मिनट और माध्यम को 10 के लिए आटोक्लेव में स्टरलाइज़ करें

दबाव नापने का यंत्र (117ё) पर 0.8 वायुमंडल पर मिनट।

जलोदर अगर

के रोगियों से जलोदर द्रव प्राप्त किया जाना चाहिए

हृदय विफलता के कारण जलोदर, और

इसे ट्रोकार के माध्यम से एक बाँझ बोतल में डाला जाता है और इसमें 5% मिलाया जाता है

संज्ञाहरण के लिए क्लोरोफॉर्म. 10 दिनों के लिए, तरल मिलाया जाता है

बोतल को घुमाकर क्लोरोफॉर्म बनाएं, फिर इसे ऐसे ही छोड़ दें

कमरे के तापमान पर तब तक रखें जब तक क्लोरोफॉर्म पूरी तरह से बोतल की तली में न जम जाए

और तरल का स्पष्टीकरण. उसके बाद, आवश्यकतानुसार, पारदर्शी

जलोदर द्रव को 50 मिलीलीटर बाँझ फ्लास्क में डाला जाता है

कॉटन प्लग और रोजाना 3 दिनों तक उन्हें इसमें रखा जाता है

क्लोरोफॉर्म को वाष्पित करने के लिए 1 घंटे के लिए 56° पर जल स्नान करें

एक कपास प्लग के माध्यम से. जलोदर द्रव की जांच करने के बाद

बाँझपन इसका उपयोग संवर्धन के लिए किया जा सकता है

1/3 और 1/4 की सांद्रता पर गोनोकोकस को अलग करने के लिए पोषक माध्यम

माध्यम का आयतन, जो अनुभवजन्य रूप से निर्धारित होता है।

एसिटिक मीडिया रेसिपी

1. खरगोश के मांस या ताजा गोजातीय हृदय से एमपीए

(рН=7.4-7.5) - 100 मिली, पैरेंट्रल के लिए कैसिइन हाइड्रोलाइज़ेट

प्रोटीन पोषण - 2 मिली, यीस्ट ऑटोलिसेट - 2 मिली, मट्ठा

मवेशियों का खून - 20 मिली (बुधवार केडीएस-1)।

2. खरगोश के मांस या ताजा गोजातीय हृदय से एमपीए

(рН=7.4-7.5) - 100 मिली, 5% हीमोहाइड्रोलाइज़ेट घोल - 2 मिली,

यीस्ट ऑटोलिसेट - 2 मिली, गोजातीय रक्त सीरम

मवेशी - 20 मिली (जीडीएस-2 मीडियम)।

3. खरगोश के मांस या ताजा गोजातीय हृदय से एमपीए

(рН=7.4-7.5) - 100 मिली, बिना टिशू कल्चर के लिए मध्यम 199

एंटीबायोटिक्स - 20 मिली, यीस्ट ऑटोलिसेट - 2 मिली, रक्त सीरम

मवेशी - 20 मिली (मध्यम 199-एसडीएस)।

4. खरगोश के मांस या ताजा गोजातीय हृदय से एमपीए

(рН=7.4-7.5) - 100 मिली, ताजा चिकन अंडे की जर्दी - 10 मिली,

मवेशियों का रक्त सीरम - 20 मिली (बुधवार ZhS)।

अंडे की जर्दी आहार चिकन अंडे से बाँझ प्राप्त की जाती है।

मध्यम तैयारी से तुरंत पहले. इसके लिए,

शराब के साथ पूर्व-उपचारित, खोल को बाँझ के साथ खोला जाता है

चिमटी की मदद से अंडे की सामग्री को एक बाँझ फ़नल में डाल दिया जाता है। बाद

प्रोटीन के बाहर निकलने के बाद, फ़नल में बची हुई जर्दी को स्थानांतरित कर दिया जाता है

बाँझ व्यंजन और एक मापने वाला पिपेट आवश्यक रूप से लिया जाता है

जर्दी के पोषक माध्यम की मात्रा का उत्पादन।

यीस्ट ऑटोलिसेट की तैयारी इस प्रकार है।

बेकर के खमीर को कुचलकर एक बोतल में रख दिया जाता है

मात्रा 4-5 बार खमीर लें, और दो के लिए ऑटोलिसिस के लिए छोड़ दें

60° पर सुखाने वाले कैबिनेट या थर्मोस्टेट में दिन। फिर गाढ़ा

भूरे रंग के द्रव्यमान को गर्म नल के पानी की तिगुनी मात्रा से पतला किया जाता है

पानी, अच्छी तरह से मिलाएं और 10 मिनट के लिए दो बार सेंट्रीफ्यूज करें

1000 आरपीएम (जब तक तरल साफ न हो जाए)। सतह पर तैरनेवाला

तरल को सूखा दिया जाता है, इसमें 0.5% सोडियम क्लोराइड मिलाया जाता है, समायोजित किया जाता है

पीएच 7.4-7.5 और 1 वातावरण पर 30 मिनट के लिए ऑटोक्लेव्ड

मैनोमीटर (120ё). रेफ्रिजरेटर में छोटे कंटेनरों में स्टोर करें

यीस्ट ऑटोलिसेट को 1.5% घोल से बदला जा सकता है

चारा खमीर अर्क (ईकेडी) समान मात्रा में (2 मिली) 1.5%

सूखी ईपीसी को प्रयोगशाला में घोलकर ईपीसी घोल तैयार किया जाता है

बाँझ आसुत जल. इस तरह तैयार किया

तरल अर्क को बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है और उसमें निष्फल किया जाता है

20 मिनट के लिए 0.5 बार्ग पर आटोक्लेव करें।

उपरोक्त सभी पोषक तत्वों में मीडिया, रक्त सीरम

मवेशियों को सामान्य देशी द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है

बैक्टीरियोलॉजिकल पोषक तत्व मीडिया के लिए सीरम, जो

यह वही सीरम है, लेकिन एक परिरक्षक के अतिरिक्त के साथ।

समृद्ध माध्यम की तैयारी

एमपीए, एक शीशी या फ्लास्क में स्थित होता है, जिसे पानी में पिघलाया जाता है

स्नान करें, 56-58ё तक ठंडा करें और इसमें सामग्री डालें

व्यंजनों में पहले बताए गए अनुपात। 3-3.5 पर एमपीए से समृद्ध

एमएल को बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है, माध्यम को झुकाया जाता है और सिक्त किया जाता है

0.5 मिली बाँझ मांस-पेप्टोन शोरबा या आइसोटोनिक

सख्त होने के बाद सोडियम क्लोराइड का घोल। जांच के लिए

बाँझपन के लिए, माध्यम को थर्मोस्टेट में प्रति दिन 35-37o पर रखा जाता है।

अंडे को छोड़कर उपरोक्त सभी गैर-एसिटिक मीडिया पारदर्शी हैं,

उन पर सूक्ष्मजीवों की कॉलोनियों को अलग करना आसान है। बुधवार,

अंडे से समृद्ध, मैलापन में भिन्न, यह पीला होता है, उगाया जाता है

उसकी कॉलोनियाँ, विशेष रूप से, गोनोकोकी, ख़राब रूप से भिन्न हैं। हालाँकि, विकास

इस माध्यम पर गोनोकोकस प्रचुर मात्रा में होता है और इसकी कॉलोनियाँ आसानी से हो सकती हैं

1% समाधान के साथ वृद्धि उपचार द्वारा पता लगाया गया

डाइमिथाइल पैराफेनिलिडेनमाइन या अन्य ऑक्सीडेज अभिकर्मक,

जो गोनोकोकस कालोनियों को लाल रंग में रंग देता है

माध्यम की पीली पृष्ठभूमि के विपरीत। जर्दी का उपयोग

ऑक्सीडेज अभिकर्मक के साथ माइक्रोबियल विकास उपचार के बिना मीडिया

प्रयोगशाला संस्कृति माध्यम के प्रत्येक नए बैच की गुणवत्ता

उस पर बुआई करके उत्पादन की जाँच करनी चाहिए

उन रोगियों से पैथोलॉजिकल सामग्री जिनमें बैक्टीरियोस्कोपिक रूप से

गोनोकोकी पाए गए।

4o पर रेफ्रिजरेटर में एमपीए का शेल्फ जीवन 1 से अधिक नहीं होना चाहिए

महीना, समृद्ध वातावरण - 7 दिन।

इस तथ्य के कारण कि उपरोक्त वातावरण के लिए अल्प समयावधि संभव है

भंडारण, विनिर्माण की एक विधि विकसित की

लियोफिलाइज्ड जलोदर मुक्त पोषक माध्यम, जो नीचे है

शीर्षक "गोनोकोकल आइसोलेशन कल्चर मीडियम, ड्राई"

दो बोतलों में उपलब्ध है: भाग I (मध्यम आधार) और भाग II

(किलेबंदी करने वाले)। भाग I में कार्य वातावरण तैयार करना

100 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल डालें और गर्म करें

पानी के स्नान में 100° पर तब तक रखें जब तक कि शीशी की सामग्री पूरी तरह से घुल न जाए

(30 मिनट के अंदर). पानी में पर्यावरण का सामना करने के लिए अतिरिक्त समय

स्नान नहीं करना चाहिए, टीके। इससे इसकी गुणवत्ता कम हो जाती है। भाग II में शामिल हैं

24 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल (घुलनशील संवर्धन)।

पदार्थ तुरंत होते हैं)। फिर, शर्तों के अधीन

बाँझपन, भाग II को 56° तक ठंडा किए गए भाग I में स्थानांतरित कर दिया जाता है,

मिश्रित, बाँझ परीक्षण ट्यूबों में डाला गया, बेवेल किया गया और

पहले बताए अनुसार मॉइस्चराइज़ करें।

सूखा माध्यम खरगोश के मांस या बैल के दिल से तैयार किया जाता है,

रेसिपी 1 (KDS-1 माध्यम) में सूचीबद्ध समृद्ध पदार्थों के अलावा

इसमें 1 µg/ml की सांद्रता पर ओरोटिक एसिड होता है। बुधवार

उच्च गुणवत्ता, बैक्टीरियोलॉजिकल में उपयोग के लिए सुविधाजनक

प्रयोगशालाएँ, क्योंकि शुष्क वातावरण को कार्यशील वातावरण में परिवर्तित करने के लिए इसकी आवश्यकता होती है

केवल बाँझ आसुत जल।

अतिरिक्त के साथ जलोदर मुक्त पोषक माध्यम का उपयोग

एंटीबायोटिक्स और ऑरोटिक एसिड के साथ अच्छे परिणाम मिलते हैं

बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स, जिसमें एक्सट्रेजेनिटल भी शामिल है

सूजाक: टॉन्सिल और ग्रसनी, मलाशय का सूजाक। एंटीबायोटिक दवाओं

सहवर्ती गोनोकोकस के विकास को रोकने के लिए जोड़ा गया

जीवाणु वनस्पति, जो गोनोकोकस की वृद्धि दर को बढ़ाती है,

इसकी एकल कालोनियों का पता लगाने और शुद्ध में अलगाव की सुविधा प्रदान करता है

संस्कृति। 20.0 यू/एमएल पॉलीमीक्सिन एम सल्फेट और 6.2 यू/एमएल जोड़ें

रिस्टोमाइसिन सल्फेट; बाद वाले के बजाय, आप उपयोग कर सकते हैं

लिनकोमाइसिन हाइड्रोक्लोराइड - 2 μg / ml। ओरोटिक एसिड इंजेक्ट किया जाता है

1 μg/ml की मात्रा में पोषक माध्यम की संरचना।

ऐसा करने के लिए, ऑरोटिक एसिड 1 मिलीग्राम (1000 μg) और का एक नमूना लें

1.0 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल में पतला (प्राप्त करें)।

1000 एमसीजी युक्त कार्यशील घोल जिसे संग्रहित किया जा सकता है

10 दिनों के लिए रेफ्रिजरेटर) और पानी के स्नान में रोगाणुरहित करें 15

मिनट, फिर परिणामी समाधान का 0.1 मिलीलीटर लें और इसमें जोड़ें

100 मिलीलीटर समृद्ध पोषक माध्यम। एंटीबायोटिक दवाओं के साथ पर्यावरण

एंटीबायोटिक-मुक्त माध्यम के साथ एक साथ उपयोग किया जाना चाहिए

(एक टेस्ट ट्यूब एंटीबायोटिक्स वाले माध्यम के साथ, दूसरी उनके बिना), क्योंकि

हालांकि दुर्लभ, गोनोकोकस के ऐसे उपभेद हैं जो संवेदनशील हैं

उपरोक्त एंटीबायोटिक्स.

भंडारण माध्यम (परिवहन)

संरक्षण माध्यम की संरचना: 1) 1 लीटर आसुत जल,

क्लोरीन से मुक्त, 30 ग्राम अगर-अगर; 2) 900 मिली आसुत

क्लोरीन मुक्त पानी, 2 मिली थियोग्लाइकोलिक एसिड, 12 मिली 1M

सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल, 20% जलीय सोडियम घोल का 100 मिली

मोनोप्रतिस्थापित फॉस्फेट, 1% क्लोराइड घोल का 20 मिली

कैल्शियम. अंतिम मिश्रण (2) ताजा तैयार में मिलाया जाता है

अगर (1), पीएच को 7.3-7.4 पर समायोजित करें, माध्यम का 10 मिलीलीटर डालें

बाँझ परीक्षण ट्यूब, 1 घंटे के लिए बहती भाप से निष्फल।

लकड़ी की डंडियों या छड़ों पर रुई के फाहे बनाए जाते हैं

लगभग 2 मिमी व्यास वाला स्टेनलेस स्टील, जो वेडेड में लगाया गया है

स्टॉपर्स, फॉस्फेट बफर में 20 मिनट तक उबाले गए, pH=7.4, और

1% जलीय घोल में 24 घंटे के लिए बारीक भिगोएँ

कुचला हुआ कोयला. सूखने के बाद रुई के फाहे

सही है, बैक्टीरियोलॉजिकल टेस्ट ट्यूब में डालें

उचित व्यास का (माध्यम के साथ परीक्षण ट्यूबों के व्यास के बराबर) और

1 वायुमंडल (तापमान) पर 20 मिनट के लिए आटोक्लेव में रोगाणुरहित किया जाता है

फॉस्फेट बफर तैयार करने के लिए, दो समाधान तैयार किए जाते हैं: 1

घोल - 1 लीटर आसुत जल में 28.4 ग्राम सोडियम घोला जाता है

अप्रतिस्थापित फॉस्फेट (0.2M); 2 समाधान - 1 एल में

आसुत जल में 27.8 ग्राम साइट्रिक एसिड (0.1 एम) घोलें।

घोल 1 का 181.7 मिली और घोल 2 का 18.3 मिली मिलाएं।

पर्यावरण को सुरक्षित रखते हुए बीज उत्पादन

निम्नानुसार किया जाता है। मरीज की जांच करते डॉक्टर

टेस्ट ट्यूब से टैम्पोन निकालता है, इसे रोग के फोकस में डालता है

भिगोने के लिए कुछ सेकंड (आप कई कर सकते हैं

दक्षिणावर्त और वामावर्त गति करते हुए), इसे बिना छुए हटा देता है

आसपास की वस्तुओं को संरक्षण माध्यम वाली एक परखनली में डालें। ऊपर

कॉटन प्लग, टेस्ट ट्यूब को रबर निपल से बंद किया जाता है। भिजवाने से पहले

बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला में सामग्री, संस्कृतियों को 4 पर रखा जाता है

न्यूनतम अवधि के लिए रेफ्रिजरेटर में रखें, लेकिन एक दिन से अधिक नहीं। इसके साथ ही

पैथोलॉजिकल सामग्री लें और स्मीयर बनाएं

बैक्टीरियोस्कोपिक जांच, जिसे भेजा जाता है

संस्कृति के साथ-साथ प्रयोगशाला। जीवाणु विज्ञान प्रयोगशाला में

रसीद के तुरंत बाद पैथोलॉजिकल सामग्री के साथ स्वाब

भंडारण माध्यम से हटा दिया जाता है और उन्हें सतह पर टीका लगाने के लिए उपयोग किया जाता है

परखनलियों में तिरछा पोषक माध्यम। प्रत्येक टैम्पोन बनाया जाता है

दो परखनलियों में पोषक माध्यम पर बुआई करें। सतह पर बीजारोपण

पोषक माध्यम को ज़िगज़ैग गति में बनाया जाना चाहिए

स्वैब को माध्यम की सतह पर घुमाकर। यदि परीक्षण ट्यूबों का व्यास

संरक्षण माध्यम और विकास माध्यम समान है, आप स्वाब कर सकते हैं

टीकाकरण के बाद, संपर्क में आने वाली दूसरी परखनली में छोड़ दें

पोषक माध्यम. फसलों को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और उगाया जाता है

एक डेसीकेटर में 36-37 साल की उम्र। उपयोग करते समय इस बात का ध्यान रखना चाहिए

संरक्षण पर्यावरण, गोनोकोकस की वृद्धि बाद में हो सकती है

पोषक तत्वों पर पैथोलॉजिकल सामग्री की सीधी बुआई

संस्कृतियों के साथ काम करना

गोनोकोकी को टेस्ट ट्यूब में उगाया जा सकता है

पेट्री डिशेस; पहली विधि महत्वपूर्ण बचत प्रदान करती है

पर्यावरण। गोनोकोकी की बुआई का प्रतिशत बढ़ाने के लिए बीज बोया गया

पोषक तत्व मीडिया को 20% के साथ एक डेसीकेटर में थर्मोस्टेट में रखा जाता है

सल्फ्यूरिक एसिड और सोडियम बाइकार्बोनेट के बीच प्रतिक्रियाएं: एक डेसीकेटर में

5 लीटर की मात्रा के साथ, 10% सल्फ्यूरिक एसिड के 50 मिलीलीटर के साथ एक गिलास रखें