Hranjive podloge za uzgoj gonokoka. Hranljivi medij za izolaciju i kultivaciju gonokoka Kultura za gonoreju iz oka.
Ovaj agar sa dodatkom krvi, hemoglobina ili drugih aditiva preporučuje se za selektivnu izolaciju gonokoka.
spoj**:** Sastav je verifikovan i prilagođen kako bi zadovoljio tražene parametre
Priprema:Pomiješajte 7,2 g praha u 100 ml destilovane vode kako biste pripremili medij dvostruke jačine. Zagrijte do ključanja da se čestice potpuno otopi. Sterilizirajte autoklavom na 1,1 atm (121°C) 15 minuta. Ohladiti na 50°C i aseptički dodati posebno pripremljenih 100 ml 2% sterilnog rastvora hemoglobina (FD022) i GC dodatak (FD021). Dobro promiješajte i sipajte u Petrijeve posude. Da bi se dala selektivna svojstva, u medijum se mogu dodati antibiotici uključeni u sledeće aditive: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).
Za pripremu čokoladnog agara pripremite medij normalne koncentracije miješanjem 3,6 g praha u 100 ml destilovane vode. Sterilizirajte, dodajte do 5% (v/v) sterilne defibrinirane krvi i zagrijte medij na 80°C 10 minuta.
Princip i evaluacija rezultata:Ovaj agar sa dodatkom krvi ili hemoglobina i drugih aditiva preporučuje se za selektivnu izolaciju i kultivaciju tako izbirljivih mikroorganizama kao što su gonokoki i bakterije Haemophilus influenzae. Johnston je razvio čokoladni agar na kojem se rast mogao postići u roku od 24 sata Neisseria gonorrhoeae(1). Kasnije su drugi autori (2) poboljšali podlogu uvođenjem hemoglobina u njen sastav.
Agar sadrži poseban pepton - izvor hranjivih tvari za mikroorganizme. Škrob pomaže u neutralizaciji toksičnih supstanci koje proizvodi Neisseria, a fosfati sprječavaju promjenu pH vrijednosti koja je rezultat stvaranja amina, što također može utjecati na rast i održivost mikroorganizama. Hemoglobin služi kao izvor faktora X za hemofilne bakterije. Drugi aditiv obogaćuje podlogu faktorom V (NAD, nikoninamid adenin dinukleotid), neophodnim za Haemophilus influenzae, kao i aminokiselinama, vitaminima, ionima gvožđa itd., koji stimuliše rast patogene neiserije.
Nemojte koristiti pamučne štapiće za prikupljanje materijala. Sjetva se vrši odmah nakon sakupljanja materijala. To se mora učiniti tako da postoje zone gustog i rijetkog rasta. Inokulacija se inkubira na 37°C u atmosferi od 5-10% ugljičnog dioksida i 70% vlage. Sve sumnjive kolonije treba testirati biohemijskim i/ili serološkim testovima.
Kontrola kvaliteta: Izgled praha:Homogeni sipki svijetložuti prah.
Gustina gotovog medija:Formira se medij koji po gustini odgovara 1,0% agar gelu.
Boja i prozirnost gotovog medija:Baza medijuma je svetlo žute boje, providna ili blago opalescentna. Nakon dodavanja hemoglobina, medij postaje čokoladno smeđi i neproziran ako se u Petrijevim posudama formira gel.
Kiselost okoline:Na 25°C, vodeni rastvor (3,6% w/v) ima pH od 7,2 ± 0,2.
Kulturna dobra:Karakteristike rasta referentnog soja nakon 40-48 sati na 35-37°C na čokoladnom agaru pripremljenom na ovoj osnovi, u prisustvu atmosfere od 5-10% ugljičnog dioksida i 70% vlage.
Laboratorijske metode se široko koriste u dijagnostici spolno prenosivih bolesti genitourinarnog sistema: gonoreje, sifilisa, trihomonijaze itd. Prisustvo bolesti zahtijeva mjere za identifikaciju uzroka infekcije.
SVG hranljiva podloga je namenjena za izolaciju i kultivaciju gonokoka prilikom proučavanja materijala od pacijenta. Svaki komplet je dizajniran za pripremu 110 ml gonokokne podloge, spremnog za upotrebu.
Postavite sadržajKomplet za dobijanje hranljive podloge treba čuvati na temperaturi od 2 - 8 °C ne duže od 12 meseci. Čvrsta hranljiva podloga može se čuvati u epruvetama ili Petrijevim posudama ne duže od 7 dana. Komplet za pripremu hranljivog medijuma uključuje:
- baza: agar, ekstrakt kvasca, pepton, skrob, soli;
- selektivni aditiv: koenzimi, lizat eritrocita, antifungici, antibiotici, šećeri;
- upute za korištenje kompleta.
Tehnika uključuje nekoliko faza, od kojih se svaka mora odvijati u skladu s određenim zahtjevima. Po završetku svih faza dijagnostike bolesti metodom kultivacije uzročnika na gonokoknoj podlozi, rezultati se bilježe nakon 24 sata, 48 sati i 72 sata. Kod akutne gonoreje, rast gonokoka se opaža tokom prvog dana, kod hronične gonoreje - do 72 sata.
Priprema baznog rastvora podloge za kulturološko dijagnostiku vrši se sipanjem baze u posudu u kojoj se nalazi destilovana voda (100 ml) radi naknadnog bubrenja. Dobivena suspenzija se stavlja u vodeno kupatilo i povremeno se miješa dok se baza potpuno ne otopi, a zatim se otopina kuha 2 minute. Rastvor selektivnog aditiva priprema se otapanjem u destilovanoj vodi (10 ml) uz mešanje.
Gotov hranljivi medij se formira dodavanjem rastvora selektivnog aditiva u bazni rastvor. Dobijeni medij se sipa u sterilne Petrijeve zdjelice. Prije testiranja, okruženje gonokoka mora se održavati jedan sat na temperaturi od 37 °C. Zatim se materijal sije u skladu sa naredbom Ministarstva zdravlja "O objedinjavanju mikrobioloških (bakterioloških) metoda istraživanja koje se koriste u kliničko-dijagnostičkim laboratorijama medicinskih ustanova."
Cijena na upit
Stavku možete dodati u korpu tako što ćete navesti količinu
Proizvođač: Pasteur istraživački institut za epidemiologiju i mikrobiologiju
Država Rusija
Jedinica Mjera: set
Vrsta pakovanja: kartonska kutija
Šifra dobavljača:
Opis
Skup reagensa za izolaciju gonokoka metodom kulture u proučavanju kliničkog materijala pacijenata sa upalnim bolestima genitourinarnog sistema. Dizajniran za pripremu 110 ml čvrstog hranljivog medija, spreman za upotrebu
Funkcionalna namjena
Komponente GHS kompleta pružaju optimalne uslove za rast Neisseria gonorrhoeae do količina potrebnih za formiranje vidljivih kolonija, a selektivni aditiv inhibira rast protozoa, gljivica i većine druge povezane flore potencijalno sadržane u uzorku.
Metodologija uključuje nekoliko faza, od kojih se svaka mora provesti u skladu s određenim zahtjevima. Po završetku svih faza dijagnostike bolesti metodom kultivacije uzročnika na gonokoknoj podlozi, vizualni zapis rezultata se vrši nakon 18-24 sata, 48 i 72 sata. Otkrivaju se svijetlosive, blago zamućene okrugle kolonije tipične za gonokoke. Kod akutne gonoreje, rast gonokoka se bilježi tokom prvog dana, kod kronične gonoreje - do 72 sata. Rezultat se smatra negativnim ako nema rasta nakon 7 dana inkubacije
Postavite sadržaj
1. Hranljiva podloga, suha - 4,1g x 1 boca;
agar, ekstrakt kvasca, pepton, skrob, soli;
izgled: higroskopni prah svijetlo žute boje;
2. Selektivni aditiv, liofiliziran - 1 boca;
koenzimi, lizat eritrocita, antifungici, antibiotici, šećeri;
izgled: liofilizat ružičasto-bež boje.
Pripremljena podloga je providna, svijetlo žute boje, sa blagom opalescencijom, dozvoljen je blagi sediment.
pH 7,2- 7,4
Obrazac za oslobađanje: u kartonskoj kutiji zajedno sa uputstvom za upotrebu.
Uslovi skladištenja: na temperaturi od +2...8°C ne duže od 12 meseci, dozvoljeno je skladištenje na temperaturi do +25°C ne duže od 2 nedelje.
Pripremljeni hranljivi medij može se čuvati u epruvetama ili Petrijevim posudama ne duže od 7 dana.
Registrovan kod Roszdravnadzora
Neisseria gonorrhoeae pripada porodici Neisseriaceae, rodu Neisseria. Gonokoke je otkrio Neisser 1879. godine i cijela porodica je dobila ime po njemu.
Morfologija. Gonokoki su diplokoki koji se sastoje od dvije koke u obliku zrna koje leže konkavno jedna uz drugu (podsjećaju na zrna kafe). Veličina gonokoka je 1,2-1,3 × 0,7-0,8 mikrona. Polimorfne su; uz velike, postoje vrlo male bakterije L-oblika nepravilnog oblika. Gonokoki su nepokretni i nemaju spore. U patološkom materijalu (gnoj) nalazi se supstanca slična kapsuli. Gram negativan. Pod utjecajem lijekova i drugih supstanci brzo se mijenjaju: pojavljuju se gram-pozitivni oblici. U patološkom materijalu nalaze se intracelularno (u leukocitu), ali mogu biti i izvan ćelije. Može biti u obliku pojedinačnih koka (vidi sliku 4).
Uzgoj. Gonokoki su aerobi. Veoma zahtjevna za hranljive podloge. Rastu na podlozi koja sadrži prirodni protein (ljudski) - krv, serum, na temperaturi od 37°C i pH 7,2-7,4. Mediji treba da budu sveže pripremljeni i vlažni. Sjetvu treba obaviti odmah nakon uzimanja materijala. Na serumskom mediju gonokoki formiraju male kolonije od 1-2 mm, prozirne, sjajne sa glatkim rubovima, nalik kapljicama rose. Na krvnom mediju, hemoliza se ne daje. U surutkinoj juhi daju blago zamućenje i film koji se taloži na dno epruvete. Sa slabim rastom nakon 24 sata, usjevi se ostavljaju u termostatu drugi dan.
Enzimska svojstva. Saharolitička svojstva su slabo izražena. Gonokoki razgrađuju samo jedan šećer - glukozu sa stvaranjem kiseline. Nemaju proteolitička svojstva.
Formiranje toksina. U ćelijskom zidu gonokoka nalazi se toksična tvar - lipopolisaharid (malo proučavan).
Antigenska struktura. Antigenska struktura je heterogena i lako se menja pod uticajem faktora sredine. Ne postoji općeprihvaćena podjela gonokoka na serovare i serotipove.
Otpornost na faktore okoline. U vanjskom okruženju gonokoki nisu vrlo stabilni. Na temperaturi od 56-60°C uginu. Na temperaturi od 40°C njihova vitalnost naglo opada. Niske temperature i sušenje brzo ih uništavaju. Ali ostaju u gnoju do 24 sata.Dezinfekcioni rastvori - 1% rastvor fenola, živin hlorid 1:1000 ubijaju gonokoke u roku od nekoliko minuta. Gonokoki su posebno osjetljivi na soli srebra - 1% otopina srebrovog nitrata ih odmah ubija. UV zraci ih ubijaju za nekoliko minuta.
Osjetljivost životinja. Životinje nisu osjetljive na gonokoke. Međutim, intraperitonealna injekcija gonokoknog toksina u bijele miševe uzrokuje njihovu smrt.
Izvori infekcije. Osoba sa gonorejom.
Putevi prijenosa. Kontaktirajte domaćinstvo (seksualno), rjeđe preko kontaminiranih predmeta (peškira, sunđera itd.).
Bolesti kod ljudi. Gonoreja i blenoreja.
Patogeneza. Prirodni domaćin gonokoka je bolesna osoba. Gonokoki prodiru kroz sluzokožu mokraćne cijevi (kod žena, uretru i cerviks). Faktor patogenosti gonokoka je prisustvo pila, koji, povezujući se s mikroresicama cilindričnog epitela, olakšavaju prodiranje gonokoka u epitelnu ćeliju, uzrokujući akutni upalni proces u sluznici.
Klinički, gonoreja se manifestuje bolom tokom mokrenja, ispuštanjem gnoja iz uretre i vagine. Bolest je akutna, ali ponekad postaje hronična. Gonokoki mogu uzrokovati gonorejski konjuktivitis - blenoreju (gnojna upala sluznice očiju kod novorođenčadi). Gonokoki rijetko prodiru iz uretre u druge organe, ali ponekad mogu uzrokovati artritis, endokarditis itd.
Imunitet. Ne postoji prirodna otpornost na gonokoke. Prenesena bolest takođe ne stvara imunitet. Opažena fagocitoza je nepotpuna.
Prevencija. Zdravstveno obrazovanje. Podizanje kulturnog i higijenskog nivoa. Ne postoji posebna prevencija. Da bi se spriječila blenoreja, djeci se odmah po rođenju mora ubrizgati 1-2 kapi 30% otopine albucida u konjunktivalnu vreću.
Tretman . Antibiotici (penicilin, bicilin, streptomicin, itd.). Koriste se i sulfonamidni lijekovi. Za hronični oblik koristi se vakcina protiv gonokoka.
Kontrolna pitanja1. Opišite morfološka svojstva gonokoka.
2. Koja je enzimska aktivnost i proizvodnja toksina gonokoka?
3. Koja je otpornost gonokoka. Na koji lijek su gonokoki posebno osjetljivi?
4. Koje bolesti uzrokuju gonokoki i njihova patogeneza.
Mikrobiološki pregledSvrha istraživanja: identifikacija gonokoka i antigonokoknih antitijela.
Materijal za istraživanje
1. Iscjedak iz sluznice uretre kod muškaraca.
2. Iscjedak iz sluzokože mokraćne cijevi i grlića materice kod žena.
3. Gnojni iscjedak iz očiju.
4. Krv za serum.
Bilješka. Za bakterioskopsko i bakteriološko ispitivanje uzima se materijal: 1) prije početka liječenja antibioticima: 2) najkasnije 10 dana nakon završetka liječenja antibiotikom; 3) najkasnije 2 sata nakon poslednjeg mokrenja; 4) ne ranije od 2 sata nakon ispiranja.
Osnovne metode istraživanja
1. Mikroskopski (uglavnom se koristi za akutne oblike).
2. Mikrobiološka.
3. Serološki.
Napredak studije
Drugi dan studija
Izvadite usjeve iz termostata i pregledajte ih. Proucavanje kolonija. Prave mrlje. Ako postoje sumnjive gram-negativne diplokoke, kolonije se subkulturiraju na kosi medij u epruvetama (medij mora biti svježe pripremljen i sadržavati dovoljnu količinu kondenzata) i testirati na oksidazu. Da biste to učinili, na koloniju se pipetom nanese kap 1% otopine dimetilparafenilendiamina; kolonije mijenjaju boju iz tamno smeđe u crnu.
Treći dan studija
Kulture se vade iz termostata, prave se razmazi od kosog agara, boje se po Gramu i mikroskopski ispituju. Inokulirajte na Hiss podloge (laktoza, glukoza, manitol i maltoza). Ovi ugljikohidrati trebaju sadržavati 30% krvnog seruma. Inokulirane epruvete se stavljaju u termostat.
Četvrti dan istraživanja
Izvadite epruvete iz termostata; ako nema rasta, ostavite ih u termostatu još 1-2 dana. Ako postoji rast, rezultati se uzimaju u obzir (Tabela 28).
Serološka dijagnoza
Treća nedelja bolesti. U hroničnom toku bolesti iu sumnjivim slučajevima, RSC se radi pacijentovim serumom (videti Poglavlje 12). Kao antigen koristi se ubijena kultura gonokoka, koja se priprema u industrijskim uslovima. Možete koristiti reakciju indirektne hemaglutinacije (vidi Poglavlje 12).
Kontrolna pitanja
1. Koji materijal se koristi za identifikaciju gonokoka i kako se dobija?
2. Koliko dugo nakon mokrenja (ili ispiranja kod žena) se može uzeti materijal za istraživanje?
3. Koja je metoda istraživanja glavna za akutni, a koja za kronični oblik gonoreje?
4. Kada i koja vrsta serološke reakcije se daje za sumnju na gonoreju?
5. Od kojih mikroorganizama je potrebno razlikovati gonokoke?
Uzmi drogu od učitelja. Proučite ga i skicirajte gonokoke koji se nalaze unutar i izvan leukocita pomoću boje po Gramu.
Kulturni mediji
Žumance srednje. U 100 ml MPA iz mesa kunića dodati 15 ml žumanca (svježe kokošje jaje), 6 ml indikatora fenol crvenog, 1,5 ml šećera rastvorenog u 1 ml sterilne destilovane vode.
Hranljivi medij ascites-agar. Filtratu juhe pripremljene od mesa kunića dodati 2% agara, 1% peptona i 0,5% natrijum hlorida. Zagrijte dok se agar ne otopi, postavite pH na 7,4-7,5 i alkalizirajte sa 20% natrijum hidroksida. Medij se dovede do ključanja, filtrira, sipa u sterilne bočice i steriliše u autoklavu 15 minuta na 115°C.
Recepti za podloge bez ascitesa (MPA pH 7,4-7,5).
1) mesna voda od zečjeg mesa ili volovskog srca - 100 ml
kazein hidrolizat - 2 ml
autolizat kvasca - 2 ml
serum goveda - 20 ml
2) mesna voda od zečjeg mesa ili volovskog srca - 100 ml
5% rastvor hemohidrolizata - 2 ml
autolizat kvasca - 2 ml
goveđi serum - 20 ml
3) mesna voda od zečjeg mesa ili volovskog srca - 100 ml
pileće žumance - 10 ml
serum goveda - 20 ml
Rast gonokoka na ovim podlogama je obilan. Kolonije gonokoka mogu se otkriti pomoću oksidaznog testa, u kojem postaju crvene, postaju crne.
Efikasnost metode bakteriološkog istraživanja u
je u velikoj mjeri određena kvalitetom hranljivih podloga. IN
U našoj zemlji se najviše testiraju i koriste dvije vrste
hranljive podloge: ascites-agar i hranljive podloge bez ascitesa.
Osnova oba podloga je mesni penton agar (MPA) iz mesa
zečeve ili svježa volovska srca. Način njegove pripreme
je kako slijedi. Meso kunića je oslobođeno masnoće i
tetive, propuštene kroz mlin za meso ili iseckane nožem,
izvagano, napunjeno duplom zapreminom vode iz slavine i u takvom
formu ostavite u frižideru na 4°C jedan dan za ekstrakciju.
Zatim se masa zagreje do ključanja, kuva 10 minuta, ohladi i
filtrirati kroz gazu. U filtrat dodajte 2% agar-agara, 1%
peptona i 0,5% natrijum hlorida, zagrijavajte dok se agar-agar ne otopi
i postaviti pH=7,5-7,6 (alkalizacija je 20%
rastvor natrijum hidroksida). Prokuhajte medijum, filtrirajte
kroz pamučno-gazni filter, sipa se u sterilne boce ili
tikvice i sterilizirati u autoklavu 15-20 minuta na 0,5 atmosfere
manometar (112o).
Tehnika pripreme MPA od svježih goveđih srca je ista kao
samo kuhati masu zgnječenih srca u vodi
proizvesti 20 minuta umjesto 10.
Moguće je pripremiti bazu hranljive podloge bez peptona.
U ovom slučaju koriste gornju metodu za pripremu MPA, ali
pepton je isključen iz njegovog sastava, sjeckano meso kunića se kuha
5 minuta umjesto 10 i sterilizirajte medij u autoklavu 10
minuta na 0,8 atmosfere na manometru (117o).
Ascites agar
Ascitičnu tečnost treba uzeti od pacijenata sa
ascitesa uzrokovanog zatajivanjem srca, i
proizveden kroz trokar u sterilnu bocu i dodati 5%
hloroform za anesteziju. 10 dana tečnost se meša sa
hloroforma rotirajući bocu, a zatim je ostavite
sobnoj temperaturi dok se hloroform potpuno ne slegne na dno boce
i čišćenje tečnosti. Nakon toga, ako je potrebno, transparentno
ascitična tečnost se sipa u sterilne tikvice od 50 ml sa
pamučne čepove i svakodnevno se stavljaju 3 dana
vodeno kupatilo na temperaturi od 56°C tokom 1 sata da bi se hloroform ispario
kroz pamučni čep. Nakon provjere ascitične tekućine za
sterilnost može se koristiti za obogaćivanje
hranljiva podloga za izolaciju gonokoka u koncentraciji od 1/3 i 1/4
zapremine medijuma, koja je određena eksperimentalno.
Recepti za podloge bez ascitesa
1. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca
(pH=7,4-7,5) - 100 ml kazein hidrolizat za parenteralnu
proteinska ishrana - 2 ml, autolizat kvasca - 2 ml, surutka
krv goveda - 20 ml (medij KDS-1).
2. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, 5% rastvor hemohidrolizata - 2 ml,
autolizat kvasca - 2 ml, serum goveđe krvi
goveda - 20 ml (srednja GDS-2).
3. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, medijum 199 za kulture tkiva bez
antibiotici - 20 ml, autolizat kvasca - 2 ml, krvni serum
goveda - 20 ml (srednja 199-SDS).
4. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, svježe žumance pilećeg jajeta - 10 ml,
serum goveda - 20 ml (JS medijum).
Žumance se dobija sterilno iz dijetalnih kokošjih jaja
neposredno prije pripreme podloge. Za ovo,
Nakon prethodnog tretmana alkoholom, školjka se otvara sterilnom
pincetom i sipajte sadržaj jajeta u sterilni lijevak. Poslije
Nakon što bjelanjak iscuri, prebacuje se žumance koje je ostalo u lijevu
sterilne posude i mjernu pipetu uzimaju potrebne
proizvodnja hranljivog medijuma zapremine žumanca.
Priprema autolizata kvasca je kako slijedi.
Pekarski kvasac se drobi i stavlja u bocu veću od
zapremina kvasca se uzima 4 - 5 puta, a ostavlja se na autolizu za dva
dana u sušioniku ili termostatu na 60°C. Onda gusta
smeđa masa se razblaži sa trostrukom zapreminom tople vode iz slavine
vode, dobro promešati i centrifugirati dva puta po 10 minuta na
1000 o/min (dok se tečnost ne izbistri). supernatant
tečnost se ocijedi, doda joj se 0,5% natrijum hlorid, podesi
pH na 7,4-7,5 i autoklavirajte 30 minuta na 1 atmosferi
manometar (120ë). Čuvati u malim pakovanjima u frižideru na
Autolizat kvasca može se zamijeniti 1,5% otopinom
ekstrakt krmnog kvasca (EKD) u istoj količini (2 ml) 1,5%
EKD rastvor se priprema u laboratoriji od suvog EKD-a otapanjem u njemu
sterilna destilovana voda. Ovako kuvano
tečni ekstrakt se sipa u sterilne epruvete i steriliše
autoklavirati na 0,5 atmosfere na manometru 20 minuta.
U svim gore navedenim hranjivim podlogama, krvni serum
goveda se mogu zamijeniti normalnim domaćim
serum za bakteriološke podloge za kulturu, koji
je isti serum, ali sa dodatkom konzervansa.
Priprema obogaćenog medija
MPA, koji se nalazi u boci ili tikvici, topi se u vodi
kupke, ohladiti na 56-58° i dodati sastojke
omjere navedeni ranije u receptima. Obogaćen MPA na 3-3,5
ml se sipa u sterilne epruvete, medijum se kosi i navlaži
0,5 ml sterilne mesne peptonske čorbe ili izotonika
rastvor natrijum hlorida nakon što se stvrdne. Za provjeru
Da bi se osigurala sterilnost, podloga se stavlja u termostat na 35-37°C dnevno.
Svi navedeni mediji bez ascitesa, osim medija za jaja, su transparentni,
Na njima je lako razlikovati kolonije mikroorganizama. srijeda,
obogaćen jajetom, mutan je, žut je, narastao
Njegove kolonije, posebno gonokoki, slabo se razlikuju. Međutim, rast
gonokoka ima u izobilju na ovoj podlozi i njegove kolonije lako mogu biti
otkriveno tretiranjem rasta sa 1% rastvorom
dimetilparafenilendiamin ili drugi oksidazni reagens,
koja boji kolonije gonokoka u crveno, dobro
u kontrastu sa žutom pozadinom okoline. Upotreba žumanca
okruženja bez tretiranja rasta mikroorganizama oksidaznim reagensom nije
Kvalitet svake nove serije laboratorijskih hranljivih podloga
proizvodnja se mora provjeriti sjetvom na nju
patološki materijal od pacijenata sa bakterioskopskim
pronađeni su gonokoki.
Rok trajanja MPA u frižideru na 4°C ne bi trebao biti duži od 1
mjesec, obogaćena sredina - 7 dana.
Zbog činjenice da je za gore navedeno okruženje moguć kratak vremenski period
skladištenja, razvijen je proizvodni metod
liofilizirani hranljivi medij bez ascitesa, koji je ispod
pod nazivom "Hranljivi medij za izolaciju gonokoka, suvi"
Dostupan u dvije boce: dio I (srednja baza) i dio II
(sredstva za obogaćivanje). Za pripremu radnog okruženja u dijelu I
potrebno je dodati 100 ml sterilne destilovane vode i zagrijati
u vodenom kupatilu na 100° dok se sadržaj boce potpuno ne otopi
(unutar 30 minuta). Dodatno vrijeme za držanje medija u vodi
Nema potrebe za kupanjem, jer to umanjuje njen kvalitet. Dio II uključuje
24 ml sterilne destilovane vode (otapanje obogaćivanja
supstance se javlja odmah). Zatim, ako su uslovi ispunjeni
sterilnost, II deo se prenosi u deo I, ohlađen na 56°C,
pomešati, sipati u sterilne epruvete, pokositi i
hidratizirati kao što je ranije opisano.
Suha podloga se priprema od mesa kunića ili goveđeg srca,
pored tvari za obogaćivanje navedenih u receptu 1 (medij KDS-1)
sadrži orotnu kiselinu u koncentraciji od 1 μg/ml. srijeda
visokog kvaliteta, pogodan za upotrebu u bakteriološkim
laboratorije, jer Za pretvaranje suvog okruženja u radno okruženje potrebno je
samo sterilna destilovana voda.
Koristeći hranljivu podlogu bez ascitesa sa dodatkom
antibiotici i orotna kiselina daje dobre rezultate sa
bakteriološka dijagnostika, uključujući ekstragenetsku
gonoreja: gonoreja krajnika i ždrijela, rektuma. Antibiotici
dodano za suzbijanje rasta pratećeg gonokoka
bakterijska flora, koja povećava intenzitet rasta gonokoka,
olakšava detekciju pojedinačnih kolonija i izolaciju u čistom
kulture. Dodati 20,0 U/ml polimiksin M sulfata i 6,2 U/ml
ristomicin sulfat; umjesto potonjeg, možete koristiti
linkomicin hidrohlorid - 2 μg / ml. Orotska kiselina se ubrizgava u
sastav hranljive podloge u količini od 1 µg/ml.
Da biste to učinili, uzmite uzorak orotne kiseline 1 mg (1000 μg) i
razrijeđen u 1,0 ml sterilne destilovane vode (dob
radni rastvor koji sadrži 1000 mcg koji se može čuvati u
u frižideru 10 dana) i sterilizirati u vodenom kupatilu 15
minuta, zatim uzmite 0,1 ml dobijenog rastvora i dodajte u
100 ml obogaćene hranljive podloge. Okruženje sa antibioticima
mora se koristiti istovremeno sa podlogom bez antibiotika
(jedna epruveta sa medijumom sa antibioticima, druga bez njih), jer
iako rijetki, postoje sojevi gonokoka koji su osjetljivi na
gore navedenim antibioticima.
Medij za skladištenje (transport).
Sastav medijuma za konzerviranje: 1) 1 litar destilovane vode,
bez hlora, 30 g agar-agara; 2) 900 ml destilovan
voda bez hlora, 2 ml tioglikolne kiseline, 12 ml 1M
rastvor natrijum hidroksida, 100 ml 20% vodenog rastvora natrijuma
monosupstituisani fosfat, 20 ml 1% rastvora hlorida
kalcijum. Posljednja smjesa (2) se dodaje u svježe pripremljeno
agar (1), podesiti pH na 7,3-7,4, sipati 10 ml medijuma u
sterilne epruvete, sterilisane tekućom parom 1 sat.
Pamučni štapići na drvenim štapićima ili šipkama
nerđajući čelik prečnika oko 2 mm, montiran u pamuk
čepove, kuvati 20 minuta u fosfatnom puferu, pH = 7,4, i
impregnirati 24 sata u 1% vodenoj suspenziji tanko
drobljeni ugalj. Nakon sušenja, pamučni štapići
korigiran, ubačen u bakteriološke epruvete
odgovarajući prečnik (jednak prečniku epruveta sa medijumom) i
Sterilizirajte u autoklavu 20 minuta na 1 atmosferi (temp
Za pripremu fosfatnog pufera pripremite dva rastvora: 1
rastvor - 28,4 g natrijuma rastvorenog u 1 litru destilovane vode
disupstituirani fosfat (0,2M); 2 rastvora - u 1 l
rastvoriti 27,8 g limunske kiseline (0,1 M) u destilovanoj vodi.
Pomešati 181,7 ml rastvora 1 i 18,3 ml rastvora 2.
Proizvodnja usjeva korištenjem medija za konzerviranje
provodi se na sljedeći način. Doktor pregleda pacijenta
izvadi tampon iz epruvete, umetne ga u mjesto bolesti
nekoliko sekundi za namakanje (možete nekoliko
pokretima u smjeru kazaljke na satu i suprotnom smjeru kazaljke na satu), uklanja ga bez dodirivanja
okolne predmete u epruvetu sa medijumom za konzervaciju. Na vrhu
Pomoću pamučnog čepa epruveta se zatvara gumenom bradavicom. Prije slanja
materijala u bakteriološku laboratoriju, kulture se čuvaju na 4°C
u frižideru minimalno, ali ne duže od jednog dana. Istovremeno
uzeti patološki materijal i napraviti bris za
bakterioskopski pregled, koji se šalje na
laboratoriju zajedno sa kulturom. U bakteriološkoj laboratoriji
odmah po prijemu briseva sa patološkim materijalom
uklanja se iz medija za skladištenje i koristi za sjetvu na površini
kosi hranljivi medij u epruvetama. Svaki tampon pravi
inokulacija na hranljivu podlogu u dve epruvete. Sjetva na površini
hranljivi medij treba proizvoditi cik-cak pokretima
duž površine medija, rotirajući štapić. Ako je prečnik epruveta
medij za konzerviranje i hranjivi medij su slični, možete koristiti bris
nakon inokulacije ostaviti u drugoj epruveti u kontaktu sa
hranljivi medij. Usjevi se stavljaju u termostat i uzgajaju na
36-37e u eksikatoru. Imajte na umu da prilikom korištenja
očuvanju okoline, rast gonokoka može nastupiti kasnije nego u
direktna inokulacija patološkog materijala na hranjivu materiju
Rad sa usevima
Uzgoj gonokoka se može vršiti u epruvetama ili
Petrijeve posude; prvi metod omogućava značajne uštede
okruženje. Za povećanje procenta inokulacije gonokoka, inokuliranih
hranljive podloge se stavljaju u termostat u eksikator sa 20%
reakcije između sumporne kiseline i natrijum bikarbonata: u eksikatoru
zapremine 5 litara, stavite čašu sa 50 ml 10% sumporne kiseline,