Metode pentru determinarea proteinelor în urină. Metode de evaluare cantitativă. Metode pentru determinarea proteinelor în urină

06.05.2019

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

În mod normal, proteinele sunt excretate prin urină într-o cantitate relativ mică, de obicei nu mai mult de 100-150 mg/zi.

Producția zilnică de urină la o persoană sănătoasă este de 1000-1500 ml/zi; astfel, concentrația de proteine în condiții fiziologice este de 8-10 mg/dl (0,08-0,1 g/l).

Proteina totală din urină este reprezentată de trei fracții principale - albumină, mucoproteine și globuline.

Albumina urinară este acea parte a albuminei serice care a fost filtrată în glomeruli și nu a fost reabsorbită în tubii renali; excreția urinară normală de albumină este mai mică de 30 mg/zi. O altă sursă majoră de proteine în urină sunt tubii renali, în special tubii distali. Acești tubuli secretă două treimi din proteina urinară totală; din aceasta cantitate, aproximativ 50% este reprezentata de glicoproteina Tamm-Horsfall, care este secretata de epiteliul tubilor distali si joaca un rol important in formarea calculilor urinari. Alte proteine sunt prezente în urină în cantități mici și provin din proteine plasmatice cu greutate moleculară mică filtrate prin filtrul renal, care nu sunt reabsorbite în tubii renali, microglobuline din epiteliul tubular renal (RTE), precum și secreții prostatice și vaginale. .

Proteinuria, adică o creștere a conținutului de proteine din urină, este unul dintre cele mai semnificative simptome care reflectă afectarea rinichilor. Cu toate acestea, o serie de alte afecțiuni pot fi, de asemenea, însoțite de proteinurie. Prin urmare, există două grupe principale de proteinurie: proteinuria renală (adevărată) și proteinuria extrarenală (falsă).

În proteinuria renală, proteinele intră în urină direct din sânge datorită creșterii permeabilității filtrului glomerular. Proteinuria renală este adesea întâlnită în glomerulonefrite, nefroze, pielonefrite, nefroscleroze, amiloidoze renale, diferite forme de nefropatie, precum nefropatia de sarcină, febră, hipertensiune arterială etc. Proteinuria poate fi găsită și la persoanele sănătoase după efort fizic intens, hipotermie și stres psihologic. Proteinuria fiziologică se observă la nou-născuți în primele săptămâni de viață, iar cu astenia la copii și adolescenți, combinată cu creșterea rapidă la vârsta de 7-18 ani, este posibilă proteinuria ortostatică (în poziție verticală a corpului).

Cu proteinuria falsă (extrarenală), sursa de proteine din urină este un amestec de leucocite, eritrocite, celule epiteliale ale tractului urinar al uroteliului. Defalcarea acestor elemente, mai ales pronunțată cu o reacție alcalină a urinei, duce la pătrunderea proteinelor în urina care a trecut deja prin filtrul renal. Un grad deosebit de ridicat de falsă proteinurie este dat de un amestec de sânge în urină, cu hematurie abundentă poate ajunge la 30 g/l sau mai mult. Boli care pot fi însoțite de proteinurie extrarenală - urolitiază, tuberculoză renală, tumori renale sau urinare, cistita, pielita, prostatita, uretrita, vulvovaginita.

Clasificarea clinică include proteinuria ușoară (mai puțin de 0,5 g/zi), moderată (0,5 până la 4 g/zi) sau severă (mai mult de 4 g/zi).

Majoritatea pacienților cu afecțiuni renale, cum ar fi glomerulonefrita acută sau pielonefrita, au proteinurie ușoară, dar pacienții cu sindrom nefrotic excretă de obicei mai mult de 4 grame de proteine zilnic în urină.

Pentru determinarea cantitativă a proteinei se utilizează o gamă largă de metode, în special metoda unificată Brandberg-Roberts-Stolnikov, metoda biuretului, metoda cu acid sulfosalicilic, metodele care utilizează colorantul albastru Coomassie, colorantul roșu pirogalol etc.

Utilizarea diferitelor metode de determinare a proteinelor în urină a condus la o confuzie serioasă în interpretarea limitelor normei conținutului de proteine în urină. Deoarece cel mai adesea în laboratoare se folosesc 2 metode - cu acid sulfosalicilic și colorant roșu pirogalol, vom lua în considerare problema corectitudinii limitelor normelor pentru acestea. Din punctul de vedere al metodei sulfosalicilice în urina normală, conținutul de proteine nu trebuie să depășească 0,03 g/l, din punctul de vedere al metodei pirogalol - 0,1 g/l! Diferentele sunt de trei ori!!!

Valorile scăzute ale normei de concentrație a proteinelor în urină atunci când se utilizează sulfosalicilic se datorează următoarelor puncte:

curba de calibrare este trasată în raport cu o soluție apoasă de albumină. Compoziția urinei este foarte diferită de apă: pH, săruri, compuși cu greutate moleculară mică (creatinină, uree etc.). Drept urmare, conform datelor lui Altshuler, Rakov și Tkachev, eroarea în determinarea proteinei în urină poate fi de 3 ori sau mai mult! Acestea. rezultate corecte de determinare pot fi obținute numai în cazurile în care urina are o greutate specifică foarte scăzută și în compoziția sa și pH-ul este apropiat de apă;
sensibilitate mai mare a metodei sulfosalicilice la albumină în comparație cu alte proteine (în timp ce, după cum sa menționat mai sus, albumina din probele normale de urină nu este mai mare de 30% din proteina totală din urină);
dacă pH-ul urinei este deplasat pe partea alcalină, are loc neutralizarea acidului sulfosalicilic, ceea ce provoacă și o subestimare a rezultatelor determinării proteinelor;
viteza de sedimentare a precipitatelor este supusă unor variații semnificative - la concentrații scăzute de proteine, precipitarea este încetinită, iar oprirea timpurie a reacției duce la o subestimare a rezultatului;
viteza reacţiei de precipitare depinde în mod substanţial de agitarea amestecului de reacţie. La concentrații mari de proteine, agitarea puternică a tubului poate duce la formarea de flocuri mari și o depunere rapidă.

Toate caracteristicile enumerate mai sus ale metodei conduc la o subestimare semnificativă a concentrației de proteine determinate în urină. În acest caz, gradul de subestimare depinde în mare măsură de compoziția unei anumite probe de urină. Deoarece metoda acidului sulfosalicilic oferă valori subestimate ale concentrației de proteine, limita normală pentru această metodă de 0,03 g/l este, de asemenea, subestimată de aproximativ trei ori în comparație cu datele furnizate în cărțile de referință străine privind diagnosticul clinic de laborator.

Majoritatea covârșitoare a laboratoarelor din țările occidentale au renunțat la utilizarea metodei sulfosalicilice pentru determinarea concentrației de proteine în urină și folosesc în mod activ metoda pirogalolului în aceste scopuri. Metoda pirogalolului pentru determinarea concentrației de proteine în urină și alte fluide biologice se bazează pe principiul fotometric de măsurare a densității optice a unui complex colorat format prin interacțiunea moleculelor proteice cu moleculele colorantului roșu pirogalol și complexului molibdat de sodiu (Pyrogalol). Complexul Roșu-Molibdat).

De ce metoda pirogalol oferă o măsurare mai precisă a concentrației proteinelor din urină? În primul rând, datorită multiplicității mai mari de diluție a probei de urină în amestecul de reacție. Dacă în metoda sulfosalicilic raportul proba de urină / reactiv este de 1/3, atunci în metoda pirogalol poate fi în intervalul de la 1 / 12,5 la 1/60, în funcție de varianta metodei, ceea ce reduce semnificativ efectul compoziției urinei asupra rezultatului măsurătorii. În al doilea rând, reacția are loc într-un tampon succinat, adică la un pH stabil. Și, în sfârșit, însuși principiul metodei, s-ar putea spune, este mai „transparent”. Molibdatul de sodiu și colorantul roșu pirogalol formează un complex cu o moleculă proteică. Acest lucru duce la faptul că moleculele de colorant în stare liberă nu absorb lumina la o lungime de undă de 600 nm în combinație cu o proteină absorb lumina. Astfel, noi, așa cum ar fi, marcam fiecare moleculă de proteină cu un colorant și, ca urmare, constatăm că modificarea densității optice a amestecului de reacție la o lungime de undă de 600 nm se corelează în mod clar cu concentrația de proteine în urină. Mai mult, deoarece afinitatea roșului pirogalol pentru diferite fracții proteice este aproape aceeași, metoda vă permite să determinați proteina totală din urină. Prin urmare, limita valorilor normale ale concentrației proteinelor în urină este de 0,1 g/l (este indicată în toate ghidurile occidentale moderne pentru diagnosticare clinică și de laborator, inclusiv în „Orientările clinice pentru teste de laborator”, editate de N. Tit ) ... Caracteristicile comparative ale metodelor pirogalol și sulfosalicilice pentru determinarea proteinelor în urină sunt prezentate în Tabelul 1.

În concluzie, aș dori să mă concentrez din nou pe faptul că, atunci când laboratorul trece de la metoda sulfosalicilic pentru determinarea proteinei în urină la metoda pirogalol, limita valorilor normale crește semnificativ (de la 0,03 g / l la 0,1 g). / l!). Personalul de laborator trebuie să informeze clinicienii despre acest lucru, deoarece în această situație, diagnosticul de proteinurie poate fi pus doar atunci când conținutul de proteine din urină depășește 0,1 g/l.

Bibliografie.

Altshuler B.Yu., Rakov S.S., Tkachev G.A. // Întrebare Miere. chimie. - 2001. - Nr 4. - C.426-438.
Kim Yu.V., Potekhin O.E., Tokar M.I., Shibanov A.N. // Laborator. Miere. - 2003. - Nr 6. - C.94-98.
Ghiduri clinice pentru teste de laborator, ed. N. Tit. - M. - Unimed-press. -2003. - 942 p.
Kozlov A.V., Slepysheva V.V. Metode de determinare a proteinei în urină: oportunități și perspective // Proceedings of the VII year. SPb nefrol. seminar. - SPb: TNA. - 1999. - S. 17-28.
Pupkova V.I., Pikalov I.V., Khrykina E.N., Harkovsky A.V. // Știri „Vector-Best”. - 2003. - Nr. 4 (30).
Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ann. Clin. Biochim. - 1991. - Vol. 28 (Pt 5). - P.467-473.
Medicina de laborator clinic. Ed. de Kenneth D. McClatchey. - Ed. a II-a 2001. 1993p.
Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // Clin. Biochim. - 2000. - Vol. 33. - P.487-494.
Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Compoziție și dispozitiv pentru analiza proteinelor urinare și metodă de utilizare a aceluiași // Brevet US nr. 5326707. - 1994.
Kaplan I.V., Levinson S.S. // Clin. Chim. - 1999. - Vol. 45. - P.417-419.
Kashif W., Siddiqi N., Dincer H. E., Dincer A. P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. din Med. - 2003. - Vol. 70 (6). - P.535-547.
Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // Clin. Chim. - 2001. - Vol. 47. - P.2183-2184.
Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Articol în limba franceză. - Ann. Biol. Clin. (Paris). - 1998. - Vol. 56 (6). - P.719-723.
Marshall T., Williams K.M. // Clin. Chim. - 2003. - Vol. 49 (12). - P.2111-2112.
Pugia M., Newman D. J., Lott J. A., D'Mello L., Clark L., Profitt J. A., Cast T. // Clin. Chim. Acta. - 2002. - Vol. 326 (1-2). - P.177-183.
Ringsrud K.M., Linne J.J. Analiza urinei și fluide corporale: A ColorText și Atlas // Mosby. - 1995. - P.52-54.
Shepard M.D., Penberthy L.A. // Clin. Chim. - 1987. - Vol. 33. - P.792-795.
Williams K. M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Metode. - 2001. - Vol. 47. - P.197-207.
Williams K. M., Arthur S. J., Burrell G., Kelly F., Phillips D. W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Metode. - 2003. - Vol. 57 (1). - P.45-55.

Cantități mici de proteine se găsesc în urina zilnică la persoanele sănătoase. Cu toate acestea, astfel de concentrații mici nu pot fi detectate folosind metode de cercetare convenționale. Eliberarea de cantități mai mari de proteine, în care un test calitativ normal pentru proteine în urină devine pozitiv, se numește proteinurie. Distingeți proteinuria renală (adevărată) și extrarenală (falsă). În proteinuria renală, proteinele intră în urină direct din sânge datorită creșterii filtrării de către glomerulii rinichiului sau scăderii reabsorbției tubulare.

proteinurie renală (adevărată).

Proteinuria renală (adevărată) este funcțională și organică. Dintre proteinuria renală funcțională, se observă cel mai adesea următoarele tipuri:

Proteinuria fiziologică a nou-născuților, care dispare în a 4-10-a zi după naștere, iar la prematuri puțin mai târziu;
- albuminuria ortostatica, care este caracteristica copiilor cu varsta cuprinsa intre 7-18 ani si apare doar in pozitie verticala a corpului;
- albuminurie tranzitorie (accident vascular cerebral), care poate fi cauzata de diverse afectiuni ale aparatului digestiv, anemie severa, arsuri, leziuni sau factori fiziologici: efort fizic intens, hipotermie, emotii puternice, alimente abundente, bogate in proteine etc.

Proteinuria organică (renală) se observă ca urmare a trecerii proteinelor din sânge prin zonele deteriorate ale endoteliului glomerulilor renali în boli de rinichi (glomerulonefrită, nefroză, nefroscleroză, amiloidoză, nefropatie a femeilor însărcinate), tulburări ale hemodinamicii renale. (hipertensiune venoasă renală, hipoxie) (număr trofic și toxic de medicamente) efecte asupra pereților capilarelor glomerulilor.

proteinurie extrarenală (falsă).

Proteinurie extrarenală (falsă), în care sursa de proteine din urină este un amestec de leucocite, eritrocite, bacterii, celule uroteliale. observată în boli urologice (urolitiază, tuberculoză renală, tumori renale și urinare etc.).

Determinarea proteinelor în urină

Majoritatea metodelor calitative și cantitative de determinare a proteinei în urină se bazează pe coagularea acesteia în volumul de urină sau la interfața dintre medii (urină și acid).

Dintre metodele calitative de determinare a săracilor în urină, cele mai răspândite sunt testul unificat cu acid sulfosalicilic și testul inel Geller.

Testul standardizat cu acid sulfasalicilic se efectuează după cum urmează. 3 ml de urină filtrată se toarnă în 2 eprubete. Într-una dintre ele se adaugă 6-8 picături dintr-o soluție 20% de acid sulfasalicilic. Comparați ambele tuburi pe un fundal întunecat. Urina tulbure în tubul de acid sulfasalicilic indică prezența proteinelor. Înainte de studiu, este necesar să se determine reacția urinei, iar dacă este alcalină, apoi se acidulează cu 2-3 picături dintr-o soluție 10% de acid acetic.

Testul lui Geller se bazează pe faptul că în prezența proteinei în urină la interfața acidului azotic cu urina, aceasta se coagulează și apare un inel alb. Într-o eprubetă se toarnă 1-2 ml dintr-o soluție de acid azotic 30% și aceeași cantitate de urină filtrată se așează cu grijă pe peretele eprubetei. Apariția unui inel alb la marginea celor două fluide indică prezența proteinelor în urină. Trebuie amintit că uneori se formează un inel alb în prezența unei cantități mari de urati, dar, spre deosebire de un inel proteic, acesta apare puțin deasupra limitei dintre două lichide și se dizolvă atunci când este încălzit [Pletneva NG, 1987].

Dintre metodele cantitative, cele mai utilizate sunt:

1) metoda unificată Brandberg-Roberts-Stolnikov, care se bazează pe testul inelului Geller;
2) metoda colorimetrică fotoelectrică pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină prin turbiditatea formată la adăugarea acidului sulfasalicilic;
3) metoda biuretului.

Detectarea proteinelor în urină printr-o metodă accelerată simplificată se realizează prin metoda colorimetrică folosind hârtie indicator produsă de companiile Lachema (Slovacia), Albuphan, Ames (Anglia), Albustix, Boehringer (Germania), Comburtest și altele. constă în imersarea în urină a unei benzi speciale de hârtie înmuiată în albastru tetrabromofenol și tampon citrat, care își schimbă culoarea din galben în albastru în funcție de conținutul de proteine din urină. Aproximativ concentrația de proteine din urină studiată este determinată folosind o scară standard. Pentru a obține rezultate corecte, trebuie îndeplinite următoarele condiții. pH-ul urinei trebuie să fie în intervalul 3,0-3,5; urina prea alcalină (pH 6,5) va avea ca rezultat un rezultat fals pozitiv, iar dacă urina este prea acidă (pH 3,0) un rezultat fals negativ.

Hârtia trebuie să fie în contact cu urina de testat nu mai mult decât este indicat în instrucțiuni, altfel testul va da o reacție fals pozitivă. Acesta din urmă se observă și atunci când există o cantitate mare de mucus în urină. Sensibilitatea diferitelor tipuri și loturi de hârtie poate diferi, prin urmare, evaluarea cantitativă a proteinei din urină cu această metodă trebuie tratată cu prudență. Determinarea cantității sale în urina zilnică cu ajutorul hârtiei indicator este imposibilă [Pletneva NG, 1987]

Determinarea proteinuriei zilnice

Există mai multe moduri de a determina cantitatea de proteine excretată în urină pe zi. Cea mai simplă este metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Metodologie. Se toarnă 5-10 ml de urină zilnic bine amestecată într-o eprubetă și se adaugă cu grijă o soluție de acid azotic 30% de-a lungul pereților acesteia. În prezența proteinelor în urină în cantitate de 0,033% (adică 33 mg per 1 L de urină), după 2-3 minute apare un inel alb subțire, dar clar vizibil. La o concentrație mai mică, proba este negativă. Cu un conținut mai mare de proteine în urină, cantitatea acesteia este determinată de diluții repetate de urină cu apă distilată până când inelul încetează să se mai formeze. În ultima eprubetă, în care inelul este încă vizibil, concentrația de proteine va fi de 0,033%. Înmulțind 0,033 cu gradul de diluare a urinei, se determină conținutul de proteine în 1 litru de urină nediluată în grame. Apoi, conținutul de proteine din urina zilnică este calculat folosind formula:

K = (x V) / 1000

Unde K este cantitatea de proteine din urina zilnică (g); x este cantitatea de proteine din 1 litru de urină (g); V este cantitatea de urină excretată pe zi (ml).

În mod normal, de la 27 la 150 mg (în medie 40-80 mg) de proteine sunt excretate prin urină în timpul zilei.

Acest test vă permite să determinați în urină doar proteine fine (albumină). Metodele cantitative mai precise (metoda colorimetrică a lui Kjeldahl etc.) sunt destul de complicate și necesită echipamente speciale.

În proteinuria renală, nu numai albumina este excretată în urină, ci și alte tipuri de proteine. Proteinograma normală (după Seitz și colab., 1953) are următorul procent: albumină - 20%, α 1 -globuline - 12%, α 2 -globuline - 17%, γ-globuline - 43% și β-globuline - 8%... Raportul dintre albumine și globuline se modifică în diferite boli de rinichi, de exemplu. relaţia cantitativă dintre fracţiile proteice este perturbată.

Cele mai comune metode de fracţionare a uroproteinelor sunt următoarele: sărarea cu săruri neutre, fracţionarea electroforetică, metode imunologice (imunodifuzie radială conform lui Mancini, analiză imunoelectroforetică, imunoelectroforeză de precipitare), cromatografia, filtrare pe gel şi ultracentrifugare.

În legătură cu introducerea metodelor de fracționare a uroproteinelor bazate pe studiul mobilității electroforetice, variabilitatea greutății moleculare, dimensiunea și forma moleculelor de uroproteine, a devenit posibilă izolarea tipurilor de proteinurie caracteristice unei anumite boli, pentru a studia clearance-ul proteine plasmatice individuale. Până în prezent, în urină au fost identificate peste 40 de proteine plasmatice, inclusiv 31 de proteine plasmatice în urina normală.

proteinurie selectivă

În ultimii ani, a apărut conceptul de selectivitate a proteinuriei. În 1955, Hardwicke și Squire au formulat conceptul de proteinurie „selectivă” și „neselectivă”, determinând că filtrarea proteinelor plasmatice în urină se supune unui anumit model: cu cât greutatea moleculară a proteinei excretate în urină este mai mare, cu atât clearance-ul acesteia este mai mic. iar cu cât concentraţia sa în urină este mai mică.urină finală. Proteinuria corespunzătoare acestui model este selectivă, spre deosebire de neselectivă, care se caracterizează printr-o perversiune a modelului derivat.

Detectarea proteinelor cu greutate moleculară relativ mare în urină indică absența selectivității filtrului renal și deteriorarea lui pronunțată. În aceste cazuri, se vorbește despre o selectivitate scăzută a proteinuriei. Prin urmare, în prezent, determinarea fracțiilor proteice din urină folosind metode de electroforeză în gel de amidon și poliacrilamidă a devenit larg răspândită. Conform rezultatelor acestor metode de cercetare, se poate judeca selectivitatea proteinuriei.

Potrivit lui VS Makhlina (1975), cel mai justificat este de a determina selectivitatea proteinuriei prin compararea clearance-ului a 6-7 proteine individuale din plasma sanguină (albumină, tranferină, α 2 - macroglobulină, IgA, IgG, IgM) folosind precise și specifice metode imunologice cantitative de reacție de imunodifuzie radială după Mancini, analiză imunoelectroforetică și imunoelectroforeză de precipitare. Gradul de selectivitate al proteinuriei este determinat de indicele de selectivitate, care este raportul dintre proteinele comparate și de referință (albumină).

Studiul clearance-ului proteinelor plasmatice individuale permite obținerea de informații fiabile despre starea membranelor bazale de filtrare ale glomerulilor renali. Relația dintre natura proteinelor excretate prin urină și modificările membranelor bazale ale glomerulilor este atât de pronunțată și constantă, încât prin uroproteinogramă se pot judeca indirect modificările fiziopatologice ale glomerulilor rinichi. În mod normal, dimensiunea medie a porilor membranei bazale glomerulare este de 2,9-4 A ° NM, care pot trece proteine cu o greutate moleculară de până la 10 4 (mioglobulină, α 1 acidă - glicoproteină, lanțuri ușoare de imunoglobuline, Fc și Fab - IgG fragmente, albumină și transferină).

Cu glomerulonefrita, sindromul nefrotic, dimensiunile porilor din membranele bazale ale glomerulilor cresc și, prin urmare, membrana bazală devine permeabilă la moleculele proteice de dimensiune și masă mari (ceruloplasmină, haptoglobină, IgG, IgA etc.). Cu un grad extrem de afectare a glomerulilor rinichilor, în urină apar molecule gigantice de proteine din plasma sanguină (α 2 -macroglobulină, IgM și β 2 -lipoproteine).

Determinând spectrul proteic al urinei, se poate trage o concluzie despre leziunea predominantă a anumitor zone ale nefronului. Glomerulonefrita cu leziune predominantă a membranelor bazale glomerulare se caracterizează prin prezența proteinelor cu greutate moleculară mare și medie în urină. Pielonefrita cu o leziune predominantă a membranelor bazale ale tubilor se caracterizează prin absența proteinelor cu molecule mari și prezența unor cantități crescute de proteine cu greutate moleculară medie și mică.

β2-Microglobulina

Pe lângă proteinele binecunoscute precum albumina, imunoglobulinele, lipoproteinele. fibrinogenul, transferrina, urina contine microproteine plasmatice, printre care β 2 -microglobulina este de interes clinic, descoperita de Berggard si Bearn in 1968. Avand o greutate moleculara mica (greutate moleculara relativa 1800), trece liber prin glomerulii rinichiului si aproape complet reabsorbită în tubii proximali. Aceasta permite determinarea cantitativă a β2-microglobulinei din sânge și urină pentru a fi utilizată pentru a determina filtrarea glomerulară și capacitatea rinichilor de a resorbi proteinele în tubii proximali.

Concentrația acestei proteine în plasma sanguină și urină este determinată prin radioimunotest folosind un kit standard "Phade-bas β 2 -mikroiest" (Pharmasia, Suedia). Serul sanguin al persoanelor sănătoase conține în medie 1,7 mg/l (fluctuații de la 0,6 la 3 mg/l), în urină - o medie de 81 μg/l (maximum 250 μg/l) β2-microglobulină. Excesul în urină de peste 1000 mcg/l este un fenomen patologic. Conținutul de β2-microglobuline din sânge crește în bolile însoțite de filtrarea glomerulară afectată, în special în glomerulonefrita acută și cronică, boala polichistică a rinichilor, nefroscleroza, nefropatia diabetică, insuficiența renală acută.

Concentrația de β 2 -microglobuline în urină crește în bolile însoțite de o încălcare a funcției de reabsorbție a tubilor, ceea ce duce la o creștere a excreției sale în urină de 10-50 de ori, în special în cazul pielonefritei, renale cronice. insuficiență, intoxicație purulentă, etc. Este caracteristic că cu cistita în Spre deosebire de pielonefrită, nu există o creștere a concentrației de β 2 -microglobuline în urină, care poate fi utilizată pentru diagnosticul diferențial al acestor boli. Cu toate acestea, atunci când se interpretează rezultatele studiului, trebuie avut în vedere că orice creștere a temperaturii este întotdeauna însoțită de o creștere a excreției de β2-microglobuline în urină.

Molecule medii de sânge și urină

Moleculele medii (SM), denumite altfel toxine proteice, sunt substanțe cu o greutate moleculară de 500-5000 daltoni. Structura lor fizică este necunoscută. CM conține cel puțin 30 de peptide: oxitocină, vasopresină, angiotensină, glucagon, hormon adrenocorticotrop (ACTH) etc. Se observă acumularea excesivă de CM cu scăderea funcției renale și o cantitate mare de proteine deformate și metaboliții acestora în sânge. Au o varietate de efecte biologice și sunt neurotoxice, provoacă imunosupresie secundară, anemie secundară, inhibă biosinteza proteinelor și eritropoieza, inhibă activitatea multor enzime și perturbă fazele procesului inflamator.

Nivelul CM în sânge și urină este determinat printr-un test de screening, precum și prin spectrofotometrie în zona ultravioletă la lungimi de undă de 254 și 280 mm pe un spectrofotometru DI-8B, precum și spectrofotometrie dinamică cu procesare computerizată în intervalul de lungimi de undă 220-335 nm pe același spectrometru de la Beckman... Norma este luată ca conținut de CM în sânge, egal cu 0,24 ± 0,02 srv. unități, iar în urină - 0,312 ± 0,09 conv. unitati
Fiind deșeuri normale ale organismului, acestea sunt în mod normal îndepărtate din acesta noaptea prin filtrare glomerulară de 0,5%; 5% dintre ele sunt eliminate în alt mod. Toate fracțiile CM suferă reabsorbție tubulară.

Uroproteine non-plasmatice (tisulare).

În plus față de proteinele plasmatice din sânge, urina poate conține proteine non-plasmatice (țesuturi). Potrivit lui Buxbaum și Franklin (1970), proteinele non-plasmatice reprezintă aproximativ 2/3 din toți biocoloizii din urină și o parte semnificativă a uroproteinelor în proteinuria patologică. Proteinele tisulare intră în urină direct din rinichi sau organe conectate anatomic cu tractul urinar sau din alte organe și țesuturi în sânge și din aceasta prin membranele bazale ale glomerulilor rinichiului în urină. În acest din urmă caz, excreția proteinelor tisulare în urină este similară cu excreția proteinelor plasmatice de diferite greutăți moleculare. Compoziția uroproteinelor non-plasmatice este extrem de diversă. Printre acestea se numără glicoproteinele, hormonii, antigenele, enzimele (enzimele).

Proteinele tisulare din urină sunt detectate folosind metode convenționale de chimie a proteinelor (ultracentrifugarea, cromatografie pe gel, diferite tipuri de electroforeză), reacții specifice la enzime și hormoni și metode imunologice. Acestea din urmă permit, de asemenea, determinarea concentrației uroproteinei non-plasmatice în urină și, în unele cazuri, determinarea structurilor tisulare care au devenit sursa apariției sale. Principala metodă de detectare a proteinelor non-plasmatice în urină este analiza imunodifuziei cu antiser obținut prin imunizarea animalelor de experiment cu urină umană și ulterior epuizat (adsorbit) de proteinele plasmatice ale sângelui.

Studiul enzimelor din sânge și urină

În procesul patologic, se observă tulburări profunde ale activității vitale a celulelor, însoțite de eliberarea de enzime intracelulare în fluidele corpului. Enzimodiagnostica se bazează pe determinarea unui număr de enzime eliberate din celulele organelor afectate și care nu sunt caracteristice serului sanguin.
Studiile asupra nefronului oamenilor și animalelor au arătat că în părțile sale individuale există o diferențiere enzimatică ridicată, strâns legată de funcțiile pe care le îndeplinește fiecare departament. Glomerulii rinichilor conțin cantități relativ mici de diferite enzime.

Celulele tubilor renali, in special cele proximale, contin cantitatea maxima de enzime. Activitatea lor ridicată se observă în ansa lui Henle, tubii drepti și canalele colectoare. Modificările activității enzimelor individuale în diferite boli de rinichi depind de natura, severitatea și localizarea procesului. Ele sunt observate înainte de apariția modificărilor morfologice la nivelul rinichilor. Deoarece conținutul diferitelor enzime este clar localizat în nefron, determinarea uneia sau alteia enzime în urină poate contribui la diagnosticul local al procesului patologic la nivelul rinichilor (glomeruli, tubuli, stratul cortical sau medular), diagnosticul diferențial. a bolilor renale si determinarea dinamicii (atenuarea si exacerbarea) procesului in parenchimul renal.

Pentru diagnosticul diferențial al bolilor sistemului genito-urinar, se utilizează determinarea activității în sânge și urină a următoarelor enzime: lactat dehidrogenază (LDH), leucină aminopeptidază (LAP), fosfatază acidă (AP), fosfatază alcalină (ALP) , β-glucuronidază, glutamino-oxaloacetic transaminaze , aldolaze, transamidinaze etc. Activitatea enzimelor din serul sanguin și urină se determină prin metode biochimice, spectrofotometrice, cromatografice, fluorimetrice și chemiluminiscente.

Enzimuria în bolile de rinichi este mai pronunțată și mai naturală decât enzima. Este deosebit de pronunțată în stadiul acut al bolii (pielonefrită acută, traumatisme, dezintegrare tumorală, infarct renal etc.). În aceste boli, se găsește o activitate ridicată a transamidinazei, LDH, ALP și CF, hialuronidază, LAP, precum și a unor enzime nespecifice precum GSHT, catalaza [Polyantseva LR, 1972].

Localizarea selectivă a enzimelor în nefron atunci când LAP și ALP sunt detectate în urină face posibilă vorbirea cu încredere despre bolile renale acute și cronice (insuficiență renală acută, necroză tubulară renală, glomerulonefrită cronică) [Shemetov VD, 1968]. Potrivit lui A.A. Karelin și L.R. Polyantseva (1965), transamidinaza este conținută numai în două organe - rinichiul și pancreasul. Este o enzimă mitocondrială a rinichilor și este în mod normal absentă în sânge și urină. În diferite boli de rinichi, transamidinaza apare în sânge și urină, iar în caz de afectare a pancreasului, doar în sânge.

Krotkiewski (1963) consideră că activitatea fosfatazei alcaline în urină este un test diferențial în diagnosticul glomerulonefritei și pielonefritei, creștere în care este mai caracteristică pielonefritei și glomerulosclerozei diabetice decât pentru nefrita acută și cronică. Dinamica crescândă a amilazemiei cu o scădere simultană a amilazuriei poate indica nefroscleroza și ridarea rinichilor, LAP este de cea mai mare importanță pentru modificările patologice ale glomerulilor și tubilor contorți ai rinichiului, deoarece conținutul său în aceste părți ale nefronului este mai mare. Shepotinovsky VP şi colab., 1980]. Pentru diagnosticul de nefrită lupică se recomandă determinarea β-glucuronidazei și CF [Privalenko M.N. şi colab., 1974].

Atunci când se evaluează rolul enzimuriei în diagnosticul bolii renale, trebuie luate în considerare următoarele puncte. Enzimele, fiind proteine în natură, cu o greutate moleculară mică pot trece prin glomeruli intacți, determinând așa-numita enzimă fiziologică. Printre aceste enzime, α-amilaza (greutate moleculară relativă 45.000) și uropepsina (greutatea moleculară relativă 38.000) sunt detectate în mod constant în urină.

Alături de enzimele cu greutate moleculară mică în urina indivizilor sănătoși, mai pot fi găsite și alte enzime în concentrații mici: LDH, aspartat și alanin aminotransferaze, fosfatază alcalină și CP, maltază, aldolază, lipază, diverse proteaze și peptidaze, sulfatază, catalază, ribonuclează, peroxidază.

Enzimele cu greutate moleculară mare cu o greutate moleculară relativă mai mare de 70.000-100.000, conform lui Richterich (1958) și Hess (1962), pot pătrunde în urină numai dacă permeabilitatea filtrului glomerular este afectată. Conținutul normal de enzime în urină nu permite excluderea procesului patologic în rinichi cu ocluzia ureterului. Cu episimuria, enzimele pot fi eliberate nu numai din rinichii înșiși, ci și din alte organe parenchimatoase, celule ale membranelor mucoase ale tractului urinar, glandei prostatei, precum și corpusculi urinari cu hematurie sau leucociturie.

Majoritatea enzimelor sunt nespecifice rinichilor, așa că este dificil de stabilit de unde provin enzimele găsite în urina persoanelor sănătoase și bolnave. Cu toate acestea, gradul de enzimurie chiar și pentru enzimele nespecifice în afectarea rinichilor este mai mare decât cel normal sau cel observat în bolile altor organe. Informații mai valoroase pot fi furnizate printr-un studiu cuprinzător al dinamicii unui număr de enzime, în special a celor specifice unui organ, cum ar fi transaminaza.

Pentru a decide problema originii renale a enzimei în urină, ajută studiul izoenzimelor cu identificarea fracțiilor tipice pentru organul studiat. Izoenzimele sunt enzime care au acțiune izogenă (catalizează aceeași reacție), dar eterogene ca structură chimică și alte proprietăți. Fiecare țesut are un spectru de izoenzime caracteristic. Metodele valoroase pentru separarea izoenzimelor sunt electroforeza în gel de amidon și poliacrilamidă, precum și cromatografia cu schimb ionic.

Proteina Bens Jones

Cu mielom multiplu și macroglobulinemie Waldenstrom, proteina Bens-Jones se găsește în urină. Metoda de detectare a proteinei numite în urină se bazează pe o reacție de termoprecipitare. Metodele anterioare, care evaluează dizolvarea acestei proteine la o temperatură de 100 ° C și re-precipitarea cu răcire ulterioară, sunt nesigure, deoarece nu toate corpurile proteice Bens-Jones au proprietățile corespunzătoare.

Este mai sigură identificarea acestei paraproteine prin precipitarea ei la o temperatură de 40 -60 ° C. Cu toate acestea, chiar și în aceste condiții, precipitațiile pot să nu apară în condiții prea acide (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6.5) urină, cu un OPM scăzut și o concentrație scăzută de proteină Bens-Jones. Condițiile cele mai favorabile pentru precipitarea acestuia sunt asigurate de metoda propusă de Patnem: 4 ml de urină filtrată se amestecă cu 1 ml de tampon acetat 2 M pH 4,9 și se încălzesc timp de 15 minute într-o baie de apă la o temperatură de 56 ° C. În prezența proteinei Bens-Jones, în primele 2 minute apare un precipitat pronunțat.

Dacă concentrația de proteină Bens-Jones este mai mică de 3 g / L, proba poate fi negativă, dar în practică acest lucru este extrem de rar, deoarece concentrația sa în urină este de obicei mai semnificativă. Nu se poate baza pe probele de fierbere. Cu deplină certitudine, poate fi detectat în urină prin metoda imuno-electroforetică folosind seruri specifice împotriva lanțurilor grele și ușoare de imunoglobuline.

Proteine în urină: metode de determinare

Proteinurie patologică este unul dintre cele mai importante și persistente semne ale bolilor renale și ale tractului urinar. Determinarea concentrației proteinelor în urină este un element obligatoriu și important al analizei urinei. Identificarea și evaluarea cantitativă a proteinuriei este importantă nu numai în diagnosticul multor boli renale primare și secundare, evaluarea modificărilor severității proteinuriei în dinamică oferă informații despre cursul procesului patologic, despre eficacitatea tratamentului. Detectarea proteinelor în urină, chiar și în urme, ar trebui să fie alarmantă pentru posibile boli ale rinichilor sau ale tractului urinar și ar trebui retestată. Trebuie remarcat în special că nu are sens să studiezi urina și, în special, să se determine proteina din urină fără a observa toate reguli de colectare a acestuia.

Toate metodele pentru determinarea proteinelor în urină pot fi împărțite în:

Calitate superioară,

semi-cantitative,

Cantitativ.

Metode calitative

Tot teste de proteină urinară de înaltă calitate bazată pe capacitatea proteinelor de a se denatura sub influența diverșilor factori fizici și chimici. În prezența proteinei în proba de urină de testat, apare fie sediment tulbure, fie floculant.

Condiții pentru determinarea proteinelor în urină pe baza reacției de coagulare:

Urina trebuie să fie acidă. Urina unei reacții alcaline este acidulată cu mai multe (2 - 3) picături de acid acetic (5 - 10%).

Urina trebuie să fie limpede. Ceața este îndepărtată printr-un filtru de hârtie. Dacă turbiditatea nu dispare, se adaugă talc sau magnezie arsă (aproximativ 1 linguriță la 100 ml de urină), se agită și se filtrează.

Un test de calitate trebuie efectuat în două eprubete, dintre care una de control.

Ceața trebuie căutată pe un fundal negru în lumină transmisă.

Metodele calitative pentru determinarea proteinelor în urină includ:

Test inel Geller,

test cu 15 - 20% acid sulfosalicilic,

test de fierbere și altele.

Numeroase studii au arătat că niciuna dintre numeroasele metode cunoscute pentru determinarea calitativă a proteinei în urină nu oferă rezultate fiabile și reproductibile. În ciuda acestui fapt, în majoritatea CDL-urilor din Rusia, aceste metode sunt utilizate pe scară largă ca screening - în urină cu o reacție calitativă pozitivă, se efectuează o determinare cantitativă suplimentară a proteinei. Dintre reacțiile calitative, testul Geller și testul acidului sulfosalicilic sunt mai des folosite, totuși, testul acidului sulfosalicilic este în general considerat cel mai potrivit pentru depistarea proteinuriei patologice. Testul de fierbere nu este practic utilizat în prezent din cauza laboriozității și duratei sale.

Metode semi-cantitative

LA metode semi-cantitative raporta:

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov,

determinarea proteinelor în urină cu ajutorul benzilor de test de diagnostic.

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov se bazează pe testul inel Geller, prin urmare, cu această metodă se observă aceleași erori ca și la testul Geller.

În zilele noastre, benzile de diagnosticare sunt din ce în ce mai folosite pentru a determina proteinele din urină. Pentru determinarea semicantitativă a proteinei în urină pe o bandă, colorantul albastru de bromofenol în tampon citrat este cel mai adesea utilizat ca indicator. Conținutul de proteine din urină este judecat după intensitatea culorii albastru-verde care se dezvoltă după contactul zonei de reacție cu urina. Rezultatul este evaluat vizual sau folosind analizoare de urină. În ciuda popularității mari și a avantajelor evidente ale metodelor de chimie uscată (simplitate, viteza de analiză), aceste metode de analiză a urinei în general și de determinare a proteinelor în special nu sunt lipsite de dezavantaje serioase. Una dintre ele, care duce la o denaturare a informațiilor de diagnostic, este sensibilitatea mai mare a indicatorului albastru de bromofenol la albumină în comparație cu alte proteine. În acest sens, benzile de testare sunt adaptate în principal pentru detectarea proteinuriei glomerulare selective, când aproape toată proteina urinară este albumină. Odată cu progresia modificărilor și trecerea proteinuriei glomerulare selective la neselectivă (apariția globulinelor în urină), rezultatele determinării proteinelor sunt subestimate în comparație cu valorile reale. Acest fapt nu face posibilă utilizarea acestei metode pentru determinarea proteinei în urină pentru a evalua starea rinichilor (filtru glomerular) în dinamică. În cazul proteinuriei tubulare, rezultatele determinării proteinelor sunt de asemenea subestimate. Determinarea proteinelor cu benzile de testare nu este un indicator de încredere al nivelurilor scăzute de proteinurie (majoritatea benzilor de testare produse în prezent nu au capacitatea de a capta proteinele în urină la concentrații mai mici de 0,15 g/L). Rezultatele negative ale determinării proteinelor pe benzi nu exclud prezența globulinelor, hemoglobinei, uromucoidului, proteinei Bens-Jones și a altor paraproteine în urină.

Fulgi de mucus cu un conținut ridicat de glicoproteine (de exemplu, în procesele inflamatorii ale tractului urinar, piurie, bacteriurie) se pot așeza pe zona indicatoare a benzii și pot duce la rezultate fals pozitive. Rezultatele fals pozitive pot fi, de asemenea, asociate cu o concentrare ridicată uree... Iluminarea slabă și problemele de vedere a culorilor pot cauza rezultate inexacte.

În acest sens, utilizarea benzilor de diagnosticare ar trebui să se limiteze la procedurile de screening, iar rezultatele obținute cu ajutorul acestora trebuie considerate doar cu titlu orientativ.

Metode cantitative

Corect cuantificarea proteinelor în urină în unele cazuri se dovedește a fi o sarcină descurajantă. Dificultățile în rezolvarea acesteia sunt determinate de următorul număr de factori:

prezența în urină a multor compuși care pot interfera cu cursul reacțiilor chimice;

fluctuații semnificative ale conținutului și compoziției proteinelor urinare în diferite boli, care complică selecția unui material de calibrare adecvat.

În laboratoarele clinice se folosesc cu precădere așa-numitele metode „de rutină” de determinare a proteinelor în urină, dar nu permit întotdeauna obținerea unor rezultate satisfăcătoare.

Din punctul de vedere al unui analist profesionist care lucrează într-un laborator, o metodă concepută pentru cuantificarea proteinelor în urină trebuie să îndeplinească următoarele cerințe:

au o relație liniară între absorbția complexului format în timpul reacției chimice și conținutul de proteine din probă într-o gamă largă de concentrații, ceea ce va evita operațiuni suplimentare la pregătirea probei pentru cercetare;

ar trebui să fie simplu, să nu necesite calificări înalte ale interpretului, să fie efectuat cu un număr mic de operații;

au sensibilitate ridicată, fiabilitate analitică atunci când se utilizează volume mici de material investigat;

să fie rezistent la diverși factori (fluctuații în compoziția probei, prezența medicamentelor etc.);

au un cost acceptabil;

să fie ușor adaptabil la autoanalizatoare;

rezultatul determinării nu trebuie să depindă de compoziția proteică a probei de urină analizată.

Niciuna dintre metodele cunoscute în prezent pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină nu poate pretinde pe deplin că este „standardul de aur”.

Metodele cantitative pentru determinarea proteinei în urină pot fi împărțite în turbidimetrice și colorimetrice.

Metode turbidimetrice

Metodele turbidimetrice includ:

determinarea proteinei cu acid sulfosalicilic (SSA),

determinarea proteinei cu acid tricloroacetic (TCA),

determinarea proteinei cu clorură de benzetoniu.

Metodele turbidimetrice se bazează pe o scădere a solubilității proteinelor din urină datorită formării unei suspensii de particule în suspensie sub influența agenților de precipitare. Conținutul de proteine din proba de testat se apreciază fie după intensitatea împrăștierii luminii, determinată de numărul de particule care împrăștie lumina (metoda de analiză nefelometrică), fie prin atenuarea fluxului luminos prin suspensia rezultată (metoda de analiză turbidimetrică).

Cantitatea de împrăștiere a luminii în metodele de precipitare pentru detectarea proteinelor în urină depinde de mulți factori: viteza de amestecare a reactivilor, temperatura amestecului de reacție, pH-ul mediului, prezența compușilor străini și metodele de fotometrie. Respectarea atentă a condițiilor de reacție are ca rezultat o suspensie stabilă cu o dimensiune constantă a particulelor și rezultate relativ reproductibile.

Unele medicamente interferează cu rezultatele metodelor turbidimetrice pentru determinarea proteinelor în urină, rezultând așa-numitele rezultate „fals pozitive” sau „fals negative”. Acestea includ unele antibiotice (benzilpenicilină, cloxacilină etc.), substanțe radioopace care conțin iod, medicamente sulfatice.

Metodele turbidimetrice sunt greu de standardizat, duc adesea la rezultate eronate, dar, în ciuda acestui fapt, ele sunt acum utilizate pe scară largă în laboratoare datorită costului scăzut și disponibilității reactivilor. Cea mai utilizată metodă în Rusia pentru determinarea proteinelor cu acid sulfosalicilic.

Metode colorimetrice

Cele mai sensibile și precise sunt metodele colorimetrice pentru determinarea proteinelor totale din urină pe baza reacțiilor de culoare specifice ale proteinelor.

Acestea includ:

reacție la biuret,

metoda Lowry,

metode bazate pe capacitatea diverșilor coloranți de a forma complexe cu proteine:

Ponceau S (Ponceau S),

Coomassie Brilliant Blue

Roșu pirogallol.

Din punctul de vedere al interpretului, în munca zilnică a laboratorului cu un flux mare de studii, metoda biuretului este incomodă din cauza numărului mare de operații. În același timp, metoda se caracterizează printr-o fiabilitate analitică ridicată, permite determinarea proteinei într-o gamă largă de concentrații și detectarea albuminei, globulinelor și paraproteinelor cu sensibilitate comparabilă, drept urmare metoda biuretului este considerată ca referință. metodă și este recomandată pentru comparare cu alte metode analitice pentru detectarea proteinelor în urină. Este de preferat să se efectueze metoda biuretului pentru determinarea proteinei în urină în laboratoarele care deservesc secțiile de nefrologie și utilizată în cazurile în care rezultatele determinării prin alte metode sunt discutabile, precum și pentru determinarea cantității de pierdere zilnică de proteine la pacienții nefrologici. .

Metoda Lowry, care are o sensibilitate mai mare în comparație cu metoda biuretului, combină reacția biuretului și reacția Folin la aminoacizii tirozină și triptofan într-o moleculă proteică. În ciuda sensibilității sale ridicate, această metodă nu oferă întotdeauna rezultate fiabile la determinarea conținutului de proteine în urină. Motivul pentru aceasta este interacțiunea nespecifică a reactivului Folin cu componentele neproteice ale urinei (cel mai adesea aminoacizi, acid uric, carbohidrați). Separarea acestor și a altor componente ale urinei prin dializă sau precipitare a proteinelor face posibilă utilizarea cu succes a acestei metode pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină. Unele medicamente - salicilații, clorpromazina, tetraciclinele - pot influența această metodă și pot distorsiona rezultatele cercetării.

Sensibilitatea suficientă, reproductibilitatea bună și ușurința în determinarea proteinelor prin legarea coloranților fac ca aceste metode să fie promițătoare; cu toate acestea, costul ridicat al reactivilor împiedică utilizarea lor mai largă în laboratoare. În prezent, metoda cu roșu pirogalol devine din ce în ce mai răspândită în Rusia.

Atunci când se efectuează un studiu al nivelului de proteinurie, trebuie avut în vedere faptul că diferitele metode de determinare a proteinuriei au sensibilitate și specificitate diferite pentru numeroase proteine din urină.

Pe baza datelor empirice, se recomandă determinarea proteinei prin două metode diferite și calcularea valorii adevărate folosind una dintre următoarele formule: proteinurie = 0,4799 B + 0,5230 L; proteinurie = 1,5484 B - 0,4825 S; proteinurie = 0,2167 S + 0,7579 L; proteinurie = 1,0748 P - 0,0986 B; proteinurie = 1,0104 P - 0,0289 S; proteinurie = 0,8959 P + 0,0845 L; unde B este rezultatul măsurării cu Coomassie G-250; L este rezultatul măsurării cu reactiv Lowry; P este rezultatul măsurării cu pirogalol molibdat; S - rezultatul măsurării cu acid sulfosalicilic.

Ținând cont de fluctuațiile pronunțate ale nivelului de proteinurie în diferite momente ale zilei, precum și de dependența concentrației de proteine din urină de diureză, conținutul său diferit în porțiuni individuale de urină, în prezent, cu patologie renală, este se obișnuiește să se evalueze severitatea proteinuriei prin pierderea zilnică de proteine în urină, adică să se determine așa-numita proteinurie zilnică. Se exprimă în g/zi.

Dacă este imposibil să colectați zilnic urina, se recomandă determinarea concentrației de proteine și creatinine într-o singură porție de urină. Deoarece rata de excreție a creatininei în timpul zilei este destul de constantă și nu depinde de modificările ratei de urinare, raportul dintre concentrația de proteine și concentrația de creatinine este constant. Acest raport se corelează bine cu excreția zilnică de proteine și, prin urmare, poate fi utilizat pentru a evalua severitatea proteinuriei. În mod normal, raportul proteine/creatinină ar trebui să fie mai mic de 0,2. Proteinele și creatinina sunt măsurate în g/L. Un avantaj important al metodei de evaluare a severității proteinuriei prin raportul proteină-creatinină este eliminarea completă a erorilor asociate cu imposibilitatea sau colectarea incompletă a urinei zilnice.

Literatură:

OV Novoselova, MB Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, „Aspecte clinice ale detectării și evaluării proteinuriei”, Manualul șefului CDL, nr. 1, ianuarie 2007

A. V. Kozlov, „Proteinuria: metode de detectare a acesteia”, prelegere, Sankt Petersburg, SPbMAPO, 2000

VL Emanuel, „Diagnosticul de laborator al bolii renale. Sindromul urinar”, - Manualul șefului CDL, nr. 12, decembrie 2006.

IN SI. Pupkova, L.M. Prasolova - Metode de determinare a proteinei în urină (revizuire a datelor din literatură)

Manual de metode de cercetare de laborator clinic. Ed. E. A. Kost. Moscova, „Medicina”, 197

Toate metodele de determinare a proteinelor în urină se bazează pe coagularea proteinelor sub influența agenților chimici sau termici. În prezența proteinelor în urină, apare turbiditatea, al cărei grad depinde de cantitatea de proteine.

A) mostre de calitate determinarea proteinelor în urină – sunt necesare.

1. Proba cu acid azotic- într-o eprubetă cu 1-2 ml de soluție de acid azotic 50%, se adaugă cu grijă o cantitate egală de urină, încercând să nu se agită lichidul. În cazul prezenței proteinelor în urină, la marginea celor două fluide apare un inel alb, mai bine vizibil pe fond negru.

2. Proba cu acid sulfasalicilic- Se toarnă 4-5 ml de urină într-o eprubetă și se adaugă 8-10 picături de reactiv. În prezența proteinelor în urină, în funcție de cantitate, pot apărea tulburări sau floculare.

3. Test rapid (test de diagnostic uscat)- o bandă de hârtie indicatoare „Albufan” este scufundată în urina de testare astfel încât să umezească simultan ambele zone indicator (zona superioară este pentru determinarea pH-ului, cea inferioară este pentru determinarea proteinei). După 2-3 secunde, banda se așează pe o placă de sticlă albă. Evaluarea se efectuează la 60 de secunde după umezirea benzii cu urină, folosind scara de culori imprimată pe carcasa cu benzile indicatoare.

B) probe cantitative- efectuat în acele porțiuni de urină în care proteina a fost găsită în determinarea ei calitativă; determinarea se efectuează în stratul de supernatant după centrifugare

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov- 1-3 ml de soluție 50% de acid azotic se toarnă într-o eprubetă și aceeași cantitate de urină se așează cu grijă de-a lungul peretelui. Timpul se numără pe cronometru. Dacă la marginea lichidelor se formează un inel imediat sau mai devreme de 2 minute după stratificare, urina trebuie diluată cu apă. După aceea, se efectuează o determinare repetată a proteinei în urina diluată. Diluarea se efectuează până când apare un inel alb între al 2-lea și al 3-lea minute când urina diluată este adăugată la acidul azotic. Cantitatea de proteină este determinată prin înmulțirea a 0,033 ppm cu rata de diluție.

18. Tehnica de luare a frotiurilor pentru flora, gonococi, Trichomonas, examen citologic, KPI.

Tehnica frotiului floral: materialul se preia din canalul cervical si din uretra cu o perie speciala sub control vizual. Proba rezultată este plasată imediat pe o lamă de sticlă și triturată.

Tehnica de luare a frotiurilor pentru Trichomonas: mai întâi, materialul este prelevat prin răzuire de pe membrana mucoasă a uretrei (după masajul său preliminar timp de 1 min, articulația pubiană) și fornixul posterior al vaginului, apoi ștergeți partea vaginală a colului uterin cu un tampon steril umezit. cu ser fiziologic, se scoate dopul mucos, cu grijă nu până la adâncimea canalului cervical mai mult de 1,0-1,5 cm, se introduce o sondă și se ia o răzuire de pe membrana mucoasă a colului uterin.

Tehnica frotiului gonococic: materialul este prelevat din uretra, glandele lui Bartholin si pasajele parauretrale dupa ce le stergeti cu un tampon de vata umezit cu ser fiziologic, pensete vaginale sau o sonda speciala. Din rect, materialul este luat cu o lingură tocită. În gonoreea cronică și torpidă, înainte de testare se efectuează o provocare pentru a crește probabilitatea identificării agentului patogen.

Nu puteți lua materialul cu un tampon de bumbac și în timpul menstruației.

Tehnica de prelevare a frotiurilor pentru examen citologic: se prelevează un frotiu de pe suprafața exocervixului, vaginului și vulvei cu ajutorul unei spatule, din endocol - folosind o perie de endobrah. Materialul este aplicat în strat subțire pe sticlă degresată special tratată și tratată cu un compus special pentru a preveni uscarea celulelor. Preparatele se colorează după metoda Papanicolaou (așa-numitul frotiu PAP) și microscopic.

Indicele cariopicnotic- procentul de celule superficiale cu nuclei picnotici fata de celulele cu nuclei veziculari (nepicnotici). KPI la începutul fazei foliculare a ciclului menstrual este de 25-30%, în momentul ovulației 60-70%, în faza luteală scade la 25%.

Instrucțiuni

Metode calitative de determinare a proteinei în urină: Metoda Geller, test cu soluție de acid sulfosalicilic 20%, test de fierbere etc. Metode semi-cantitative: folosirea testelor de diagnosticare pentru determinarea proteinei în urină, metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov. Metode cantitative: turbidimetrice și colorimetrice.

Determinarea proteinelor pe zi urină la o concentrație de 0,033 g / litru sau mai mult este o patologie. De regulă, în porțiunea de dimineață de urină, concentrația de proteine nu depășește 0,002 g / l, iar în fiecare zi urină concentrația de proteine nu este mai mare de 50-150 mg de proteine.

Surse:

determinarea proteinelor în urină

Urina este un produs al metabolismului uman. Se formează prin filtrarea sângelui în rinichi, motiv pentru care compoziția urinei oferă o descriere clară a stării corpului uman.

Urina este o soluție complexă de peste 150 de compuși. Unele substanțe specifice, de exemplu, acetona, acizii biliari, proteinele, glucoza, pot fi prezente numai în anumite boli.

Pentru a controla sănătatea umană, în primul rând, este necesar să se determine cantitatea de urină. Norma este formarea a 1-1,8 litri de urină pe zi. Când se eliberează mai mult de 2 litri de urină, acesta este un semn al unei posibile afectari a funcționării rinichilor, diabet zaharat și o serie de alte boli. Dacă se produc mai puțin de 0,5 litri de urină pe zi, există un blocaj al ureterului sau vezicii urinare.

Culoarea urinei

Culoarea urinei excretate depinde de mulți factori, așa că poate varia de la galben deschis la portocaliu. Prezența anumitor nuanțe poate fi afectată de unele produse alimentare, precum și de medicamentele luate de o persoană.

După administrarea medicamentelor, urina poate deveni colorată și roșiatică. Dacă o persoană se mișcă activ, în timp ce are o cantitate mare de transpirație, urina va avea o culoare galben intens, precum și atunci când ia fonduri precum „Nitroxoline” sau „Biomicina”.

Dacă o persoană nu a luat alimente și medicamente colorante, dar culoarea urinei sale este diferită de cea obișnuită, se poate suspecta prezența unei boli în organism. De exemplu, în cazul bolilor hepatice, urina va fi de culoare galben închis sau verzui.

Prezența sângelui în urina excretată indică clar prezența unei pietre în sau a sângerării renale, dacă se observă și durere.

Dacă urinarea este dificilă, aceasta poate indica un proces inflamator cauzat de o infecție a vezicii urinare. Dar urina murdară și tulbure indică o boală renală severă.

Proteine în urină

În sângele unei persoane, nu există proteine sau cantitatea acesteia este atât de mică încât nu poate fi determinată prin teste de laborator. Dacă proteina este detectată în urină, este necesar să se efectueze teste repetate, deoarece poate fi prezentă atunci când o persoană se trezește dimineața, precum și după muncă fizică grea sau stres la sportivi.

Este 100% imposibil de determinat vizual dacă proteinele sunt prezente în urină sau nu. Se poate doar ghici când există o cantitate mare de fulgi albici în urină.

Dacă proteina este re-detectată în urină, aceasta indică prezența unui fel de boală renală. Procesele inflamatorii care apar în ele provoacă o ușoară creștere a cantității de proteine. Dacă mai mult de 2 grame sunt excretate prin urină, acesta este un semnal alarmant.

Pielonefrita este o boală inflamatorie în care sunt afectate pelvisul renal, caliciul și parenchimul. În cele mai multe cazuri, cauza inflamației este o infecție bacteriană. Recuperarea completă este posibilă numai cu diagnosticarea în timp util, prin urmare, dacă apar simptome, este necesară o examinare amănunțită.