Ενδιαφέροντα γεγονότα 

Μέθοδοι προσδιορισμού πρωτεΐνης στα ούρα. Μέθοδοι ποσοτικής αξιολόγησης. Μέθοδοι προσδιορισμού πρωτεΐνης στα ούρα

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Κανονικά, η πρωτεΐνη απεκκρίνεται στα ούρα σε σχετικά μικρή ποσότητα, συνήθως όχι περισσότερο από 100-150 mg / ημέρα.

Η ημερήσια διούρηση σε ένα υγιές άτομο είναι 1000-1500 ml / ημέρα. Έτσι, η συγκέντρωση πρωτεΐνης υπό φυσιολογικές συνθήκες είναι 8-10 mg/dL (0,08-0,1 g/L).

Η συνολική πρωτεΐνη των ούρων αντιπροσωπεύεται από τρία κύρια κλάσματα - λευκωματίνες, βλεννοπρωτεΐνες και σφαιρίνες.

Η λευκωματίνη ούρων είναι εκείνο το τμήμα της λευκωματίνης ορού που έχει φιλτραριστεί στο σπείραμα και δεν έχει επαναρροφηθεί στο νεφρικά σωληνάρια; Η φυσιολογική απέκκριση λευκωματίνης στα ούρα είναι μικρότερη από 30 mg/ημέρα. Μια άλλη κύρια πηγή πρωτεΐνης στα ούρα είναι τα νεφρικά σωληνάρια, ειδικά το περιφερικό τμήμα των σωληναρίων. Αυτά τα σωληνάρια εκκρίνουν τα δύο τρίτα της συνολικής πρωτεΐνης των ούρων. από αυτή την ποσότητα, περίπου το 50% αντιπροσωπεύεται από τη γλυκοπρωτεΐνη Tamm-Horsfall, η οποία εκκρίνεται από το επιθήλιο των περιφερικών σωληναρίων και παίζει σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό πέτρες του ουροποιητικού. Άλλες πρωτεΐνες υπάρχουν στα ούρα μικρή ποσότητακαι προέρχονται από φιλτραρισμένες με νεφρικό φίλτρο πρωτεΐνες πλάσματος χαμηλού μοριακού βάρους που δεν επαναρροφούνται στα νεφρικά σωληνάρια, μικροσφαιρίνες νεφρικού σωληναριακού επιθηλίου (RTE) και προστατικές και κολπικές εκκρίσεις.

Η πρωτεϊνουρία, δηλαδή η αύξηση της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη στα ούρα, είναι ένα από τα πιο σημαντικά συμπτώματα που αντικατοπτρίζουν τη νεφρική βλάβη. Ωστόσο, ολόκληρη γραμμήάλλες καταστάσεις μπορεί επίσης να συνοδεύονται από πρωτεϊνουρία. Επομένως, υπάρχουν δύο κύριες ομάδες πρωτεϊνουρίας: η νεφρική (αληθινή) και η εξωνεφρική (ψευδής) πρωτεϊνουρία.

Στη νεφρική πρωτεϊνουρία, η πρωτεΐνη εισέρχεται στα ούρα απευθείας από το αίμα λόγω της αύξησης της διαπερατότητας του σπειραματικού φίλτρου. Η νεφρική πρωτεϊνουρία εντοπίζεται συχνά σε σπειραματονεφρίτιδα, νέφρωση, πυελονεφρίτιδα, νεφροσκλήρωση, νεφρική αμυλοείδωση, διάφορες μορφέςνεφροπάθειες, για παράδειγμα, νεφροπάθεια εγκυμοσύνης, εμπύρετες καταστάσεις, υπέρτασηκαι τα λοιπά. Πρωτεϊνουρία μπορεί επίσης να βρεθεί σε υγιή άτομα μετά από έντονη σωματική καταπόνηση, υποθερμία, ψυχολογικό στρες. Στα νεογνά τις πρώτες εβδομάδες της ζωής, παρατηρείται φυσιολογική πρωτεϊνουρία και με εξασθένηση σε παιδιά και εφήβους σε συνδυασμό με ταχεία ανάπτυξησε ηλικία 7-18 ετών είναι δυνατή η ορθοστατική πρωτεϊνουρία (στην όρθια θέση του σώματος).

Με ψευδή (εξωνεφρική) πρωτεϊνουρία, η πηγή πρωτεΐνης στα ούρα είναι μια πρόσμιξη λευκοκυττάρων, ερυθροκυττάρων και ουροθηλιακών κυττάρων του επιθηλίου του ουροποιητικού συστήματος. Η αποσύνθεση αυτών των στοιχείων, ιδιαίτερα έντονη σε αλκαλική αντίδρασηούρων, οδηγεί στην είσοδο πρωτεΐνης στα ούρα, τα οποία έχουν ήδη περάσει το νεφρικό φίλτρο. Ειδικά υψηλό βαθμόΗ ψευδής πρωτεϊνουρία δίνει μια πρόσμιξη αίματος στα ούρα, με άφθονη αιματουρία μπορεί να φτάσει τα 30 g / l ή περισσότερο. Ασθένειες που μπορεί να συνοδεύονται από εξωνεφρική πρωτεϊνουρία - νόσος της ουρολιθίασης, φυματίωση του νεφρού, όγκοι του νεφρού ή του ουροποιητικού συστήματος, κυστίτιδα, πυελίτιδα, προστατίτιδα, ουρηθρίτιδα, αιδοιοκολπίτιδα.

Η κλινική ταξινόμηση περιλαμβάνει ήπια πρωτεϊνουρία (λιγότερο από 0,5 g/ημέρα), μέτρια (0,5 έως 4 g/ημέρα) ή σοβαρή (μεγαλύτερη από 4 g/ημέρα).

Οι περισσότεροι ασθενείς με νεφρική νόσο, όπως οξεία σπειραματονεφρίτιδα ή πυελονεφρίτιδα, έχουν ήπια πρωτεϊνουρία, αλλά οι ασθενείς με νεφρωσικό σύνδρομο συνήθως εκκρίνουν περισσότερα από 4 g πρωτεΐνης ημερησίως στα ούρα.

Χρησιμοποιείται ένα ευρύ φάσμα μεθόδων για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης, ειδικότερα, η ενοποιημένη μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov, η μέθοδος διουρίας, η μέθοδος με χρήση σουλφοσαλικυλικού οξέος, μέθοδοι που χρησιμοποιούν μπλε βαφή Coomassie, κόκκινη βαφή πυρογαλολόλης κ.λπ.

Η χρήση διαφόρων μεθόδων για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα έχει οδηγήσει σε σοβαρή σύγχυση στην ερμηνεία των ορίων της φυσιολογικής περιεκτικότητας πρωτεΐνης στα ούρα. Δεδομένου ότι 2 μέθοδοι χρησιμοποιούνται συχνότερα σε εργαστήρια - με σουλφοσαλικυλικό οξύ και κόκκινη βαφή πυρογαλλόλης, θα εξετάσουμε το πρόβλημα της ορθότητας των ορίων των κανόνων γι 'αυτούς. Από τη θέση της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου στα φυσιολογικά ούρα, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 0,03 g / l, από τη θέση της μεθόδου πυρογαλολόλης - 0,1 g / l! Οι διαφορές τριπλάσιες!

Οι χαμηλές τιμές του κανόνα της συγκέντρωσης πρωτεϊνών στα ούρα κατά τη χρήση σουλφοσαλικυλικού οξέος οφείλονται στα ακόλουθα σημεία:

  • η καμπύλη βαθμονόμησης είναι κατασκευασμένη σύμφωνα με υδατικό διάλυμαλευκωματίνη. Τα ούρα στη σύνθεσή τους διαφέρουν πολύ από το νερό: pH, άλατα, ενώσεις χαμηλού μοριακού βάρους (κρεατινίνη, ουρία κ.λπ.). Ως αποτέλεσμα, σύμφωνα με τους Altshuler, Rakov και Tkachev, το σφάλμα στον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα μπορεί να είναι τριπλάσιο ή περισσότερο! Εκείνοι. Τα σωστά αποτελέσματα προσδιορισμού μπορούν να ληφθούν μόνο σε περιπτώσεις όπου τα ούρα έχουν πολύ χαμηλή ειδικό βάροςκαι στη σύνθεσή του και το pH πλησιάζει το νερό?
  • υψηλότερη ευαισθησία της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου στη λευκωματίνη σε σύγκριση με άλλες πρωτεΐνες (ενώ, όπως αναφέρθηκε παραπάνω, η λευκωματίνη σε δείγματα φυσιολογικών ούρων δεν υπερβαίνει το 30% της συνολικής πρωτεΐνης ούρων).
  • εάν το pH των ούρων μετατοπιστεί στην αλκαλική πλευρά, το σουλφοσαλικυλικό οξύ εξουδετερώνεται, κάτι που είναι επίσης ο λόγος για την υποτίμηση των αποτελεσμάτων του προσδιορισμού της πρωτεΐνης.
  • ο ρυθμός καθίζησης των ιζημάτων υπόκειται σε σημαντικές διακυμάνσεις - εάν όχι υψηλές συγκεντρώσειςΗ καθίζηση των πρωτεϊνών επιβραδύνεται και η πρώιμη διακοπή της αντίδρασης οδηγεί σε υποεκτίμηση του αποτελέσματος.
  • Ο ρυθμός της αντίδρασης καθίζησης εξαρτάται ουσιαστικά από την ανάμιξη του μίγματος της αντίδρασης. Σε υψηλές συγκεντρώσεις πρωτεΐνης, η έντονη ανακίνηση του σωλήνα μπορεί να οδηγήσει στον σχηματισμό μεγάλων νιφάδων και στην ταχεία καθίζησή τους.

Όλα τα παραπάνω χαρακτηριστικά της μεθόδου οδηγούν σε σημαντική υποεκτίμηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης που προσδιορίζεται στα ούρα. Ο βαθμός υποτίμησης εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τη σύνθεση ενός συγκεκριμένου δείγματος ούρων. Δεδομένου ότι η μέθοδος σουλφοσαλικυλικού οξέος δίνει υποεκτιμημένες συγκεντρώσεις πρωτεΐνης, το φυσιολογικό όριο για αυτήν τη μέθοδο των 0,03 g / l υποτιμάται επίσης κατά περίπου τρεις φορές σε σύγκριση με τα δεδομένα που δίνονται σε ξένα βιβλία αναφοράς για κλινικά εργαστηριακά διαγνωστικά.

Η συντριπτική πλειονότητα των εργαστηρίων στις δυτικές χώρες έχουν εγκαταλείψει τη χρήση της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα και χρησιμοποιούν ενεργά τη μέθοδο της πυρογαλλόλης για το σκοπό αυτό. Η μέθοδος πυρογαλλόλης για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα και άλλα βιολογικά υγρά βασίζεται στη φωτομετρική αρχή της μέτρησης της οπτικής πυκνότητας ενός έγχρωμου συμπλόκου που σχηματίζεται από την αλληλεπίδραση μορίων πρωτεΐνης με μόρια του συμπλόκου Pyrogallol Red dye και του συμπλόκου μολυβδαινικού νατρίου. σύμπλοκο Pyrogallol Red-Molybdate).

Γιατί η μέθοδος πυρογαλλόλης παρέχει πιο ακριβείς μετρήσεις πρωτεΐνης ούρων; Πρώτον, λόγω της μεγαλύτερης αραίωσης του δείγματος ούρων στο μίγμα της αντίδρασης. Εάν στη μέθοδο σουλφοσαλικυλικής η αναλογία δείγματος ούρων / αντιδραστηρίου είναι 1/3, τότε στη μέθοδο πυρογαλλόλης μπορεί να κυμαίνεται από 1/12,5 έως 1/60, ανάλογα με την παραλλαγή της μεθόδου, γεγονός που μειώνει σημαντικά την επίδραση της σύνθεσης των ούρων στο αποτέλεσμα μέτρησης. Δεύτερον, η αντίδραση προχωρά σε ρυθμιστικό ηλεκτρικού, δηλαδή σε σταθερό pH. Και, τέλος, η ίδια η αρχή της μεθόδου, θα έλεγε κανείς, είναι πιο «διαφανής». Το μολυβδαινικό νάτριο και η κόκκινη βαφή πυρογαλλόλης σχηματίζουν ένα σύμπλοκο με ένα μόριο πρωτεΐνης. Αυτό οδηγεί στο γεγονός ότι τα μόρια της χρωστικής σε ελεύθερη κατάσταση, τα οποία δεν απορροφούν φως σε μήκος κύματος 600 nm, απορροφούν φως σε συνδυασμό με την πρωτεΐνη. Έτσι, επισημαίνουμε κάθε μόριο πρωτεΐνης με μια βαφή και ως αποτέλεσμα, διαπιστώνουμε ότι η αλλαγή στην οπτική πυκνότητα του μίγματος αντίδρασης σε μήκος κύματος 600 nm συσχετίζεται σαφώς με τη συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα. Επιπλέον, δεδομένου ότι η συγγένεια του κόκκινου πυρογαλλόλης για διαφορετικά κλάσματα πρωτεΐνης είναι σχεδόν η ίδια, η μέθοδος σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τη συνολική πρωτεΐνη ούρων. Ως εκ τούτου, τα σύνορα κανονικές τιμέςη συγκέντρωση της πρωτεΐνης στα ούρα είναι 0,1 g/l (ενδείκνυται σε όλες τις σύγχρονες δυτικές κατευθυντήριες οδηγίες για κλινική και εργαστηριακή διάγνωση, συμπεριλαμβανομένου του «Κλινικού Οδηγού για Εργαστηριακές Δοκιμές», που επιμελήθηκε ο N. Titz). Συγκριτικά χαρακτηριστικά των μεθόδων πυρογαλλόλης και σουλφοσαλικυλικής για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Εν κατακλείδι, θα ήθελα να εστιάσω για άλλη μια φορά στο γεγονός ότι όταν το εργαστήριο αλλάζει από τη μέθοδο σουλφοσαλικυλικού προσδιορισμού πρωτεΐνης στα ούρα στη μέθοδο πυρογαλολόλης, το όριο των φυσιολογικών τιμών αυξάνεται σημαντικά (από 0,03 g/l σε 0,1 g /μεγάλο!). Το εργαστηριακό προσωπικό πρέπει οπωσδήποτε να ενημερώσει σχετικά τους κλινικούς γιατρούς, γιατί. Σε αυτήν την περίπτωση, η διάγνωση της πρωτεϊνουρίας μπορεί να γίνει μόνο όταν η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα ούρα υπερβαίνει το 0,1 g / l.

Βιβλιογραφία.

  1. Altshuler B.Yu., Rakov S.S., Tkachev G.A. // Ερώτηση. μέλι. χημεία. - 2001. - Αρ. 4. - Γ.426-438.
  2. Kim Yu.V., Potekhin O.E., Tokar M.I., Shibanov A.N. // Εργαστήριο. μέλι. - 2003. - Αρ. 6. - Γ.94-98.
  3. Clinical Guide to Laboratory Tests, ed. Ν. Τίτσα.- Μ.- Unimed-press.-2003.- 942 σελ.
  4. Kozlov A.V., Slepysheva V.V. Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα: ευκαιρίες και προοπτικές // Συλλογή έργων του VII ετήσιου. SPb νεφρόλη. σεμινάριο. - Αγία Πετρούπολη: TNA. - 1999. - Γ.17-28.
  5. Pupkova V.I., Pikalov I.V., Khrykina E.N., Kharkovskiy A.V. // Ειδήσεις "Vector-Best". - 2003. - Νο. 4 (30).
  6. Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ανν. Clin. Biochem. - 1991. - Τόμ. 28 (Σημ. 5). - Σελ.467-473.
  7. Κλινικά Εργαστήρια Ιατρικής. Εκδ. από τον Kenneth D. McClatchey. - 2η έκδ.-2001.- 1993σ.
  8. Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // κλινική. Biochem. - 2000. - Τόμ. 33.-Σ.487-494.
  9. Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Σύνθεση και συσκευή για δοκιμασία πρωτεΐνης ούρων και μέθοδος χρήσης του ίδιου // Ευρεσιτεχνία ΗΠΑ αρ. 5326707. - 1994.
  10. Kaplan I.V., Levinson S.S. // κλινική. Chem. - 1999. - Τόμ. 45.-Σ.417-419.
  11. Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. of Med. - 2003. - Τόμ. 70(6). - Σελ.535-547.
  12. Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // κλινική. Chem. - 2001. - Τόμ. 47.-Σ.2183-2184.
  13. Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Άρθρο στα γαλλικά. - Ανν. Biol. Clin. (Παρίσι). - 1998. - Τόμ. 56(6). - Σελ.719-723.
  14. Marshall T., Williams K.M. // κλινική. Chem. - 2003. - Τόμ. 49(12). - Σελ.2111-2112.
  15. Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D'Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Chim. acta. - 2002. - Τόμ. 326(1-2). - Σελ.177-183.
  16. Ringsrud K.M., Linne J.J. Ανάλυση ούρων και σωματικά υγρά: Ένα ColorText και Atlas // Mosby. - 1995. - Σελ.52-54.
  17. Shepard M.D., Penberthy L.A. // κλινική. Chem. - 1987. - Τόμ. 33.-Σ.792-795.
  18. Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. μεθόδους. - 2001. - Τόμ. 47.-Σ.197-207.
  19. Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. μεθόδους. - 2003. - Τόμ. 57(1). - Σελ.45-55.

Μικρές ποσότητες πρωτεΐνης βρίσκονται στα καθημερινά ούρα υγιών ατόμων. Ωστόσο, τέτοιες χαμηλές συγκεντρώσεις δεν μπορούν να ανιχνευθούν χρησιμοποιώντας συμβατικές μεθόδουςέρευνα. Η απέκκριση μεγαλύτερων ποσοτήτων πρωτεΐνης, κατά την οποία οι συνήθεις ποιοτικές εξετάσεις για πρωτεΐνη στα ούρα γίνονται θετικές, ονομάζεται πρωτεϊνουρία. Υπάρχουν νεφρική (αληθινή) και εξωνεφρική (ψευδή) πρωτεϊνουρία. Στη νεφρική πρωτεϊνουρία, η πρωτεΐνη εισέρχεται στα ούρα απευθείας από το αίμα λόγω της αύξησης της διήθησής της από τα σπειράματα του νεφρού ή της μείωσης της σωληναριακής επαναρρόφησης.

Νεφρική (αληθινή) πρωτεϊνουρία

Η νεφρική (αληθινή) πρωτεϊνουρία είναι λειτουργική και οργανική. Μεταξύ της λειτουργικής νεφρικής πρωτεϊνουρίας, παρατηρούνται συχνότερα οι ακόλουθοι τύποι:

Φυσιολογική πρωτεϊνουρία νεογνών, η οποία εξαφανίζεται την 4η - 10η ημέρα μετά τη γέννηση, και στα πρόωρα μωρά λίγο αργότερα.
- ορθοστατική λευκωματουρία, η οποία είναι χαρακτηριστική για παιδιά ηλικίας 7-18 ετών και εμφανίζεται μόνο στην όρθια θέση του σώματος.
- παροδική (εγκεφαλική) λευκωματουρία, η οποία μπορεί να προκληθεί από διάφορες παθήσεις του πεπτικού συστήματος, σοβαρή αναιμία, εγκαύματα, τραυματισμούς ή φυσιολογικούς παράγοντες: βαρύ άγχος άσκησης, υποθερμία, δυνατά συναισθήματα, άφθονη, πλούσια σε πρωτεΐνες τροφή κ.λπ.

Η οργανική (νεφρική) πρωτεϊνουρία παρατηρείται λόγω της διέλευσης πρωτεΐνης από το αίμα μέσω κατεστραμμένων περιοχών του ενδοθηλίου των νεφρικών σπειραμάτων σε νεφρικές παθήσεις (σπειραματονεφρίτιδα, νεφρίτιδα, νεφροσκλήρωση, αμυλοείδωση, νεφροπάθεια κατά την εγκυμοσύνη), διαταραχές της νεφρικής αιμοδυναμικής (νεφρική φλεβική υπέρταση, υποξία), τροφικές και τοξικές (συμπεριλαμβανομένων των φαρμακευτικών) επιδράσεις στα τοιχώματα των σπειραματικών τριχοειδών αγγείων.

Εξωνεφρική (ψευδής) πρωτεϊνουρία

Εξωνεφρική (ψευδής) πρωτεϊνουρία, κατά την οποία η πηγή πρωτεΐνης στα ούρα είναι πρόσμιξη λευκοκυττάρων, ερυθροκυττάρων, βακτηρίων, ουροθηλιακών κυττάρων. παρατηρούνται σε ουρολογικές παθήσεις (ουρολιθίαση, φυματίωση νεφρού, όγκοι νεφρού και ουροποιητικού κ.λπ.).

Προσδιορισμός πρωτεΐνης στα ούρα

Οι περισσότερες ποιοτικές και ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα βασίζονται στην πήξή της στον όγκο των ούρων ή στη διεπιφάνεια των μέσων (ούρα και οξύ).

Μεταξύ των ποιοτικών μεθόδων για τον προσδιορισμό του bedka στα ούρα, η ενοποιημένη δοκιμή με σουλφοσαλικυλικό οξύ και η δοκιμή δακτυλίου Heller χρησιμοποιούνται ευρέως.

Ένα τυποποιημένο δείγμα με σουλφασαλικυλικό οξύ πραγματοποιείται ως εξής. 3 ml φιλτραρισμένων ούρων χύνονται σε 2 σωληνάρια. Σε ένα από αυτά προσθέστε 6-8 σταγόνες από διάλυμα σουλφασαλικυλικού οξέος 20%. Και οι δύο σωλήνες συγκρίνονται σε σκούρο φόντο. Η θολότητα των ούρων σε δοκιμαστικό σωλήνα με σουλφασαλικυλικό οξύ υποδηλώνει την παρουσία πρωτεΐνης. Πριν από τη μελέτη, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί η αντίδραση των ούρων και εάν είναι αλκαλική, τότε οξινίστε με 2-3 σταγόνες διαλύματος 10%. οξικό οξύ.

Το τεστ Geller βασίζεται στο γεγονός ότι παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα στο όριο του νιτρικού οξέος και των ούρων, πήζει και εμφανίζεται ένας λευκός δακτύλιος. 1-2 ml διαλύματος νιτρικού οξέος 30% χύνεται σε δοκιμαστικό σωλήνα και η ίδια ακριβώς ποσότητα φιλτραρισμένων ούρων τοποθετείται προσεκτικά κατά μήκος του τοιχώματος του δοκιμαστικού σωλήνα. Η εμφάνιση ενός λευκού δακτυλίου στη διεπιφάνεια μεταξύ δύο υγρών υποδηλώνει την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα. Θα πρέπει να θυμόμαστε ότι μερικές φορές σχηματίζεται ένας λευκός δακτύλιος παρουσία μεγάλης ποσότητας ουρικών, αλλά σε αντίθεση με τον πρωτεϊνικό δακτύλιο, εμφανίζεται ελαφρώς πάνω από το όριο μεταξύ δύο υγρών και διαλύεται όταν θερμαίνεται [Pletneva N.G., 1987].

Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες ποσοτικές μέθοδοι είναι:

1) την ενοποιημένη μέθοδο Brandberg-Roberts-Stolnikov, η οποία βασίζεται στη δοκιμή δακτυλίου Heller.
2) φωτοηλεκτροχρωματομετρική μέθοδος για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα από τη θολότητα που σχηματίζεται με την προσθήκη σουλφασαλικυλικού οξέος.
3) μέθοδος διουρίας.

Η ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα με απλοποιημένη επιταχυνόμενη μέθοδο πραγματοποιείται με χρωματομετρική μέθοδο χρησιμοποιώντας χαρτί δείκτη, το οποίο παράγεται από τις Lachema (Σλοβακία), Albuphan, Ames (Αγγλία), Albustix, Boehringer (Γερμανία), Comburtest και άλλες. βυθίζοντας στα ούρα μια ειδική χάρτινη λωρίδα εμποτισμένη με μπλε τετραβρωμοφαινόλης και ρυθμιστικό κιτρικού άλατος, η οποία αλλάζει το χρώμα της από κίτρινο σε μπλε ανάλογα με την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα ούρα. Δοκιμαστικά, η συγκέντρωση της πρωτεΐνης στα ούρα δοκιμής προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας μια τυπική κλίμακα. Για να πάρεις σωστά αποτελέσματαπρέπει να τηρούνται οι ακόλουθες προϋποθέσεις. Το pH των ούρων πρέπει να κυμαίνεται μεταξύ 3,0-3,5. με πολύ αλκαλικά ούρα (pH 6,5) θα ληφθούν ψευδώς θετικό αποτέλεσμα, και με πολύ όξινα ούρα (pH 3,0) - ψευδώς αρνητικά.

Το χαρτί δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή με τα ούρα που ελέγχονται για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα από αυτό που υποδεικνύεται στις οδηγίες, διαφορετικά το τεστ θα δώσει ψευδώς θετική αντίδραση. Το τελευταίο παρατηρείται και όταν υπάρχει μεγάλη ποσότητα βλέννας στα ούρα. Ευαισθησία διάφορα είδηκαι οι σειρές χαρτιού μπορεί να είναι διαφορετικές, επομένως η ποσοτική αξιολόγηση της πρωτεΐνης στα ούρα με αυτή τη μέθοδο θα πρέπει να αντιμετωπίζεται με προσοχή. Ο προσδιορισμός της ποσότητας του στα καθημερινά ούρα με τη χρήση χαρτιού δείκτη είναι αδύνατος [Pletneva N.G., 1987]

Ορισμός της καθημερινής πρωτεϊνουρίας

Υπάρχουν διάφοροι τρόποι για τον προσδιορισμό της ποσότητας πρωτεΐνης που εκκρίνεται στα ούρα ανά ημέρα. Η πιο απλή είναι η μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Μεθοδολογία. 5-10 ml επιμελώς αναμεμειγμένων ούρων καθημερινά χύνονται σε δοκιμαστικό σωλήνα και προστίθεται προσεκτικά κατά μήκος των τοιχωμάτων του ένα διάλυμα νιτρικού οξέος 30%. Με την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα σε ποσότητα 0,033% (δηλαδή 33 mg ανά 1 λίτρο ούρων), εμφανίζεται ένας λεπτός, αλλά σαφώς ορατός λευκός δακτύλιος μετά από 2-3 λεπτά. Σε χαμηλότερη συγκέντρωση, το τεστ είναι αρνητικό. Με υψηλότερη περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα ούρα, η ποσότητα της προσδιορίζεται με επαναλαμβανόμενες αραιώσεις ούρων με απεσταγμένο νερό μέχρι να σταματήσει να σχηματίζεται ο δακτύλιος. Στον τελευταίο δοκιμαστικό σωλήνα στον οποίο ο δακτύλιος είναι ακόμα ορατός, η συγκέντρωση πρωτεΐνης θα είναι 0,033%. Πολλαπλασιάζοντας το 0,033 με το βαθμό αραίωσης των ούρων, προσδιορίστε την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη σε 1 λίτρο αδιάλυτων ούρων σε γραμμάρια. Στη συνέχεια, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα καθημερινά ούρα υπολογίζεται με τον τύπο:

K \u003d (x V) / 1000

Όπου Κ είναι η ποσότητα πρωτεΐνης στα καθημερινά ούρα (g). x είναι η ποσότητα πρωτεΐνης σε 1 λίτρο ούρων (g). V είναι η ποσότητα των ούρων που απεκκρίνονται ανά ημέρα (ml).

Φυσιολογικά, από 27 έως 150 mg (μέσος όρος 40-80 mg) πρωτεΐνης απεκκρίνονται στα ούρα κατά τη διάρκεια της ημέρας.

Αυτή η δοκιμή σας επιτρέπει να προσδιορίσετε στα ούρα μόνο λεπτές πρωτεΐνες (λευκωματίνη). Οι πιο ακριβείς ποσοτικές μέθοδοι (χρωματομετρική μέθοδος Kjeldahl κ.λπ.) είναι αρκετά περίπλοκες και απαιτούν ειδικό εξοπλισμό.

Με τη νεφρική πρωτεϊνουρία, όχι μόνο οι λευκωματίνες, αλλά και άλλοι τύποι πρωτεΐνης απεκκρίνονται στα ούρα. Ένα φυσιολογικό πρωτεϊνόγραμμα (σύμφωνα με τους Seitz et al., 1953) έχει το ακόλουθο ποσοστό: αλβουμίνη - 20%, α 1 - σφαιρίνες - 12%, α 2 - σφαιρίνες - 17%, γ-σφαιρίνες - 43% και β-σφαιρίνες - 8% . Η αναλογία λευκωματινών προς σφαιρίνες αλλάζει με διάφορες ασθένειεςνεφροί, δηλ. η ποσοτική αναλογία μεταξύ των πρωτεϊνικών κλασμάτων έχει σπάσει.

Οι πιο συνηθισμένες μέθοδοι κλασματοποίησης ουροπρωτεϊνών είναι οι ακόλουθες: αλάτισμα με ουδέτερα άλατα, ηλεκτροφορητική κλασμάτωση, ανοσολογικές μέθοδοι (αντίδραση ακτινικής ανοσοδιάχυσης σύμφωνα με τον Mancini, ανοσοηλεκτροφορητική ανάλυση, ανοσοηλεκτροφόρηση καταβύθισης), χρωματογραφία, διήθηση γέλης και υπερφυγοκέντρηση.

Σε σχέση με την εισαγωγή των μεθόδων κλασμάτωσης της ουροπρωτεΐνης που βασίζονται στη μελέτη της ηλεκτροφορητικής κινητικότητας, της μεταβλητότητας του μοριακού βάρους, του μεγέθους και του σχήματος των μορίων της ουροπρωτεΐνης, κατέστη δυνατό να απομονωθούν οι τύποι πρωτεϊνουρίας που είναι χαρακτηριστικοί μιας συγκεκριμένης ασθένειας, να μελετηθούν οι κάθαρες του μεμονωμένου πλάσματος. πρωτεΐνες. Μέχρι σήμερα, έχουν εντοπιστεί περισσότερες από 40 πρωτεΐνες πλάσματος στα ούρα, συμπεριλαμβανομένων 31 πρωτεϊνών πλάσματος στα φυσιολογικά ούρα.

Εκλεκτική πρωτεϊνουρία

Τα τελευταία χρόνια έχει εμφανιστεί η έννοια της επιλεκτικότητας πρωτεϊνουρίας. Το 1955, οι Hardwicke και Squire διατύπωσαν την έννοια της «εκλεκτικής» και της «μη εκλεκτικής» πρωτεϊνουρίας, έχοντας καθορίσει ότι η διήθηση των πρωτεϊνών του πλάσματος στα ούρα ακολουθεί ένα συγκεκριμένο μοτίβο: όσο μεγαλύτερο είναι το μοριακό βάρος της πρωτεΐνης που απεκκρίνεται στα ούρα. τόσο μικρότερη είναι η κάθαρσή του και τόσο μικρότερη η συγκέντρωσή του στα ούρα.τελικά ούρα. Η πρωτεϊνουρία, που αντιστοιχεί σε αυτό το μοτίβο, είναι επιλεκτική, σε αντίθεση με τη μη επιλεκτική, για την οποία είναι χαρακτηριστική η παραμόρφωση του παραγόμενου σχεδίου.

Η ανίχνευση πρωτεϊνών με σχετικά μεγάλο μοριακό βάρος στα ούρα υποδηλώνει την απουσία επιλεκτικότητας του νεφρικού φίλτρου και την έντονη βλάβη του. Σε αυτές τις περιπτώσεις, μιλάμε για χαμηλή εκλεκτικότητα πρωτεϊνουρίας. Ως εκ τούτου, επί του παρόντος, ο προσδιορισμός των πρωτεϊνικών κλασμάτων των ούρων με τη χρήση των μεθόδων ηλεκτροφόρησης σε πηκτώματα αμύλου και πολυακρυλαμιδίου έχει γίνει ευρέως διαδεδομένος. Με βάση τα αποτελέσματα αυτών των ερευνητικών μεθόδων, μπορεί κανείς να κρίνει την επιλεκτικότητα της πρωτεϊνουρίας.

Σύμφωνα με τον VS Makhlina (1975), ο πιο δικαιολογημένος είναι ο προσδιορισμός της εκλεκτικότητας της πρωτεϊνουρίας συγκρίνοντας τις κάθαρες 6-7 μεμονωμένων πρωτεϊνών πλάσματος αίματος (λευκωματίνη, τρανεφερίνη, α2 - μακροσφαιρίνη, IgA, IgG, IgM) χρησιμοποιώντας ακριβείς και ειδικές ποσοτικές ανοσολογικές μέθοδοι αντίδρασης ακτινικής ανοσοδιάχυσης σύμφωνα με τον Mancini, ανοσοηλεκτροφορητική ανάλυση και ανοσοηλεκτροφόρηση καθίζησης. Ο βαθμός επιλεκτικότητας πρωτεϊνουρίας καθορίζεται από τον δείκτη επιλεκτικότητας, ο οποίος είναι η αναλογία των συγκρινόμενων και των πρωτεϊνών αναφοράς (λευκωματίνη).

Η μελέτη των διαυγών μεμονωμένων πρωτεϊνών του πλάσματος επιτρέπει τη λήψη αξιόπιστων πληροφοριών σχετικά με την κατάσταση των βασικών μεμβρανών διήθησης των σπειραμάτων του νεφρού. Η σχέση μεταξύ της φύσης των πρωτεϊνών που απεκκρίνονται στα ούρα και των αλλαγών στις βασικές μεμβράνες των σπειραμάτων είναι τόσο έντονη και σταθερή που το ουροπρωτεϊνόγραμμα μπορεί έμμεσα να κρίνει παθοφυσιολογικές αλλαγές στα σπειράματα των νεφρών. Πρόστιμο το μέσο μέγεθοςοι πόροι της σπειραματικής βασικής μεμβράνης είναι 2,9-4 A ° NM, το οποίο μπορεί να περάσει πρωτεΐνες με μοριακό βάρος έως και 10 4 (μυοσφαιρίνη, οξύ α 1 - γλυκοπρωτεΐνη, ελαφριές αλυσίδες ανοσοσφαιρίνης, θραύσματα Fc και Fab - IgG, λευκωματίνη και τρανσφερίνη).

Με σπειραματονεφρίτιδα, νεφρωσικό σύνδρομο, τα μεγέθη των πόρων στις βασικές μεμβράνες των σπειραμάτων αυξάνονται και επομένως η βασική μεμβράνη γίνεται διαπερατή από μόρια πρωτεΐνης μεγάλου μεγέθους και μάζας (σερουλοπλασμίνη, απτοσφαιρίνη, IgG, IgA κ.λπ.). Με ακραίο βαθμό βλάβης στα σπειράματα των νεφρών, εμφανίζονται στα ούρα γιγάντια μόρια πρωτεϊνών του πλάσματος του αίματος (α2-μακροσφαιρίνη, IgM και β2-λιποπρωτεΐνη).

Καθορίζοντας το πρωτεϊνικό φάσμα των ούρων, μπορεί κανείς να συμπεράνει ότι ορισμένα μέρη του νεφρώνα επηρεάζονται κατά κύριο λόγο. Για τη σπειραματονεφρίτιδα με κυρίαρχη βλάβη των βασικών μεμβρανών των σπειραμάτων, είναι χαρακτηριστική η παρουσία πρωτεϊνών μεγάλου και μεσαίου μοριακού βάρους στα ούρα. Για την πυελονεφρίτιδα με κυρίαρχη βλάβη των βασικών μεμβρανών των σωληναρίων είναι χαρακτηριστική η απουσία μεγάλων μοριακών πρωτεϊνών και η παρουσία αυξημένων ποσοτήτων πρωτεϊνών μεσαίου και χαμηλού μοριακού βάρους.

β 2 -Μικροσφαιρίνη

Εκτός από γνωστές πρωτεΐνες όπως η αλβουμίνη, οι ανοσοσφαιρίνες, οι λιποπρωτεΐνες. ινωδογόνο, τρανσφερρίνη, ούρα περιέχουν μικροπρωτεΐνες πλάσματος, μεταξύ των οποίων η β2-μικροσφαιρίνη, που ανακαλύφθηκε από τους Berggard και Bearn το 1968, παρουσιάζει κλινικό ενδιαφέρον.Έχοντας χαμηλό μοριακό βάρος (σχετικό μοριακό βάρος 1800), διέρχεται ελεύθερα από τα σπειράματα των νεφρών και επαναρροφάται στα εγγύς σωληνάρια. Αυτό επιτρέπει τον ποσοτικό προσδιορισμό της β2-μικροσφαιρίνης στο αίμα και τα ούρα για τον προσδιορισμό της σπειραματικής διήθησης και της ικανότητας των νεφρών να απορροφούν πρωτεΐνες στα εγγύς σωληνάρια.

Η συγκέντρωση αυτής της πρωτεΐνης στο πλάσμα του αίματος και στα ούρα προσδιορίζεται με ραδιοανοσοπροσδιορισμό χρησιμοποιώντας ένα τυπικό κιτ "Phade-bas β 2-mikroiest" (Pharmacia, Σουηδία). Ο ορός αίματος υγιών ατόμων περιέχει κατά μέσο όρο 1,7 mg / l (εύρος από 0,6 έως 3 mg / l), στα ούρα - κατά μέσο όρο 81 μg / l (μέγιστο 250 μg / l) β 2 -μικροσφαιρίνη. Η περίσσευσή του στα ούρα πάνω από 1000 mcg/l είναι παθολογικό φαινόμενο. Η περιεκτικότητα της β2-μικροσφαιρίνης στο αίμα αυξάνεται σε ασθένειες που συνοδεύονται από διαταραχή της σπειραματικής διήθησης, ιδιαίτερα σε οξεία και χρόνια σπειραματονεφρίτιδα, πολυκυστική νεφρική νόσο, νεφροσκλήρωση, διαβητική νεφροπάθεια, οξεία νεφρική ανεπάρκεια.

Η συγκέντρωση της β2-μικροσφαιρίνης στα ούρα αυξάνεται με ασθένειες που συνοδεύονται από παραβίαση της λειτουργίας επαναρρόφησης των σωληναρίων, γεγονός που οδηγεί σε αύξηση της απέκκρισής της στα ούρα κατά 10-50 φορές, ιδίως με πυελονεφρίτιδα, χρόνια νεφρική ανεπάρκεια, πυώδης δηλητηρίαση κ.λπ. Είναι χαρακτηριστικό ότι με κυστίτιδα σε αντίθεση με την πυελονεφρίτιδα, δεν υπάρχει αύξηση της συγκέντρωσης της β2-μικροσφαιρίνης στα ούρα, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διαφορική διάγνωση αυτών των παθήσεων. Ωστόσο, κατά την ερμηνεία των αποτελεσμάτων της μελέτης, θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη ότι οποιαδήποτε αύξηση της θερμοκρασίας συνοδεύεται πάντα από αύξηση της απέκκρισης της β2-μικροσφαιρίνης στα ούρα.

Μέσος όρος μορίων αίματος και ούρων

Τα μεσαία μόρια (SM), που αλλιώς ονομάζονται πρωτεϊνικές τοξίνες, είναι ουσίες με μοριακό βάρος 500-5000 daltons. φυσική δομήείναι άγνωστοι. Η σύνθεση του SM περιλαμβάνει τουλάχιστον 30 πεπτίδια: ωκυτοκίνη, αγγειοπιεσίνη, αγγειοτενσίνη, γλυκαγόνη, αδρενοκορτικοτροπική ορμόνη (ACTH) κ.λπ. Παρατηρείται υπερβολική συσσώρευση SM με μείωση της νεφρικής λειτουργίας και μεγάλη ποσότητα παραμορφωμένων πρωτεϊνών και των μεταβολιτών τους στο αίμα. Έχουν μια ποικιλία βιολογικών επιδράσεων και είναι νευροτοξικά, προκαλούν δευτερογενή ανοσοκαταστολή, δευτερογενή αναιμία, αναστέλλουν τη βιοσύνθεση και την ερυθροποίηση πρωτεϊνών, αναστέλλουν τη δραστηριότητα πολλών ενζύμων και διαταράσσουν τις φάσεις της φλεγμονώδους διαδικασίας.

Το επίπεδο του SM στο αίμα και τα ούρα προσδιορίζεται με τεστ διαλογής, καθώς και με φασματοφωτομετρία στην υπεριώδη ζώνη σε μήκος κύματος 254 και 280 mm σε φασματοφωτόμετρο DI-8B, καθώς και με δυναμική φασματοφωτομετρία με επεξεργασία υπολογιστή στο μήκος κύματος εύρος 220-335 nm στο ίδιο φασματόμετρο Beckman. Η περιεκτικότητα του SM στο αίμα λαμβάνεται ως κανόνας, ίση με 0,24 ± 0,02 arb. μονάδες, και στα ούρα - 0,312 ± 0,09 arb. μονάδες
Όντας φυσιολογικά απόβλητα του σώματος, αφαιρούνται κανονικά από αυτό τη νύχτα με σπειραματική διήθηση κατά 0,5%. Το 5% από αυτά απορρίπτονται με άλλο τρόπο. Όλα τα κλάσματα SM υφίστανται σωληναριακή επαναρρόφηση.

Ουροπρωτεΐνες μη πλάσματος (ιστών).

Εκτός από τις πρωτεΐνες του πλάσματος του αίματος, μπορεί να υπάρχουν πρωτεΐνες μη πλάσματος (ιστών) στα ούρα. Σύμφωνα με τους Buxbaum και Franklin (1970), οι πρωτεΐνες εκτός πλάσματος αντιπροσωπεύουν περίπου τα 2/3 όλων των βιοκολλοειδών των ούρων και ένα σημαντικό ποσοστό ουροπρωτεϊνών στην παθολογική πρωτεϊνουρία. Οι πρωτεΐνες των ιστών εισέρχονται στα ούρα απευθείας από τα νεφρά ή όργανα που σχετίζονται ανατομικά με το ουροποιητικό σύστημα ή εισέρχονται στο αίμα από άλλα όργανα και ιστούς και από αυτό μέσω των βασικών μεμβρανών των σπειραμάτων του νεφρού στα ούρα. Στην τελευταία περίπτωση, η απέκκριση των πρωτεϊνών των ιστών στα ούρα συμβαίνει παρόμοια με την απέκκριση των πρωτεϊνών του πλάσματος διαφόρων μοριακών βαρών. Η σύνθεση των ουροπρωτεϊνών εκτός πλάσματος είναι εξαιρετικά ποικίλη. Μεταξύ αυτών είναι γλυκοπρωτεΐνες, ορμόνες, αντιγόνα, ένζυμα (ένζυμα).

Οι ιστικές πρωτεΐνες στα ούρα ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας συμβατικές μεθόδους χημείας πρωτεϊνών (υπερφυγοκέντρηση, χρωματογραφία γέλης, διάφοροι τύποι ηλεκτροφόρησης), ειδικές αντιδράσεις σε ένζυμα και ορμόνες και ανοσολογικές μεθόδους. Τα τελευταία καθιστούν επίσης δυνατό τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης της ουροπρωτεΐνης εκτός πλάσματος στα ούρα και, σε ορισμένες περιπτώσεις, τον προσδιορισμό των δομών των ιστών που έχουν γίνει η πηγή της εμφάνισής της. Η κύρια μέθοδος για την ανίχνευση μη πρωτεΐνης πλάσματος στα ούρα είναι η ανάλυση ανοσοδιάχυσης με αντιορό που λαμβάνεται με ανοσοποίηση πειραματόζωων με ανθρώπινα ούρα και στη συνέχεια εξαντλείται (προσροφάται) από πρωτεΐνες πλάσματος αίματος.

Εξέταση ενζύμων στο αίμα και στα ούρα

Στην παθολογική διαδικασία, παρατηρούνται βαθιές διαταραχές στη ζωτική δραστηριότητα των κυττάρων, που συνοδεύονται από απελευθέρωση ενδοκυτταρικών ενζύμων στα υγρά μέσα του σώματος. Η ενζυμοδιαγνωστική βασίζεται στον προσδιορισμό ενός αριθμού ενζύμων που απελευθερώνονται από τα κύτταρα των προσβεβλημένων οργάνων και δεν είναι χαρακτηριστικά του ορού του αίματος.
Μελέτες στον ανθρώπινο και ζωικό νεφρώνα έχουν δείξει ότι στα επιμέρους μέρη του υπάρχει υψηλή ενζυματική διαφοροποίηση, στενά συνδεδεμένη με τις λειτουργίες που επιτελεί κάθε τμήμα. Τα σπειράματα του νεφρού περιέχουν σχετικά ένας μεγάλος αριθμός απόδιάφορα ένζυμα.

Τα κύτταρα των νεφρικών σωληναρίων, ιδιαίτερα των εγγύς, περιέχουν μέγιστο ποσόένζυμα. Η υψηλή δραστηριότητά τους παρατηρείται στον βρόχο του Henle, στους άμεσους σωληνίσκους και στους αγωγούς συλλογής. Οι αλλαγές στη δραστηριότητα των μεμονωμένων ενζύμων σε διάφορες νεφρικές παθήσεις εξαρτώνται από τη φύση, τη σοβαρότητα και τον εντοπισμό της διαδικασίας. Παρατηρούνται πριν την εμφάνιση μορφολογικών αλλαγών στα νεφρά. Δεδομένου ότι η περιεκτικότητα σε διάφορα ένζυμα εντοπίζεται σαφώς στον νεφρώνα, ο προσδιορισμός ενός ή άλλου ενζύμου στα ούρα μπορεί να συμβάλει στην τοπική διάγνωση. παθολογική διαδικασίαστους νεφρούς (σπειράματα, σωληνάρια, φλοιώδης ή μυελός), διαφορική διάγνωση νεφρικών παθήσεων και προσδιορισμός της δυναμικής (εξασθένιση και έξαρση) της διαδικασίας στο νεφρικό παρέγχυμα.

Για τη διαφορική διάγνωση ασθενειών του ουρογεννητικού συστήματος, χρησιμοποιείται ο προσδιορισμός της δραστηριότητας στο αίμα και τα ούρα των ακόλουθων ενζύμων: γαλακτική αφυδρογονάση (LDH), αμινοπεπτιδάση λευκίνης (LAP), όξινη φωσφατάση (AP), αλκαλική φωσφατάση (AP) , β-γλυκουρονιδάση, γλουταμινο-οξαλοξική τρανσαμινάση (GST), αλδολάση, τρανσαμιδινάση, κ.λπ. Η δραστικότητα των ενζύμων στον ορό του αίματος και στα ούρα προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας βιοχημικές, φασματοφωτομετρικές, χρωματογραφικές, φθοριομετρικές και χημειοφωτεινές μεθόδους.

Η ενζυμουρία στη νεφρική νόσο είναι πιο έντονη και τακτική από την ενζυμαιμία. Είναι ιδιαίτερα έντονο στο οξύ στάδιο της νόσου ( οξεία πυελονεφρίτιδα, τραύμα, αποσύνθεση όγκου, νεφρικό έμφραγμα κ.λπ.). Σε αυτές τις ασθένειες, ανευρίσκεται υψηλή δραστικότητα τρανσαμιδινάσης, LDH, αλκαλικής φωσφατάσης και CP, υαλουρονιδάσης, LAP, καθώς και τέτοιων μη ειδικών ενζύμων όπως η GST, καταλάση [Polyantseva LR, 1972].

Ο εκλεκτικός εντοπισμός ενζύμων στον νεφρώνα με την ανίχνευση LAP και ALP στα ούρα μας επιτρέπει να μιλάμε με σιγουριά για οξεία και χρόνιες ασθένειεςνεφρό (οξεία νεφρική ανεπάρκειανεφρική σωληναριακή νέκρωση, χρόνια σπειραματονεφρίτιδα) [Shemetov V.D., 1968]. Σύμφωνα με τους A.A. Karelin και L.R. Polyantseva (1965), η τρανσαμιδινάση βρίσκεται μόνο σε δύο όργανα - το νεφρό και το πάγκρεας. Είναι ένα μιτοχονδριακό ένζυμο των νεφρών και φυσιολογικά απουσιάζει στο αίμα και στα ούρα. Με διάφορες ασθένειες των νεφρών, η τρανσαμιδινάση εμφανίζεται στο αίμα και τα ούρα και με βλάβη στο πάγκρεας - μόνο στο αίμα.

Η διαφορική δοκιμή στη διάγνωση της σπειραματονεφρίτιδας και της πυελονεφρίτιδας Krotkiewski (1963) εξετάζει τη δραστηριότητα της αλκαλικής φωσφατάσης στα ούρα, η αύξηση της οποίας είναι πιο χαρακτηριστική για την πυελονεφρίτιδα και τη διαβητική σπειραματοσκλήρωση παρά για την οξεία και χρόνια νεφρίτιδα. Η αύξηση της δυναμικής της αμυλαζαιμίας με ταυτόχρονη μείωση της αμυλασουρίας μπορεί να υποδηλώνει νεφροσκλήρωση και ρυτίδες του νεφρού, το LAP είναι πιο σημαντικό σε παθολογικές αλλαγέςστα σπειράματα και στα σπειροειδή σωληνάρια του νεφρού, αφού η περιεκτικότητά του σε αυτά τα μέρη του νεφρώνα είναι μεγαλύτερη [Shepotinovsky V.P. et al., 1980]. Για τη διάγνωση της νεφρίτιδας του λύκου συνιστάται ο προσδιορισμός της β-γλυκουρονιδάσης και της ΚΙ [Privalenko M.N. et al., 1974].

Κατά την αξιολόγηση του ρόλου της ενζυμουρίας στη διάγνωση της νεφρικής νόσου, θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη οι ακόλουθες διατάξεις. Τα ένζυμα, όντας από τη φύση τους πρωτεΐνες, με μικρό μοριακό βάρος μπορούν να περάσουν από άθικτα σπειράματα, προσδιορίζοντας το λεγόμενο φυσιολογικό ένζυμο. Μεταξύ αυτών των ενζύμων, η α-αμυλάση (σχετικό μοριακό βάρος 45.000) και η ουροψίνη (σχετικό μοριακό βάρος 38.000) ανιχνεύονται συνεχώς στα ούρα.

Μαζί με ένζυμα χαμηλού μοριακού όγκου στα ούρα υγιών ατόμων, άλλα ένζυμα μπορούν επίσης να βρεθούν σε μικρές συγκεντρώσεις: LDH, αμινοτρανσφεράσες ασπαρτικού και αλανίνης, αλκαλική φωσφατάση και CP, μαλτάση, αλδολάση, λιπάση, διάφορες πρωτεάσες και πεπτιδάσες, σουλφατάση, καταλάση, ριβονουκλεάση, υπεροξειδάση.

Υψηλά μοριακά ένζυμα με σχετικό μοριακό βάρος μεγαλύτερο από 70.000-100.000, σύμφωνα με τους Richterich (1958) και Hess (1962), μπορούν να διεισδύσουν στα ούρα μόνο εάν η διαπερατότητα του σπειραματικού φίλτρου είναι μειωμένη. Η φυσιολογική περιεκτικότητα σε ένζυμα στα ούρα δεν επιτρέπει τον αποκλεισμό της παθολογικής διαδικασίας στο νεφρό με απόφραξη του ουρητήρα. Με την επιμουρία, τα ένζυμα μπορούν να απελευθερωθούν όχι μόνο από τους ίδιους τους νεφρούς, αλλά και από άλλα παρεγχυματικά όργανα, κύτταρα των βλεννογόνων του ουροποιητικού συστήματος, τον προστάτη αδένα, καθώς και σχηματισμένα στοιχεία ούρων με αιματουρία ή λευκοκυτταρουρία.

Τα περισσότερα ένζυμα δεν είναι ειδικά για το νεφρό, επομένως είναι δύσκολο να προσδιοριστεί από πού προέρχονται τα ένζυμα που βρίσκονται στα ούρα υγιών και ασθενών. Ωστόσο, ο βαθμός ενζυμουρίας, ακόμη και για μη ειδικά ένζυμα σε νεφρική βλάβη, είναι υψηλότερος από τον κανονικό ή από αυτόν που παρατηρείται σε παθήσεις άλλων οργάνων. Πιο πολύτιμες πληροφορίες μπορούν να παρασχεθούν από μια ολοκληρωμένη μελέτη της δυναμικής ενός αριθμού ενζύμων, ιδιαίτερα συγκεκριμένων για τα όργανα, όπως η τρανσαμινάση.

Για την επίλυση του ζητήματος της νεφρικής προέλευσης του ενζύμου στα ούρα, η μελέτη των ισοενζύμων βοηθά στον εντοπισμό των τυπικών κλασμάτων του υπό μελέτη οργάνου. Τα ισοένζυμα είναι ένζυμα που έχουν ισογονική δράση (καταλύουν την ίδια αντίδραση), αλλά ετερογενή ως προς τη χημική δομή και άλλες ιδιότητες. Κάθε ιστός έχει το δικό του φάσμα ισοενζύμων. Πολύτιμες μέθοδοι για τον διαχωρισμό των ισοενζύμων είναι η ηλεκτροφόρηση σε πηκτώματα αμύλου και πολυακρυλαμιδίου, καθώς και η ιοντοανταλλακτική χρωματογραφία.

Πρωτεΐνη Bence Jones

Με πολλαπλό μυέλωμα και μακροσφαιριναιμία Waldenström, η πρωτεΐνη Bence-Jones βρίσκεται στα ούρα. Η μέθοδος για την ανίχνευση αυτής της πρωτεΐνης στα ούρα βασίζεται στην αντίδραση θερμοκατακρήμνισης. Οι προηγουμένως χρησιμοποιούμενες μέθοδοι που αξιολογούν τη διάλυση αυτής της πρωτεΐνης σε θερμοκρασία 100 ° C και την εκ νέου καθίζηση κατά την επακόλουθη ψύξη είναι αναξιόπιστες, καθώς δεν έχουν όλα τα πρωτεϊνικά σώματα Bence-Jones τις κατάλληλες ιδιότητες.

Πιο αξιόπιστη ανίχνευση αυτής της παραπρωτεΐνης με την καθίζηση της σε θερμοκρασία 40-60 °C. Ωστόσο, ακόμη και κάτω από αυτές τις συνθήκες, η καθίζηση μπορεί να μην συμβεί σε πολύ όξινο (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) ούρα, με χαμηλή OPM και χαμηλή συγκέντρωση πρωτεΐνης Bence-Jones. Οι πιο ευνοϊκές συνθήκες για την καθίζησή του παρέχονται με τη μέθοδο που προτείνει η Patnem: 4 ml διηθημένων ούρων αναμειγνύονται με 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος οξικών 2 Μ pH 4,9 και θερμαίνονται για 15 λεπτά σε λουτρό νερού σε θερμοκρασία 56 °C. Παρουσία της πρωτεΐνης Bence-Jones, εμφανίζεται ένα έντονο ίζημα κατά τα πρώτα 2 λεπτά.

Σε συγκέντρωση πρωτεΐνης Bence-Jones μικρότερη από 3 g / l, η δοκιμή μπορεί να είναι αρνητική, αλλά στην πράξη αυτό είναι εξαιρετικά σπάνιο, καθώς η συγκέντρωσή της στα ούρα είναι συνήθως πιο σημαντική. Τα δείγματα βρασμού δεν μπορούν να βασιστούν πλήρως. Με απόλυτη βεβαιότητα, μπορεί να ανιχνευθεί στα ούρα με την ανοσο-ηλεκτροφορητική μέθοδο με τη χρήση ειδικών ορών κατά των βαριών και ελαφρών αλυσίδων ανοσοσφαιρινών.

Πρωτεΐνη στα ούρα: μέθοδοι προσδιορισμού

Παθολογική πρωτεϊνουρία είναι ένα από τα πιο σημαντικά και σταθερά σημάδια παθήσεων των νεφρών και του ουροποιητικού συστήματος. Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα είναι υποχρεωτικό και σημαντικό στοιχείο της μελέτης των ούρων. Η ανίχνευση και ο ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεϊνουρίας είναι σημαντική όχι μόνο στη διάγνωση πολλών πρωτοπαθών και δευτερογενών νεφρικών παθήσεων, αλλά η αξιολόγηση των αλλαγών στη βαρύτητα της πρωτεϊνουρίας στη δυναμική μεταφέρει πληροφορίες για την πορεία της παθολογικής διαδικασίας και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας. Η ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα, ακόμη και σε ίχνη, θα πρέπει να είναι ανησυχητική σε σχέση με πιθανή ασθένειατου νεφρού ή του ουροποιητικού συστήματος και χρειάζεται επανάληψη. Ιδιαίτερα αξιοσημείωτο είναι το παράλογο της μελέτης των ούρων και, ειδικότερα, ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης των ούρων χωρίς να τηρούνται όλα τα κανόνες συλλογής.

Όλες οι μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα μπορούν να χωριστούν σε:

    ποιότητα,

    ημιποσοτική,

    Ποσοτικός.

Ποιοτικές Μέθοδοι

Τα παντα ποιοτικές δοκιμές για πρωτεΐνη στα ούρα με βάση την ικανότητα των πρωτεϊνών να μετουσιώνονται υπό την επίδραση διαφόρων φυσικών και χημικών παραγόντων. Με την παρουσία πρωτεΐνης στο δείγμα ούρων της δοκιμής, εμφανίζεται είτε θολότητα είτε κροκίδωση.

Συνθήκες για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα με βάση την αντίδραση πήξης:

    Τα ούρα πρέπει να είναι όξινα. Τα αλκαλικά ούρα οξινίζονται με λίγες (2 - 3) σταγόνες οξικού οξέος (5 - 10%).

    Τα ούρα πρέπει να είναι διαυγή. Η θολότητα αφαιρείται μέσω ενός χάρτινου φίλτρου. Εάν η ομίχλη επιμένει, προσθέστε ταλκ ή καμένη μαγνησία (περίπου 1 κουταλάκι του γλυκού ανά 100 ml ούρων), ανακινήστε και φιλτράρετε.

    Ένα ποιοτικό δείγμα πρέπει να πραγματοποιείται σε δύο δοκιμαστικούς σωλήνες, ένας από τους οποίους είναι ένας μάρτυρας.

    Ψάξτε για θολότητα πρέπει να είναι σε μαύρο φόντο στο εκπεμπόμενο φως.

Οι ποιοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα περιλαμβάνουν:

    Δοκιμή δακτυλίου Heller,

    δείγμα με 15 - 20% σουλφοσαλικυλικό οξύ,

    δοκιμή βρασμού, και άλλα.

Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι καμία από τις πολλές γνωστές μεθόδους για τον ποιοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα δεν παρέχει αξιόπιστα και αναπαραγώγιμα αποτελέσματα. Παρόλα αυτά, στα περισσότερα DLT στη Ρωσία, αυτές οι μέθοδοι χρησιμοποιούνται ευρέως ως διαλογή - στα ούρα με θετική ποιοτική αντίδραση, πραγματοποιείται περαιτέρω ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης. Από τις ποιοτικές αντιδράσεις, η δοκιμή Geller και η δοκιμή σουλφοσαλικυλικού οξέος χρησιμοποιούνται συχνότερα, αλλά η δοκιμή σουλφοσαλικυλικού οξέος θεωρείται γενικά η καταλληλότερη για την ανίχνευση παθολογικής πρωτεϊνουρίας. Η δοκιμή βρασμού επί του παρόντος δεν χρησιμοποιείται πρακτικά λόγω της πολυπλοκότητας και της διάρκειάς της.

Ημιποσοτικές μέθοδοι

ΠΡΟΣ ΤΟ ημιποσοτικές μέθοδοι σχετίζομαι:

    Μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov,

    προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα με τη χρήση διαγνωστικών δοκιμαστικών ταινιών.

Η μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov βασίζεται στη δοκιμή δακτυλίου Geller, επομένως, με αυτήν τη μέθοδο, παρατηρούνται τα ίδια σφάλματα όπως και με τη δοκιμή Geller.

Επί του παρόντος, οι διαγνωστικές ταινίες χρησιμοποιούνται όλο και περισσότερο για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα. Η βαφή μπλε βρωμοφαινόλης σε κιτρικό ρυθμιστικό χρησιμοποιείται συχνότερα ως δείκτης για τον ημιποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα σε μια ταινία. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα ούρα κρίνεται από την ένταση του μπλε-πράσινου χρώματος που αναπτύσσεται μετά την επαφή της ζώνης αντίδρασης με τα ούρα. Το αποτέλεσμα αξιολογείται οπτικά ή χρησιμοποιώντας αναλυτές ούρων. Παρά τη μεγάλη δημοτικότητα και τα προφανή πλεονεκτήματα των μεθόδων ξηρής χημείας (απλότητα, ταχύτητα ανάλυσης), αυτές οι μέθοδοι ανάλυσης ούρων γενικά και προσδιορισμού πρωτεϊνών ειδικότερα δεν είναι χωρίς σοβαρές ελλείψεις. Ένα από αυτά, που οδηγεί σε παραμόρφωση των διαγνωστικών πληροφοριών, είναι η μεγαλύτερη ευαισθησία του δείκτη του μπλε της βρωμοφαινόλης στη λευκωματίνη σε σύγκριση με άλλες πρωτεΐνες. Από αυτή την άποψη, οι δοκιμαστικές ταινίες προσαρμόζονται κυρίως στην ανίχνευση εκλεκτικής σπειραματικής πρωτεϊνουρίας, όταν σχεδόν όλη η πρωτεΐνη των ούρων αντιπροσωπεύεται από λευκωματίνη. Με την εξέλιξη των αλλαγών και τη μετάβαση της εκλεκτικής σπειραματικής πρωτεϊνουρίας σε μη εκλεκτική (εμφάνιση σφαιρινών στα ούρα), τα αποτελέσματα του προσδιορισμού της πρωτεΐνης υποτιμώνται σε σύγκριση με τις πραγματικές τιμές. Αυτό το γεγονός καθιστά αδύνατη τη χρήση αυτής της μεθόδου για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα για την αξιολόγηση της κατάστασης των νεφρών (σπειραματικό φίλτρο) σε δυναμική. Με τη σωληναριακή πρωτεϊνουρία, τα αποτελέσματα του προσδιορισμού της πρωτεΐνης υποτιμώνται επίσης. Ο έλεγχος πρωτεΐνης με ράβδους μέτρησης δεν είναι αξιόπιστος δείκτης χαμηλών επιπέδων πρωτεϊνουρίας (τα περισσότερα ραβδιά μέτρησης μέτρησης που διατίθενται σήμερα δεν είναι ικανά να ανιχνεύσουν πρωτεΐνη στα ούρα σε συγκεντρώσεις χαμηλότερες από 0,15 g/l). Τα αρνητικά αποτελέσματα του προσδιορισμού της πρωτεΐνης στις ταινίες δεν αποκλείουν την παρουσία σφαιρινών, αιμοσφαιρίνης, ουρομυκοειδούς, πρωτεΐνης Bence-Jones και άλλων παραπρωτεϊνών στα ούρα.

Οι νιφάδες βλέννας με υψηλή περιεκτικότητα σε γλυκοπρωτεΐνες (για παράδειγμα, σε φλεγμονώδεις διεργασίες στο ουροποιητικό σύστημα, πυουρία, βακτηριουρία) μπορούν να εγκατασταθούν στη ζώνη δείκτη της λωρίδας και να οδηγήσουν σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα μπορεί επίσης να σχετίζονται με υψηλές συγκεντρώσεις ουρία. Ο κακός φωτισμός και η κακή αντίληψη των χρωμάτων μπορεί να προκαλέσουν ανακριβή αποτελέσματα.

Από αυτή την άποψη, η χρήση διαγνωστικών ταινιών θα πρέπει να περιορίζεται σε διαδικασίες προσυμπτωματικού ελέγχου και τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με τη βοήθειά τους θα πρέπει να θεωρούνται μόνο ως ενδεικτικά.

Ποσοτικές Μέθοδοι

Σωστός ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα σε ορισμένες περιπτώσεις αποδεικνύεται δύσκολο έργο. Οι δυσκολίες της επίλυσής του καθορίζονται από τον ακόλουθο αριθμό παραγόντων:

    η παρουσία στα ούρα πολλών ενώσεων που μπορούν να επηρεάσουν την πορεία των χημικών αντιδράσεων.

    σημαντικές διακυμάνσεις στην περιεκτικότητα και τη σύνθεση πρωτεϊνών ούρων σε διάφορες ασθένειες, καθιστώντας δύσκολη την επιλογή επαρκούς υλικού βαθμονόμησης.

Στα κλινικά εργαστήρια, χρησιμοποιούνται κυρίως οι λεγόμενες μέθοδοι «ρουτίνας» για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, αλλά δεν παρέχουν πάντα ικανοποιητικά αποτελέσματα.

Από την άποψη ενός αναλυτή που εργάζεται σε εργαστήριο, μια μέθοδος που έχει σχεδιαστεί για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα πρέπει να πληροί τις ακόλουθες απαιτήσεις:

    έχουν μια γραμμική σχέση μεταξύ της απορρόφησης του συμπλόκου που σχηματίζεται κατά τη χημική αντίδραση και της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη στο δείγμα σε ένα ευρύ φάσμα συγκεντρώσεων, γεγονός που θα επιτρέψει την αποφυγή πρόσθετων εργασιών κατά την προετοιμασία του δείγματος για έρευνα.

    θα πρέπει να είναι απλό, να μην απαιτεί υψηλά προσόντα του εκτελεστή, να εκτελείται με μικρό αριθμό λειτουργιών.

    έχουν υψηλή ευαισθησία, αναλυτική αξιοπιστία κατά τη χρήση μικρών όγκων του υλικού δοκιμής.

    να είναι ανθεκτικό σε διάφορους παράγοντες (διακυμάνσεις στη σύνθεση του δείγματος, παρουσία φαρμάκων κ.λπ.)

    έχουν ένα αποδεκτό κόστος?

    να προσαρμόζεται εύκολα σε αυτοαναλυτές.

    το αποτέλεσμα του προσδιορισμού δεν πρέπει να εξαρτάται από πρωτεϊνική σύνθεσηδοκιμή δείγματος ούρων.

Καμία από τις επί του παρόντος γνωστές μεθόδους για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα δεν μπορεί να ισχυριστεί πλήρως ότι είναι το «χρυσό πρότυπο».

Οι ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα μπορούν να χωριστούν σε θολωσιμετρικές και χρωματομετρικές.

Θολώδεις μέθοδοι

Οι θολωσιμετρικές μέθοδοι περιλαμβάνουν:

    προσδιορισμός πρωτεΐνης με σουλφοσαλικυλικό οξύ (SSK),

    προσδιορισμός της πρωτεΐνης τριχλωροξικό οξύ(Πέμ.),

    προσδιορισμός της πρωτεΐνης με χλωριούχο βενζαιθόνιο.

Οι θολωσιμετρικές μέθοδοι βασίζονται στη μείωση της διαλυτότητας των πρωτεϊνών των ούρων λόγω του σχηματισμού ενός εναιωρήματος αιωρούμενων σωματιδίων υπό την επίδραση παραγόντων καθίζησης. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στο δείγμα δοκιμής κρίνεται είτε από την ένταση της σκέδασης φωτός, που καθορίζεται από τον αριθμό των σωματιδίων σκέδασης φωτός (νεφελομετρική μέθοδος ανάλυσης), είτε από την εξασθένηση της φωτεινής ροής από το προκύπτον εναιώρημα (θολομετρική μέθοδος ανάλυσης ).

Η ποσότητα σκέδασης φωτός στις μεθόδους καθίζησης για την ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα εξαρτάται από πολλούς παράγοντες: τον ρυθμό ανάμιξης των αντιδραστηρίων, τη θερμοκρασία του μείγματος αντίδρασης, την τιμή pH του μέσου, την παρουσία ξένων ενώσεων, φωτομετρικές μεθόδους. Η προσεκτική παρατήρηση των συνθηκών αντίδρασης συμβάλλει στον σχηματισμό ενός σταθερού εναιωρήματος με σταθερό μέγεθος σωματιδίων και στην απόκτηση σχετικά αναπαραγώγιμων αποτελεσμάτων.

Ορισμένα φάρμακα παρεμβαίνουν στα αποτελέσματα των θολωσιμετρικών μεθόδων για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, οδηγώντας στα λεγόμενα «ψευδώς θετικά» ή «ψευδώς αρνητικά» αποτελέσματα. Αυτά περιλαμβάνουν ορισμένα αντιβιοτικά (βενζυλοπενικιλλίνη, κλοξακιλλίνη κ.λπ.), ακτινοσκιερές ουσίες που περιέχουν ιώδιο, παρασκευάσματα σουλφανιλαμίδης.

Οι θολωσιμετρικές μέθοδοι είναι δύσκολο να τυποποιηθούν και συχνά οδηγούν σε λανθασμένα αποτελέσματα, αλλά παρά το γεγονός αυτό, επί του παρόντος χρησιμοποιούνται ευρέως στα εργαστήρια λόγω του χαμηλού κόστους και της διαθεσιμότητας των αντιδραστηρίων. Η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος στη Ρωσία είναι ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης με σουλφοσαλικυλικό οξύ.

Χρωματομετρικές Μέθοδοι

Οι πιο ευαίσθητες και ακριβείς είναι οι χρωματομετρικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης των ούρων, με βάση συγκεκριμένες χρωματικές αντιδράσεις πρωτεϊνών.

Αυτά περιλαμβάνουν:

    αντίδραση διουρίας,

    μέθοδος lowry,

    μέθοδοι που βασίζονται στην ικανότητα διαφόρων χρωστικών να σχηματίζουν σύμπλοκα με πρωτεΐνες:

    Ponceau S (Ponceau S),

    Coomassie Brilliant Blue (Coomassie Brilliant Blue)

    κόκκινο πυρογαλλόλη (Pyrogalllol Red).

Από την πλευρά του ερμηνευτή, στην καθημερινή εργασία του εργαστηρίου με μεγάλη ροή ερευνών, η μέθοδος της διουρίας είναι άβολη λόγω του μεγάλου αριθμού επεμβάσεων. Ταυτόχρονα, η μέθοδος χαρακτηρίζεται από υψηλή αναλυτική αξιοπιστία, επιτρέπει τον προσδιορισμό πρωτεΐνης σε μεγάλο εύρος συγκεντρώσεων και την ανίχνευση αλβουμίνης, σφαιρινών και παραπρωτεϊνών με ανάλογη ευαισθησία, με αποτέλεσμα η μέθοδος διουρίας να θεωρείται ως αναφοράς και συνιστάται για σύγκριση άλλων αναλυτικών μεθόδων για την ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα. Η μέθοδος διουρίας για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα γίνεται κατά προτίμηση σε εργαστήρια που εξυπηρετούν νεφρολογικά τμήματα και χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου τα αποτελέσματα του προσδιορισμού με άλλες μεθόδους είναι αμφίβολα, καθώς και για τον προσδιορισμό της ημερήσιας απώλειας πρωτεΐνης σε νεφρολογικούς ασθενείς.

Η μέθοδος Lowry, η οποία έχει υψηλότερη ευαισθησία από τη μέθοδο διουρίας, συνδυάζει την αντίδραση διουρίας και την αντίδραση Folin για τα αμινοξέα τυροσίνη και τρυπτοφάνη στο μόριο της πρωτεΐνης. Παρά την υψηλή ευαισθησία της, αυτή η μέθοδος δεν παρέχει πάντα αξιόπιστα αποτελέσματα στον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη στα ούρα. Ο λόγος για αυτό είναι η μη ειδική αλληλεπίδραση του αντιδραστηρίου Folin με μη πρωτεϊνικά συστατικά των ούρων (συχνότερα αμινοξέα, ουρικό οξύ, υδατάνθρακες). Ο διαχωρισμός αυτών και άλλων συστατικών του ουροποιητικού με αιμοκάθαρση ή καθίζηση πρωτεΐνης επιτρέπει σε αυτή τη μέθοδο να χρησιμοποιηθεί με επιτυχία για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα. Ορισμένα φάρμακα - σαλικυλικά, χλωροπρομαζίνη, τετρακυκλίνες μπορούν να επηρεάσουν αυτή τη μέθοδο και να αλλοιώσουν τα αποτελέσματα της μελέτης.

Η επαρκής ευαισθησία, η καλή αναπαραγωγιμότητα και η ευκολία στον προσδιορισμό της πρωτεΐνης με δέσμευση βαφής καθιστούν αυτές τις μεθόδους υποσχόμενες, αλλά το υψηλό κόστος των αντιδραστηρίων εμποδίζει την ευρύτερη χρήση τους στα εργαστήρια. Προς το παρόν, η μέθοδος με κόκκινο πυρογαλλόλη γίνεται πιο διαδεδομένη στη Ρωσία.

Κατά την εξέταση του επιπέδου της πρωτεϊνουρίας, πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι διαφορετικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεϊνουρίας έχουν διαφορετική ευαισθησία και ειδικότητα για πολλές πρωτεΐνες ούρων.

Με βάση εμπειρικά δεδομένα, συνιστάται ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης με δύο διαφορετικές μεθόδους και ο υπολογισμός πραγματική αξίασύμφωνα με έναν από τους παραπάνω τύπους: πρωτεϊνουρία = 0,4799 B + 0,5230 L; πρωτεϊνουρία = 1,5484 B - 0,4825 S; πρωτεϊνουρία = 0,2167 S + 0,7579 L; πρωτεϊνουρία = 1,0748 P - 0,0986 B; πρωτεϊνουρία = 1,0104 P - 0,0289 S; πρωτεϊνουρία = 0,8959 P + 0,0845 L; όπου Β είναι το αποτέλεσμα μέτρησης με Coomassie G-250. Το L είναι το αποτέλεσμα της μέτρησης με το αντιδραστήριο Lowry. Το P είναι το αποτέλεσμα της μέτρησης με μολυβδαινική πυρογαλλόλη. Το S είναι το αποτέλεσμα της μέτρησης με σουλφοσαλικυλικό οξύ.

Λαμβάνοντας υπόψη τις έντονες διακυμάνσεις στο επίπεδο της πρωτεϊνουρίας σε διαφορετικές ώρες της ημέρας, καθώς και την εξάρτηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα από τη διούρηση, τη διαφορετική περιεκτικότητά της σε μεμονωμένες μερίδες ούρων, είναι πλέον σύνηθες να αξιολογείται η σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας στην παθολογία των νεφρών από την καθημερινή απώλεια πρωτεΐνης στα ούρα, δηλαδή για τον προσδιορισμό της λεγόμενης ημερήσιας πρωτεϊνουρίας. Εκφράζεται σε g/ημέρα.

Εάν είναι αδύνατη η ημερήσια συλλογή ούρων, συνιστάται ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης και κρεατινίνης σε μία μόνο μερίδα ούρων. Δεδομένου ότι ο ρυθμός απελευθέρωσης κρεατινίνης κατά τη διάρκεια της ημέρας είναι αρκετά σταθερός και δεν εξαρτάται από αλλαγές στον ρυθμό ούρησης, η αναλογία συγκέντρωσης πρωτεΐνης προς συγκέντρωση κρεατινίνης είναι σταθερή. Αυτή η αναλογία συσχετίζεται καλά με την ημερήσια απέκκριση πρωτεΐνης και, ως εκ τούτου, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αξιολόγηση της σοβαρότητας της πρωτεϊνουρίας. Κανονικά, η αναλογία πρωτεΐνης/κρεατινίνης πρέπει να είναι μικρότερη από 0,2. Η πρωτεΐνη και η κρεατινίνη μετρώνται σε g/l. Ένα σημαντικό πλεονέκτημα της μεθόδου για την αξιολόγηση της σοβαρότητας της πρωτεϊνουρίας με την αναλογία πρωτεΐνης-κρεατινίνης είναι η πλήρης εξάλειψη των σφαλμάτων που σχετίζονται με την αδυναμία ή την ατελή συλλογή ημερήσιων ούρων.

Βιβλιογραφία:

    O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "Κλινικές πτυχές ανίχνευσης και αξιολόγησης της πρωτεϊνουρίας", Εγχειρίδιο του επικεφαλής του CDL, Νο. 1, Ιανουάριος 2007

    A. V. Kozlov, «Πρωτεϊνουρία: μέθοδοι για την ανίχνευση της», διάλεξη, Αγία Πετρούπολη, SPbMAPO, 2000

    V. L. Emanuel, " Εργαστηριακή διάγνωσηνεφρικές παθήσεις. Urinary Syndrome”, - Εγχειρίδιο προϊσταμένου του CDL, Αρ. 12, Δεκέμβριος 2006.

    ΣΕ ΚΑΙ. Pupkova, L.M. Prasolova - Μέθοδοι προσδιορισμού πρωτεΐνης στα ούρα (ανασκόπηση δεδομένων βιβλιογραφίας)

    Εγχειρίδιο Κλινικής εργαστηριακές μεθόδουςέρευνα. Εκδ. Ε. Α. Κωστ. Μόσχα, "Ιατρική", 197

Όλες οι μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα βασίζονται στην πήξη των πρωτεϊνών υπό την επίδραση χημικών ή θερμικών παραγόντων. Με την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα, εμφανίζεται θολότητα, ο βαθμός της οποίας εξαρτάται από την ποσότητα της πρωτεΐνης.

Α) ποιοτικές δοκιμέςπροσδιορισμός πρωτεΐνης στα ούρα - είναι υποχρεωτικοί.

1. Δείγμα με νιτρικό οξύ- σε δοκιμαστικό σωλήνα με 1-2 ml διαλύματος νιτρικού οξέος 50%, στρώστε προσεκτικά ίση ποσότητα ούρων, προσπαθώντας να μην ανακινήσετε το υγρό. Στην περίπτωση της παρουσίας πρωτεΐνης στα ούρα, εμφανίζεται ένας λευκός δακτύλιος στο όριο των δύο υγρών, ο οποίος φαίνεται καλύτερα σε μαύρο φόντο.

2. Δείγμα με σουλφασαλικυλικό οξύ- 4-5 ml ούρων χύνονται σε δοκιμαστικό σωλήνα και προστίθενται 8-10 σταγόνες από το αντιδραστήριο. Με την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα, ανάλογα με την ποσότητα της, μπορεί να εμφανιστεί θολότητα ή κροκίδωση.

3. Εξπρές τεστ (στεγνό διαγνωστικό τεστ)- Μια λωρίδα χαρτιού δείκτη Albufan βυθίζεται στα ούρα δοκιμής έτσι ώστε και οι δύο ζώνες δείκτη να υγραίνονται ταυτόχρονα (η επάνω ζώνη είναι για τον προσδιορισμό του pH, η κάτω για τον προσδιορισμό πρωτεΐνης). Μετά από 2-3 δευτερόλεπτα, η λωρίδα τοποθετείται σε ένα λευκό γυάλινο πιάτο. Η αξιολόγηση πραγματοποιείται 60 δευτερόλεπτα μετά τη διαβροχή της ταινίας με ούρα, χρησιμοποιώντας μια έγχρωμη κλίμακα τυπωμένη στη θήκη με λωρίδες ένδειξης.

Β) ποσοτικά δείγματα- πραγματοποιείται σε εκείνες τις μερίδες ούρων όπου βρέθηκε η πρωτεΐνη κατά τη διάρκεια της ποιοτικός ορισμός; ο προσδιορισμός πραγματοποιείται στο υπερκείμενο μετά από φυγοκέντρηση

Μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov- 1-3 ml διαλύματος νιτρικού οξέος 50% χύνεται σε δοκιμαστικό σωλήνα και η ίδια ποσότητα ούρων τοποθετείται προσεκτικά κατά μήκος του τοιχώματος. Η ώρα καταγράφεται σε χρονόμετρο. Εάν ο δακτύλιος στη διεπιφάνεια των υγρών σχηματιστεί αμέσως ή νωρίτερα από 2 λεπτά μετά την επίστρωση, τα ούρα πρέπει να αραιωθούν με νερό. Μετά από αυτό, πραγματοποιείται επαναλαμβανόμενος προσδιορισμός της πρωτεΐνης σε αραιωμένα ούρα. Η αραίωση πραγματοποιείται μέχρι να εμφανιστεί ένας λευκός δακτύλιος μεταξύ του 2ου και του 3ου λεπτού, όταν τα αραιωμένα ούρα προστίθενται σε νιτρικό οξύ. Η ποσότητα της πρωτεΐνης προσδιορίζεται πολλαπλασιάζοντας 0,033 ppm με το βαθμό αραίωσης.

18. Τεχνική λήψης επιχρισμάτων για χλωρίδα, γονόκοκκους, τριχομονάδες, κυτταρολογική εξέταση, KPI.

Τεχνική επιχρίσματος χλωρίδας: το υλικό λαμβάνεται από τον αυχενικό σωλήνα και από την ουρήθρα με ειδική βούρτσα υπό οπτικό έλεγχο. Το προκύπτον δείγμα τοποθετείται αμέσως σε γυάλινη πλάκα και λειοτριβείται.

Τεχνική λήψης επιχρισμάτων για τον Τριχόμονα: πρώτα, το υλικό λαμβάνεται με απόξεση από τον βλεννογόνο της ουρήθρας (μετά το προκαταρκτικό μασάζ για 1 λεπτό στην ηβική σύμφυση) και τον οπίσθιο βυθό του κόλπου, στη συνέχεια σκουπίζεται το κολπικό τμήμα του τραχήλου της μήτρας με αποστειρωμένο μάκτρο βρεγμένο με φυσιολογικό ορό, αφαιρείται το βλεννογόνο βύσμα, μέσα αυχενικό κανάλιπροσεκτικά, εισάγεται ένας καθετήρας σε βάθος όχι μεγαλύτερο από 1,0-1,5 cm και λαμβάνεται απόξεση από τη βλεννογόνο μεμβράνη του τραχήλου της μήτρας.

Τεχνική επιχρίσματος για γονόκοκκους: το υλικό λαμβάνεται από την ουρήθρα, τους αδένες Bartholin και τις παραουρηθρικές οδούς αφού τα σκουπίσετε με βαμβάκι εμποτισμένο με φυσιολογικό ορό, κολπικό τσιμπιδάκι ή ειδικό καθετήρα. Από το ορθό, το υλικό λαμβάνεται με αμβλύ κουτάλι. Στη χρόνια και τορπιώδη γονόρροια, πραγματοποιείται πρόκληση πριν από τη μελέτη για να αυξηθεί η πιθανότητα εντοπισμού του παθογόνου.

Δεν μπορείτε να πάρετε το υλικό με βαμβάκι και κατά τη διάρκεια της εμμήνου ρύσεως.

Τεχνική λήψης επιχρισμάτων για κυτταρολογική εξέταση: λαμβάνεται επίχρισμα από την επιφάνεια του εξωτράχηλου, του κόλπου και του αιδοίου με σπάτουλα, από τον ενδοτράχηλο - με ενδοβούρτσα. Το υλικό εφαρμόζεται λεπτό στρώμασε ειδικά επεξεργασμένο αποβουτυρωμένο γυαλί και επεξεργασμένο ειδική σύνθεσηγια να αποτρέψετε την ξήρανση των κυττάρων. Τα σκευάσματα χρωματίζονται σύμφωνα με τη μέθοδο Παπανικολάου (το λεγόμενο τεστ Παπανικολάου) και υποβάλλονται σε μικροσκόπιο.

Καρυοπυκνωτικός δείκτης- ποσοστό επιφανειακών κυττάρων με πυρήνες πυρήνων σε κύτταρα με κυστιδωτούς (μη πυρήνες). CRPD στην αρχή της ωοθυλακικής φάσης εμμηνορρυσιακός κύκλος 25-30%, μέχρι την ωορρηξία 60-70%, στην ωχρινική φάση μειώνεται στο 25%.

Εντολή

Ποιοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης σε ούρο: Μέθοδος Heller, δοκιμή διαλύματος σουλφοσαλικυλικού οξέος 20%, δοκιμή βρασμού κ.λπ. Ημι-ποσοτικές μέθοδοι: χρήση διαγνωστικών ταινιών δοκιμής για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης σε ούρο, μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov. Ποσοτικές Μέθοδοι: θολωσιμετρική και χρωματομετρική.

Προσδιορισμός πρωτεΐνης στην καθημερινή ούροσε συγκέντρωση 0,033 g/λίτρο ή περισσότερο είναι παθολογία. Κατά κανόνα, στην πρωινή δόση των ούρων, η συγκέντρωση πρωτεΐνης δεν υπερβαίνει τα 0,002 g / l και την ημερήσια ούροΗ συγκέντρωση πρωτεΐνης δεν είναι μεγαλύτερη από 50-150 mg πρωτεΐνης.

Πηγές:

  • προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα

Τα ούρα είναι προϊόν του ανθρώπινου μεταβολισμού. Σχηματίζεται κατά τη διήθηση του αίματος στα νεφρά, γι' αυτό η σύνθεση των ούρων δίνει μια σαφή περιγραφή της κατάστασης του ανθρώπινου σώματος.

Τα ούρα είναι ένα σύνθετο διάλυμα περισσότερων από 150 ενώσεων. Ορισμένες συγκεκριμένες ουσίες, για παράδειγμα, ακετόνη, χολικά οξέα, πρωτεΐνη, γλυκόζη, μπορεί να υπάρχουν μόνο σε ορισμένες ασθένειες.

Για τον έλεγχο της ανθρώπινης υγείας, πρώτα απ 'όλα, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί η ποσότητα των ούρων. Ο κανόνας είναι ο σχηματισμός 1-1,8 λίτρων ούρων την ημέρα. Όταν απεκκρίνονται περισσότερα από 2 λίτρα ούρων, αυτό είναι σημάδι πιθανής παραβίασης της λειτουργίας των νεφρών, Διαβήτηςκαι μια σειρά από άλλες ασθένειες. Εάν σχηματίζονται λιγότερο από 0,5 λίτρα ούρων την ημέρα, υπάρχει απόφραξη του ουρητήρα ή της ουροδόχου κύστης.

χρώμα ούρων

Το χρώμα των ούρων που εκκρίνονται εξαρτάται από πολλούς παράγοντες, επομένως μπορεί να ποικίλλει, από ανοιχτό κίτρινο έως πορτοκαλί. Η παρουσία ορισμένων αποχρώσεων μπορεί να επηρεαστεί από ορισμένα τρόφιμα, καθώς και από φάρμακα που λαμβάνονται από ένα άτομο.

Μετά τη λήψη φαρμάκων, τα ούρα μπορεί να λερωθούν και να αποκτήσουν μια κοκκινωπή απόχρωση. Εάν ένα άτομο κινείται ενεργά, ενώ απελευθερώνει μεγάλη ποσότητα ιδρώτα, τα ούρα θα έχουν έντονη κίτρινος, καθώς και κατά τη λήψη κεφαλαίων όπως Nitroxoline ή Biomycin.

Εάν ένα άτομο δεν έχει πάρει χρωστικές τροφές και φάρμακα, αλλά το χρώμα των ούρων του είναι διαφορετικό από το συνηθισμένο, μπορεί κανείς να υποψιαστεί την παρουσία μιας ασθένειας στο σώμα. Για παράδειγμα, σε ασθένειες του ήπατος, τα ούρα θα έχουν σκούρο κίτρινο ή πρασινωπό χρώμα.

Η παρουσία αίματος στα απεκκρινόμενα ούρα υποδηλώνει ξεκάθαρα την παρουσία πέτρας ή νεφρική αιμορραγία, εάν παρατηρηθεί και πόνος.

Εάν η ούρηση είναι δύσκολη, αυτό μπορεί να υποδεικνύει μια φλεγμονώδη διαδικασία που προκαλείται από μόλυνση στην ουροδόχο κύστη. Και εδώ είναι το βρώμικο θολά ούραμαρτυρεί σοβαρές ασθένειεςνεφρά.

Πρωτεΐνη στα ούρα

Δεν υπάρχει πρωτεΐνη στο αίμα ενός ατόμου ή η ποσότητα της είναι τόσο μικρή που δεν μπορεί να προσδιοριστεί με εργαστηριακές εξετάσεις. Εάν ανιχνευτεί πρωτεΐνη στα ούρα, είναι απαραίτητο να γίνουν επαναλαμβανόμενες δοκιμές, καθώς μπορεί να υπάρχει όταν ένα άτομο ξυπνά το πρωί, καθώς και μετά από σκληρή σωματική εργασία ή άσκηση σε αθλητές.

Είναι 100% αδύνατο να προσδιοριστεί οπτικά εάν υπάρχει πρωτεΐνη στα ούρα ή όχι. Μπορεί κανείς μόνο να μαντέψει πότε υπάρχει μεγάλη ποσότητα υπόλευκων νιφάδων στα ούρα.

Εάν η πρωτεΐνη στα ούρα ανιχνεύεται επανειλημμένα, αυτό δείχνει την παρουσία κάποιου είδους νεφρικής νόσου. Φλεγμονώδεις διεργασίεςπου εμφανίζονται σε αυτά, προκαλούν μια ελαφρά αύξηση της ποσότητας πρωτεΐνης. Εάν περισσότερα από 2 γραμμάρια απεκκρίνονται στα ούρα, αυτό είναι σήμα συναγερμού.

Η πυελονεφρίτιδα είναι φλεγμονώδης νόσος, στην οποία προσβάλλονται η νεφρική πύελος, οι κάλυκες και το παρέγχυμα. Στις περισσότερες περιπτώσεις, η φλεγμονή προκαλείται από βακτηριακή μόλυνση. Η πλήρης ανάρρωση είναι δυνατή μόνο με έγκαιρη διάγνωση, επομένως, όταν εμφανιστούν συμπτώματα, απαιτείται ενδελεχής εξέταση.