Fakte interesante 

Metodat për përcaktimin e proteinave në urinë. Metodat sasiore të vlerësimit. Metodat për përcaktimin e proteinave në urinë

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Normalisht, proteina ekskretohet në urinë në një sasi relativisht të vogël, zakonisht jo më shumë se 100-150 mg / ditë.

Diureza ditore në një person të shëndetshëm është 1000-1500 ml / ditë; pra, përqendrimi i proteinave në kushte fiziologjike është 8-10 mg/dL (0,08-0,1 g/L).

Proteina totale e urinës përfaqësohet nga tre fraksione kryesore - albumina, mukoproteina dhe globulina.

Albumi i urinës është ajo pjesë e albuminës së serumit që është filtruar në glomerul dhe nuk është riabsorbuar në tubulat renale; ekskretimi normal i albuminës urinare është më pak se 30 mg/ditë. Një tjetër burim kryesor i proteinave në urinë janë tubulat renale, veçanërisht pjesa distale e tubulave. Këto tubula sekretojnë dy të tretat e proteinës totale të urinës; nga kjo sasi, afërsisht 50% përfaqësohet nga glikoproteina Tamm-Horsfall, e cila sekretohet nga epiteli i tubulave distale dhe luan një rol të rëndësishëm në formimin gurët urinar. Proteinat e tjera janë të pranishme në urinë në sasi e vogël dhe e kanë origjinën nga proteinat plazmatike me peshë të ulët molekulare të filtruara nga veshkat që nuk riabsorbohen në tubulat renale, mikroglobulinat e epitelit tubular të veshkave (RTE) dhe sekrecionet prostatike dhe vaginale.

Proteinuria, domethënë një rritje në përmbajtjen e proteinave në urinë, është një nga simptomat më domethënëse që pasqyron dëmtimin e veshkave. Megjithatë, linjë e tërë gjendje të tjera mund të shoqërohen edhe me proteinuri. Prandaj, ekzistojnë dy grupe kryesore të proteinurisë: proteinuria renale (e vërtetë) dhe ekstrarenale (false).

Në proteinurinë renale, proteina hyn në urinë direkt nga gjaku për shkak të rritjes së përshkueshmërisë së filtrit glomerular. Proteinuria renale shpesh gjendet në glomerulonefrit, nefrozë, pielonefrit, nefrosklerozë, amiloidozë renale, forma të ndryshme nefropatitë, për shembull, nefropatia e shtatzënisë, kushtet febrile, hipertensionit etj. Proteinuria mund të gjendet edhe te personat e shëndetshëm pas sforcimeve të rënda fizike, hipotermisë, stresit psikologjik. Tek të porsalindurit në javët e para të jetës vërehet proteinuria fiziologjike dhe me asteni tek fëmijët dhe adoleshentët në kombinim me rritje të shpejtë në moshën 7-18 vjeç është e mundur proteinuria ortostatike (në pozicionin e drejtë të trupit).

Me proteinuri të rreme (ekstrarenale), burimi i proteinave në urinë është një përzierje e leukociteve, eritrociteve dhe qelizave uroteliale të epitelit të traktit urinar. Prishja e këtyre elementeve, veçanërisht e theksuar në reaksion alkalik urina, çon në depërtimin e proteinave në urinë, e cila tashmë ka kaluar filtrin e veshkave. Sidomos një shkallë të lartë proteinuria e rreme jep një përzierje gjaku në urinë, me hematuri të bollshme mund të arrijë 30 g / l ose më shumë. Sëmundjet që mund të shoqërohen me proteinuri ekstrarenale - sëmundje urolithiasis, tuberkulozi i veshkave, tumoret e veshkave ose traktit urinar, cistiti, pieliti, prostatiti, uretriti, vulvovaginiti.

Klasifikimi klinik përfshin proteinurinë e lehtë (më pak se 0,5 g/ditë), të moderuar (0,5 deri në 4 g/ditë) ose të rëndë (më shumë se 4 g/ditë).

Shumica e pacientëve me sëmundje të veshkave si glomerulonefriti akut ose pielonefriti kanë proteinuri të lehtë, por pacientët me sindromën nefrotike zakonisht nxjerrin më shumë se 4 g proteina në ditë në urinë.

Për përcaktimin sasior të proteinave përdoren një gamë e gjerë metodash, në veçanti metoda e unifikuar Brandberg-Roberts-Stolnikov, metoda biurete, metoda me përdorimin e acidit sulfosalicilik, metoda me ngjyrën blu Coomassie, ngjyrën e kuqe pirogallol etj.

Përdorimi i metodave të ndryshme për përcaktimin e proteinave në urinë ka çuar në konfuzion serioz në interpretimin e kufijve të përmbajtjes normale të proteinave në urinë. Meqenëse 2 metoda përdoren më shpesh në laboratorë - me acid sulfosalicilik dhe ngjyrë të kuqe pirogallol, ne do të shqyrtojmë problemin e korrektësisë së kufijve të normave për to. Nga pozicioni i metodës sulfosalicilike në urinë normale, përmbajtja e proteinave nuk duhet të kalojë 0.03 g / l, nga pozicioni i metodës pirogallol - 0.1 g / l! Diferencat janë të trefishta!

Vlerat e ulëta të normës së përqendrimit të proteinave në urinë gjatë përdorimit të acidit sulfosalicilik janë për shkak të pikave të mëposhtme:

  • kurba e kalibrimit ndërtohet sipas tretësirë ​​ujore albumina. Urina në përbërjen e saj është shumë e ndryshme nga uji: pH, kripërat, komponimet me peshë të ulët molekulare (kreatinina, ure, etj.). Si rezultat, sipas Altshuler, Rakov dhe Tkachev, gabimi në përcaktimin e proteinave në urinë mund të jetë 3-fish ose më shumë! Ato. Rezultatet e saktë të përcaktimit mund të merren vetëm në rastet kur urina ka një shumë të ulët gravitet specifik dhe në përbërjen e tij dhe pH i afrohet ujit;
  • ndjeshmëri më e lartë e metodës sulfosalicilike ndaj albuminës në krahasim me proteinat e tjera (ndërsa, siç u përmend më lart, albumina në mostrat normale të urinës nuk kalon 30% të proteinës totale të urinës);
  • nëse pH e urinës zhvendoset në anën alkaline, acidi sulfosalicilik neutralizohet, gjë që është edhe arsyeja e nënvlerësimit të rezultateve të përcaktimit të proteinave;
  • shkalla e sedimentimit të precipitateve është subjekt i ndryshimeve të konsiderueshme - nëse jo përqëndrime të larta reshjet e proteinave ngadalësohen dhe një ndalim i hershëm i reagimit çon në një nënvlerësim të rezultatit;
  • shpejtësia e reaksionit të precipitimit në thelb varet nga përzierja e përzierjes së reaksionit. Në përqendrime të larta të proteinave, lëkundjet e forta të tubit mund të çojnë në formimin e thekoneve të mëdha dhe vendosjen e tyre të shpejtë.

Të gjitha tiparet e mësipërme të metodës çojnë në një nënvlerësim të konsiderueshëm të përqendrimit të proteinave të përcaktuar në urinë. Shkalla e nënvlerësimit varet shumë nga përbërja e një kampioni të caktuar të urinës. Meqenëse metoda e acidit sulfosalicilik jep përqendrime të nënvlerësuara të proteinave, kufiri normal për këtë metodë prej 0.03 g / l nënvlerësohet gjithashtu me rreth tre herë në krahasim me të dhënat e dhëna në librat e huaj të referencës për diagnostikimin klinik laboratorik.

Shumica dërrmuese e laboratorëve në vendet perëndimore kanë braktisur përdorimin e metodës sulfosalicilike për përcaktimin e përqendrimit të proteinave në urinë dhe po përdorin në mënyrë aktive metodën e pirogallolit për këtë qëllim. Metoda e pirogallolit për përcaktimin e përqendrimit të proteinave në urinë dhe lëngje të tjera biologjike bazohet në parimin fotometrik të matjes së densitetit optik të një kompleksi me ngjyrë të formuar nga ndërveprimi i molekulave të proteinave me molekulat e kompleksit të ngjyrës së kuqe të pirogallolit dhe kompleksit të molibdatit të natriumit ( Kompleksi Pyrogallol Red-Molybdate).

Pse metoda pirogallol siguron matje më të sakta të proteinave të urinës? Së pari, për shkak të hollimit më të madh të mostrës së urinës në përzierjen e reaksionit. Nëse në metodën sulfosalicilike raporti i mostrës së urinës/reagentit është 1/3, atëherë në metodën e pirogallolit mund të variojë nga 1/12,5 deri në 1/60, në varësi të variantit të metodës, gjë që redukton ndjeshëm efektin e përbërjes së urinës në rezultati i matjes. Së dyti, reagimi vazhdon në një tampon suksinat, domethënë në një pH të qëndrueshëm. Dhe, së fundi, vetë parimi i metodës, mund të thuhet, është më "transparent". Molibdati i natriumit dhe ngjyra e kuqe e pirogallolit formojnë një kompleks me një molekulë proteine. Kjo çon në faktin se molekulat e bojës në gjendje të lirë, të cilat nuk thithin dritën në një gjatësi vale prej 600 nm, thithin dritën në kombinim me proteinën. Kështu, ne etiketojmë çdo molekulë proteine ​​me një ngjyrë, dhe si rezultat, zbulojmë se ndryshimi në densitetin optik të përzierjes së reaksionit në një gjatësi vale prej 600 nm lidhet qartë me përqendrimin e proteinave në urinë. Për më tepër, meqenëse afiniteti i pirogallolit të kuq për fraksione të ndryshme proteinash është pothuajse i njëjtë, metoda ju lejon të përcaktoni proteinën totale të urinës. Prandaj, kufiri vlerat normale përqendrimi i proteinave në urinë është 0,1 g/l (është indikuar në të gjitha udhëzimet moderne perëndimore për diagnostikimin klinik dhe laboratorik, duke përfshirë "Udhëzuesin klinik të testeve laboratorike", redaktuar nga N. Titz). Karakteristikat krahasuese të metodave pirogallol dhe sulfosalicilike për përcaktimin e proteinave në urinë janë paraqitur në Tabelën 1.

Si përfundim, dëshiroj të përqendrohem edhe një herë në faktin se kur laboratori kalon nga metoda sulfosalicilike për përcaktimin e proteinave në urinë në metodën e pirogallolit, kufiri i vlerave normale rritet ndjeshëm (nga 0,03 g/l në 0,1 g /l!). Personeli i laboratorit duhet patjetër të informojë mjekët për këtë, sepse. në këtë situatë, diagnoza e proteinurisë mund të bëhet vetëm kur përmbajtja e proteinave në urinë tejkalon 0.1 g / l.

Bibliografi.

  1. Altshuler B.Yu., Rakov S.S., Tkachev G.A. // Pyetje. mjaltë. kimisë. - 2001. - Nr 4. - C.426-438.
  2. Kim Yu.V., Potekhin O.E., Tokar M.I., Shibanov A.N. // Laboratori. mjaltë. - 2003. - Nr 6. - C.94-98.
  3. Udhëzues klinik për testet laboratorike, ed. N. Titsa.- M.- Unimed-press.-2003.- 942 f.
  4. Kozlov A.V., Slepysheva V.V. Metodat për përcaktimin e proteinave në urinë: mundësitë dhe perspektivat // Mbledhja e punimeve të VII vjetore. SPb nefrol. seminar. - Shën Petersburg: TNA. - 1999. - C.17-28.
  5. Pupkova V.I., Pikalov I.V., Khrykina E.N., Kharkovskiy A.V. // Lajmi "Vector-Best". - 2003. - Nr.4 (30).
  6. Chambers R.E., Bullock D.G., Whater J.T. // Ann. Klin. Biokimik. - 1991. - Vëll. 28 (pika 5). - Fq.467-473.
  7. Laboratoret Klinike Mjekësi. Ed. nga Kenneth D. McClatchey. - Botimi 2-2001.- 1993f.
  8. Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // klinikë. Biokimik. - 2000. - Vëll. 33.-P.487-494.
  9. Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Përbërja dhe pajisja për analizën e proteinave urinare dhe metoda e përdorimit të së njëjtës // Patenta e SHBA Nr. 5326707. - 1994.
  10. Kaplan I.V., Levinson S.S. // klinikë. Kimik. - 1999. - Vëll. 45.-P.417-419.
  11. Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. i Med. - 2003. - Vëll. 70 (6). - Fq.535-547.
  12. Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // klinikë. Kimik. - 2001. - Vëll. 47.-P.2183-2184.
  13. Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Artikull në frëngjisht. - Ann. Biol. Klin. (Paris). - 1998. - Vëll. 56 (6). - Fq.719-723.
  14. Marshall T., Williams K.M. // klinikë. Kimik. - 2003. - Vëll. 49 (12). - P.2111-2112.
  15. Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D'Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Chim. acta. - 2002. - Vëll. 326 (1-2). - Fq.177-183.
  16. Ringsrud K.M., Linne J.J. Analiza e urinës dhe lëngjet e trupit: Një ColorText dhe Atlas // Mosby. - 1995. - Fq.52-54.
  17. Shepard M.D., Penberthy L.A. // klinikë. Kimik. - 1987. - Vëll. 33.-P.792-795.
  18. Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biofiza. metodat. - 2001. - Vëll. 47.-P.197-207.
  19. Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biofiza. metodat. - 2003. - Vëll. 57 (1). - Fq.45-55.

Sasi të vogla proteinash gjenden në urinën e përditshme të individëve të shëndetshëm. Megjithatë, përqendrimet e tilla të ulëta nuk mund të zbulohen duke përdorur metodat konvencionale kërkimore. Ekskretimi i sasive më të mëdha të proteinave, në të cilin testet e zakonshme cilësore për proteinat në urinë bëhen pozitive, quhet proteinuri. Ka proteinuri renale (të vërtetë) dhe ekstrarenale (të rreme). Në proteinurinë renale, proteina hyn në urinë direkt nga gjaku për shkak të një rritje të filtrimit të saj nga glomeruli i veshkave ose një ulje të reabsorbimit tubular.

Proteinuria renale (e vërtetë).

Proteinuria renale (e vërtetë) është funksionale dhe organike. Ndër proteinurinë funksionale renale, më shpesh vërehen llojet e mëposhtme:

Proteinuria fiziologjike e të porsalindurve, e cila zhduket në ditën e 4-10 pas lindjes, dhe tek foshnjat e parakohshme pak më vonë;
- albuminuria ortostatike, e cila është tipike për fëmijët e moshës 7-18 vjeç dhe shfaqet vetëm në pozicionin vertikal të trupit;
- albuminuria kalimtare (infarkti), e cila mund të shkaktohet nga sëmundje të ndryshme të sistemit të tretjes, anemi e rëndë, djegie, lëndime ose faktorët fiziologjikë: i rëndë stresi ushtrimor, hipotermi, emocione të fuqishme, ushqim i bollshëm, i pasur me proteina, etj.

Proteinuria organike (renale) vërehet për shkak të kalimit të proteinave nga gjaku përmes zonave të dëmtuara të endotelit të glomerulave renale në sëmundjet e veshkave (glomerulonefriti, nefroza, nefroskleroza, amiloidoza, nefropatia e shtatzënisë), çrregullimet e hemodinamikës renale (venoze renale hipertensioni, hipoksia), efektet trofike dhe toksike (duke përfshirë edhe medicinale) në muret e kapilarëve glomerular.

Proteinuria ekstrarenale (false).

Proteinuria ekstrarenale (false), në të cilën burimi i proteinave në urinë është një përzierje e leukociteve, eritrociteve, baktereve, qelizave uroteliale. vërehet në sëmundjet urologjike (urolithiasis, tuberkulozi i veshkave, tumoret e veshkave dhe të traktit urinar, etj.).

Përcaktimi i proteinave në urinë

Shumica e metodave cilësore dhe sasiore për përcaktimin e proteinave në urinë bazohen në koagulimin e saj në vëllimin e urinës ose në ndërfaqen e mediumit (urinë dhe acid).

Ndër metodat cilësore për përcaktimin e bedkës në urinë, më së shumti përdoret testi i unifikuar me acid sulfosalicilik dhe testi i unazës Heller.

Një mostër e standardizuar me acid sulfasalicilik kryhet si më poshtë. 3 ml urinë të filtruar hidhen në 2 tuba. Në njërën prej tyre shtoni 6-8 pika të një zgjidhje 20% të acidit sulfasalicilik. Të dy tubat krahasohen me një sfond të errët. Turbullira e urinës në një epruvetë me acid sulfasalicilik tregon praninë e proteinave. Para studimit, është e nevojshme të përcaktohet reagimi i urinës, dhe nëse është alkalik, atëherë acidifikoni me 2-3 pika të një zgjidhje 10%. acid acetik.

Testi Geller bazohet në faktin se në prani të proteinave në urinë në kufirin e acidit nitrik dhe urinës, ajo mpikset dhe shfaqet një unazë e bardhë. 1-2 ml tretësirë ​​30% të acidit nitrik hidhet në një epruvetë dhe saktësisht e njëjta sasi e urinës së filtruar vendoset me kujdes përgjatë murit të epruvetës. Shfaqja e një unaze të bardhë në ndërfaqen midis dy lëngjeve tregon praninë e proteinave në urinë. Duhet mbajtur mend se ndonjëherë një unazë e bardhë formohet në prani të një sasie të madhe uratesh, por ndryshe nga unaza proteinike, ajo shfaqet pak mbi kufirin midis dy lëngjeve dhe tretet kur nxehet [Pletneva N.G., 1987].

Metodat sasiore më të përdorura janë:

1) metoda e unifikuar Brandberg-Roberts-Stolnikov, e cila bazohet në testin e unazave Heller;
2) metodë fotoelektrokolorimetrike për përcaktimin sasior të proteinës në urinë nga turbullira e krijuar nga shtimi i acidit sulfasalicilik;
3) metoda biurete.

Zbulimi i proteinave në urinë me një metodë të thjeshtuar të përshpejtuar kryhet me një metodë kolorimetrike duke përdorur letër treguese, e cila prodhohet nga Lachema (Sllovaki), Albuphan, Ames (Angli), Albustix, Boehringer (Gjermani), Comburtest etj. Metoda konsiston në duke zhytur në urinë një shirit letre të posaçëm të ngopur me tetrabromofenol blu dhe tampon citrat, i cili ndryshon ngjyrën nga e verdha në blu në varësi të përmbajtjes së proteinave në urinë. Paraprakisht, përqendrimi i proteinave në urinën e testit përcaktohet duke përdorur një shkallë standarde. Për marrjen rezultatet e sakta duhet të respektohen kushtet e mëposhtme. pH i urinës duhet të jetë në intervalin 3.0-3.5; me urinë shumë alkaline (pH 6.5) do të fitohet rezultat pozitiv fals, dhe me urinë shumë acide (pH 3.0) - negative false.

Letra nuk duhet të jetë në kontakt me urinën e testit për më shumë sesa tregohet në udhëzime, përndryshe testi do të japë një reagim fals pozitiv. Kjo e fundit vërehet edhe kur ka një sasi të madhe mukusi në urinë. Ndjeshmëria lloje te ndryshme dhe seritë e letrës mund të jenë të ndryshme, kështu që vlerësimi sasior i proteinave në urinë me këtë metodë duhet të trajtohet me kujdes. Përcaktimi i sasisë së tij në urinën ditore duke përdorur letër treguese është i pamundur [Pletneva N.G., 1987]

Përkufizimi i proteinurisë ditore

Ka disa mënyra për të përcaktuar sasinë e proteinave të ekskretuara në urinë në ditë. Më e thjeshta është metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Metodologjia. 5-10 ml urinë ditore të përzier tërësisht derdhen në një epruvetë dhe një zgjidhje 30% e acidit nitrik shtohet me kujdes përgjatë mureve të saj. Në prani të proteinave në urinë në një sasi prej 0,033% (d.m.th. 33 mg për 1 litër urinë), pas 2-3 minutash shfaqet një unazë e bardhë e hollë, por qartë e dukshme. Në një përqendrim më të ulët, testi është negativ. Me një përmbajtje më të lartë të proteinave në urinë, sasia e saj përcaktohet nga hollimet e përsëritura të urinës me ujë të distiluar derisa unaza të pushojë së formuari. Në epruvetën e fundit në të cilën unaza është ende e dukshme, përqendrimi i proteinave do të jetë 0.033%. Duke shumëzuar 0,033 me shkallën e hollimit të urinës, përcaktoni përmbajtjen e proteinave në 1 litër urinë të paholluar në gram. Pastaj përmbajtja e proteinave në urinë ditore llogaritet me formulën:

K \u003d (x V) / 1000

Ku K është sasia e proteinave në urinën ditore (g); x është sasia e proteinave në 1 litër urinë (g); V është sasia e urinës së ekskretuar në ditë (ml).

Normalisht, nga 27 deri në 150 mg (mesatarisht 40-80 mg) proteina ekskretohet në urinë gjatë ditës.

Ky test ju lejon të përcaktoni në urinë vetëm proteinat e imta (albumin). Metodat sasiore më të sakta (metoda kolorimetrike Kjeldahl, etj.) janë mjaft komplekse dhe kërkojnë pajisje speciale.

Në proteinurinë renale, jo vetëm albuminat ekskretohen në urinë, por edhe lloje të tjera proteinash. Një proteinogram normal (sipas Seitz et al., 1953) ka përqindjen e mëposhtme: albumina - 20%, α1-globulina - 12%, α2-globulina - 17%, γ-globulina - 43% dhe β-globulina - 8%. Raporti i albuminave ndaj globulinave ndryshon me sëmundje të ndryshme veshkat, d.m.th. raporti sasior ndërmjet fraksioneve proteinike është i prishur.

Metodat më të zakonshme për fraksionimin e uroproteinave janë këto: kriposja me kripëra neutrale, fraksionimi elektroforetik, metodat imunologjike (reaksioni radial imunodiffuzion sipas Mancinit, analiza imunoelektroforetike, imunoelektroforeza e precipitimit), kromatografia, filtrimi me xhel dhe ultracentrifugimi.

Në lidhje me futjen e metodave për fraksionimin e uroproteinave bazuar në studimin e lëvizshmërisë elektroforetike, ndryshueshmërisë në peshën molekulare, madhësisë dhe formës së molekulave të uroproteinës, u bë e mundur të izolohen llojet e proteinurisë karakteristike për një sëmundje të veçantë, të studiohen pastrimet e proteinat individuale të plazmës. Deri më sot, më shumë se 40 proteina plazmatike janë identifikuar në urinë, duke përfshirë 31 proteina plazmatike në urinë normale.

Proteinuria selektive

Vitet e fundit, koncepti i selektivitetit të proteinurisë është shfaqur. Në vitin 1955, Hardwicke dhe Squire formuluan konceptin e proteinurisë "selektive" dhe "jo selektive", pasi përcaktuan se filtrimi i proteinave të plazmës në urinë ndjek një model të caktuar: sa më e madhe të jetë pesha molekulare e proteinës së ekskretuar në urinë. sa më i ulët klirensi i tij dhe aq më i ulët përqendrimi në urinë.urina përfundimtare. Proteinuria, që korrespondon me këtë model, është selektive, në ndryshim nga jo selektive, për të cilën është karakteristik perversioni i modelit të prejardhur.

Zbulimi i proteinave me peshë molekulare relativisht të madhe në urinë tregon mungesën e selektivitetit të filtrit renal dhe dëmtimin e theksuar të tij. Në këto raste, flitet për një selektivitet të ulët të proteinurisë. Prandaj, aktualisht, përcaktimi i fraksioneve proteinike të urinës duke përdorur metodat e elektroforezës në niseshte dhe xhel poliakrilamide është bërë i përhapur. Bazuar në rezultatet e këtyre metodave kërkimore, mund të gjykohet selektiviteti i proteinurisë.

Sipas V.S. Makhlina (1975), më i justifikuari është përcaktimi i selektivitetit të proteinurisë duke krahasuar pastrimin e 6-7 proteinave individuale të plazmës së gjakut (albumina, traneferina, α2 - makroglobulina, IgA, IgG, IgM) duke përdorur saktë dhe Metodat imunologjike sasiore specifike të reagimit të imunodifuzionit radial sipas Mancinit, analiza imunoelektroforetike dhe imunoelektroforeza e precipitimit. Shkalla e selektivitetit të proteinurisë përcaktohet nga indeksi i selektivitetit, i cili është raporti i proteinave të krahasuara dhe referuese (albumina).

Studimi i pastrimit të proteinave individuale të plazmës lejon marrjen e informacionit të besueshëm në lidhje me gjendjen e membranave bazale të filtrimit të glomerulave të veshkave. Marrëdhënia midis natyrës së proteinave të ekskretuara në urinë dhe ndryshimeve në membranat bazale të glomerulave është aq e theksuar dhe konstante sa uroproteinogrami mund të gjykojë indirekt ndryshimet patofiziologjike në glomerulat e veshkave. Mirë madhësia mesatare poret e membranës bazale glomerulare janë 2,9-4 A ° NM, të cilat mund të kalojnë proteina që kanë një peshë molekulare deri në 10 4 (mioglobulina, acidi α 1 - glikoproteina, zinxhirët e lehtë të imunoglobulinës, fragmentet Fc dhe Fab - IgG, albumina dhe transferrinë).

Me glomerulonefritin, sindromën nefrotike, përmasat e poreve në membranat bazale të glomeruleve rriten, dhe për këtë arsye membrana bazale bëhet e përshkueshme nga molekulat e proteinave me përmasa dhe masë të madhe (ceruloplazmina, haptoglobina, IgG, IgA, etj.). Me një shkallë ekstreme të dëmtimit të glomerulave të veshkave, në urinë shfaqen molekula gjigante të proteinave të plazmës së gjakut (α2-makroglobulina, IgM dhe β2-lipoproteina).

Duke përcaktuar spektrin e proteinave të urinës, mund të konkludohet se pjesë të caktuara të nefronit preken kryesisht. Për glomerulonefritin me një lezion mbizotërues të membranave bazale glomerulare, është karakteristike prania e proteinave me peshë molekulare të madhe dhe të mesme në urinë. Për pielonefritin me një lezion mbizotërues të membranave bazale të tubulave, është karakteristike mungesa e proteinave të mëdha molekulare dhe prania e sasive të shtuara të proteinave me peshë molekulare të mesme dhe të ulët.

β 2 -Mikroglobulina

Përveç proteinave të njohura si albumina, imunoglobulinat, lipoproteinat. fibrinogjeni, transferina, urina përmban proteina të mikroproteinës plazmatike, ndër të cilat β 2-mikroglobulina, e zbuluar nga Berggard dhe Bearn në vitin 1968, është me interes klinik. Duke pasur një peshë molekulare të ulët (pesha molekulare relative 1800), kalon lirshëm nëpër glomerulat e veshkave. dhe riabsorbohet në tubulat proksimale. Kjo lejon përcaktimin sasior të β2-mikroglobulinës në gjak dhe urinë për të përcaktuar filtrimin glomerular dhe aftësinë e veshkave për të resorbuar proteinat në tubulat proksimale.

Përqendrimi i kësaj proteine ​​në plazmën e gjakut dhe në urinë përcaktohet me anë të radioimmunoassay duke përdorur një kit standard "Phade-bas β 2-mikroiest" (Pharmacia, Suedi). Serumi i gjakut i njerëzve të shëndetshëm përmban mesatarisht 1,7 mg / l (varg nga 0,6 në 3 mg / l), në urinë - një mesatare prej 81 μg / l (maksimumi 250 μg / l) β2-mikroglobulinë. Teprica e tij në urinë mbi 1000 mcg/l është një fenomen patologjik. Përmbajtja e β2-mikroglobulinës në gjak rritet në sëmundjet e shoqëruara me filtrim glomerular të dëmtuar, veçanërisht në glomerulonefritin akut dhe kronik, sëmundjen e veshkave policistike, nefrosklerozën, nefropatinë diabetike, insuficiencën renale akute.

Përqendrimi i β2-mikroglobulinës në urinë rritet me sëmundje të shoqëruara nga një shkelje e funksionit të rithithjes së tubave, gjë që çon në një rritje të sekretimit të saj në urinë me 10-50 herë, veçanërisht me pyelonefrit, renale kronike. insuficienca, intoksikimi purulent etj. Është karakteristikë se me cistitin ndryshe nga pielonefriti nuk ka rritje të përqendrimit të β2-mikroglobulinës në urinë, e cila mund të përdoret për diagnozën diferenciale të këtyre sëmundjeve. Megjithatë, gjatë interpretimit të rezultateve të studimit, duhet pasur parasysh se çdo rritje e temperaturës shoqërohet gjithmonë me një rritje të sekretimit të β2-mikroglobulinës në urinë.

Molekulat mesatare të gjakut dhe urinës

Molekulat e mesme (SM), të quajtura ndryshe toksina proteinike, janë substanca me peshë molekulare 500-5000 dalton. struktura fizike ato janë të panjohura. Përbërja e SM përfshin të paktën 30 peptide: oksitocinë, vazopresinë, angiotensin, glukagon, hormon adrenokortikotrop (ACTH), etj. Akumulimi i tepërt i SM vërehet me një ulje të funksionit të veshkave dhe një sasi të madhe proteinash të deformuara dhe metabolitëve të tyre në. gjaku. Kanë një sërë efektesh biologjike dhe janë neurotoksike, shkaktojnë imunosupresion dytësor, anemi dytësore, pengojnë biosintezën dhe eritropoezën e proteinave, pengojnë aktivitetin e shumë enzimave dhe prishin fazat e procesit inflamator.

Niveli i SM në gjak dhe urinë përcaktohet nga një test shqyrtimi, si dhe nga spektrofotometria në zonën ultravjollcë në një gjatësi vale prej 254 dhe 280 mm në një spektrofotometër DI-8B, si dhe spektrofotometria dinamike me përpunim kompjuterik në gjatësinë e valës. diapazoni prej 220-335 nm në të njëjtin spektrometër Beckman. Përmbajtja e SM në gjak merret si normë, e barabartë me 0,24 ± 0,02 arb. njësi, dhe në urinë - 0,312 ± 0,09 arb. njësi
Duke qenë mbetje normale të trupit, ato hiqen normalisht prej tij gjatë natës me filtrim glomerular me 0,5%; 5% e tyre asgjësohen në një mënyrë tjetër. Të gjitha fraksionet SM i nënshtrohen riabsorbimit tubular.

uroproteinat jo plazmatike (indore).

Përveç proteinave të plazmës së gjakut, në urinë mund të ketë edhe proteina jo plazmatike (indore). Sipas Buxbaum dhe Franklin (1970), proteinat jo plazmatike përbëjnë afërsisht 2/3 e të gjithë biokoloideve urinare dhe një pjesë të konsiderueshme të uroproteinave në proteinurinë patologjike. Proteinat e indeve hyjnë në urinë direkt nga veshkat ose organet e lidhura anatomikisht me traktin urinar, ose hyjnë në gjak nga organet dhe indet e tjera, dhe prej saj përmes membranave bazale të glomerulave të veshkave në urinë. Në rastin e fundit, sekretimi i proteinave të indeve në urinë ndodh në mënyrë të ngjashme me ekskretimin e proteinave të plazmës me pesha të ndryshme molekulare. Përbërja e uroproteinave jo plazmatike është jashtëzakonisht e larmishme. Midis tyre janë glikoproteinat, hormonet, antigjenet, enzimat (enzimat).

Proteinat e indeve në urinë zbulohen duke përdorur metoda konvencionale të kimisë së proteinave (ultracentrifugim, kromatografi me xhel, lloje të ndryshme të elektroforezës), reaksione specifike ndaj enzimave dhe hormoneve dhe metodave imunologjike. Këto të fundit bëjnë të mundur edhe përcaktimin e përqendrimit të uroproteinës jo plazmatike në urinë dhe, në disa raste, përcaktimin e strukturave indore që janë bërë burimi i shfaqjes së saj. Metoda kryesore për zbulimin e proteinave jo-plazmatike në urinë është analiza e imunodifuzionit me antiserum të marrë nga imunizimi i kafshëve eksperimentale me urinën e njeriut dhe më pas të varfëruar (të absorbuar) nga proteinat e plazmës së gjakut.

Ekzaminimi i enzimave në gjak dhe urinë

Në procesin patologjik, vërehen shqetësime të thella në aktivitetin jetësor të qelizave, të shoqëruara me çlirimin e enzimave ndërqelizore në median e lëngshme të trupit. Enzimodiagnostika bazohet në përcaktimin e një numri enzimash të çliruara nga qelizat e organeve të prekura dhe jo karakteristike për serumin e gjakut.
Studimet e nefronit të njeriut dhe të kafshëve kanë treguar se në pjesët individuale të tij ka një diferencim të lartë enzimatik, i lidhur ngushtë me funksionet që kryen çdo departament. Glomerulet e veshkave përmbajnë relativisht nje numer i madh i enzima të ndryshme.

Qelizat e tubulave renale, sidomos ato proksimale përmbajnë shuma maksimale enzimat. Aktiviteti i tyre i lartë vihet re në lakun e Henle-it, tubulat e drejtpërdrejta dhe kanalet grumbulluese. Ndryshimet në aktivitetin e enzimave individuale në sëmundje të ndryshme të veshkave varen nga natyra, ashpërsia dhe lokalizimi i procesit. Vërehen para shfaqjes së ndryshimeve morfologjike në veshka. Meqenëse përmbajtja e enzimave të ndryshme është e lokalizuar qartë në nefron, përcaktimi i një ose një enzime tjetër në urinë mund të kontribuojë në diagnozën aktuale. procesi patologjik në veshka (glomerula, tubula, kortikale ose medulla), diagnoza diferenciale e sëmundjeve renale dhe përcaktimi i dinamikës (zbutje dhe përkeqësim) të procesit në parenkimën renale.

Për diagnozën diferenciale të sëmundjeve të sistemit gjenitourinar, përdoret përcaktimi i aktivitetit në gjak dhe urinë të enzimave të mëposhtme: laktat dehidrogjenaza (LDH), leucine aminopeptidaza (LAP), fosfataza acide (AP), fosfataza alkaline (AP) , β-glukuronidaza, glutamin-oksaloacetik transaminaza (GST), aldolaza, transamidinaza, etj. Aktiviteti i enzimave në serumin e gjakut dhe në urinë përcaktohet duke përdorur metoda biokimike, spektrofotometrike, kromatografike, fluorimetrike dhe kimilumineshente.

Enzimuria në sëmundjet e veshkave është më e theksuar dhe e rregullt se enzimemia. Është veçanërisht e theksuar në fazën akute të sëmundjes ( pielonefrit akut, trauma, prishja e tumorit, infarkti i veshkave, etj.). Në këto sëmundje, konstatohet një aktivitet i lartë i transamidinazës, LDH, fosfatazës alkaline dhe CP, hialuronidazës, LAP, si dhe enzimave të tilla jo specifike si GST, katalaza [Polyantseva LR, 1972].

Lokalizimi selektiv i enzimave në nefron me zbulimin e LAP dhe ALP në urinë na lejon të flasim me besim për akute dhe semundje kronike veshka (akute dështimi i veshkave, nekroza tubulare renale, glomerulonefriti kronik) [Shemetov V.D., 1968]. Sipas A.A. Karelin dhe L.R. Polyantseva (1965), transamidinaza gjendet vetëm në dy organe - në veshkë dhe në pankreas. Është një enzimë mitokondriale e veshkave dhe normalisht mungon në gjak dhe urinë. Me sëmundje të ndryshme të veshkave, transamidinaza shfaqet në gjak dhe urinë, dhe me dëmtim të pankreasit - vetëm në gjak.

Testi diferencial në diagnozën e glomerulonefritit dhe pielonefritit Krotkiewski (1963) merr në konsideratë aktivitetin e fosfatazës alkaline në urinë, rritja e së cilës është më tipike për pielonefritin dhe glomerulosklerozën diabetike sesa për nefritin akut dhe kronik. Rritja e dinamikës së amilazemisë me një ulje të njëkohshme të amilasurisë mund të tregojë nefrosklerozë dhe rrudhje të veshkave, LAP është më e rëndësishmja në ndryshimet patologjike në glomerulat dhe tubulat e ndërlikuara të veshkave, pasi përmbajtja e saj në këto pjesë të nefronit është më e lartë [Shepotinovsky V.P. et al., 1980]. Për diagnozën e nefritit lupus rekomandohet përcaktimi i β-glukuronidazës dhe CF [Privalenko M.N. et al., 1974].

Kur vlerësohet roli i enzimurisë në diagnostikimin e sëmundjes së veshkave, duhet të merren parasysh dispozitat e mëposhtme. Enzimat, duke qenë nga natyra e tyre proteina, me një peshë të vogël molekulare mund të kalojnë nëpër glomerula të paprekura, duke përcaktuar të ashtuquajturën enzimë fiziologjike. Midis këtyre enzimave, α-amilaza (pesha relative molekulare 45,000) dhe uropepsin (pesha relative molekulare 38,000) zbulohen vazhdimisht në urinë.

Së bashku me enzimat me molekulare të ulët në urinën e individëve të shëndetshëm, në përqendrime të vogla mund të gjenden edhe enzima të tjera: LDH, aspartat dhe aminotransferazat alanine, fosfataza alkaline dhe CP, maltaza, aldolaza, lipaza, proteazat dhe peptidazat e ndryshme, sulfataza, katalaza, ribonukleaza, peroksidaza.

Sipas Richterich (1958) dhe Hess (1962), enzimat me molekulare të lartë me një peshë molekulare relative më shumë se 70,000-100,000, mund të hyjnë në urinë vetëm nëse përshkueshmëria e filtrit glomerular është e dëmtuar. Përmbajtja normale e enzimave në urinë nuk lejon të përjashtohet procesi patologjik në veshka me mbyllje ureterale. Me epimurinë, lëshimi i enzimave është i mundur jo vetëm nga vetë veshkat, por edhe nga organet e tjera parenkimale, qelizat e mukozës së traktit urinar, gjëndra e prostatës, si dhe elementët e formuar të urinës me hematuri ose leukocituri.

Shumica e enzimave janë jospecifike për veshkat, kështu që është e vështirë të përcaktohet se nga vijnë enzimat që gjenden në urinën e njerëzve të shëndetshëm dhe të sëmurë. Megjithatë, shkalla e enzimurisë, edhe për enzimat jo specifike në dëmtimin e veshkave, është më e lartë se normalja ose ajo e vërejtur në sëmundjet e organeve të tjera. Një informacion më i vlefshëm mund të sigurohet nga një studim gjithëpërfshirës i dinamikës së një numri enzimash, veçanërisht ato specifike për organet, si transaminaza.

Në zgjidhjen e çështjes së origjinës renale të enzimës në urinë, studimi i izoenzimave ndihmon në identifikimin e fraksioneve tipike të organit në studim. Izoenzimat janë enzima që kanë veprim izogjene (katalizojnë të njëjtin reaksion), por heterogjene në strukturën kimike dhe vetitë e tjera. Çdo ind ka spektrin e vet të izoenzimës. Metodat e vlefshme për ndarjen e izoenzimave janë elektroforeza në xhelat e niseshtës dhe poliakrilamideve, si dhe kromatografia e shkëmbimit të joneve.

Proteina Bence Jones

Me mielomë të shumëfishtë dhe makroglobulinemi të Waldenström, proteina Bence-Jones gjendet në urinë. Metoda për zbulimin e kësaj proteine ​​në urinë bazohet në reaksionin e termoprecipitimit. Metodat e përdorura më parë që vlerësojnë shpërbërjen e kësaj proteine ​​në një temperaturë prej 100 ° C dhe ri-precipitimin pas ftohjes së mëvonshme janë jo të besueshme, pasi jo të gjithë trupat e proteinave Bence-Jones kanë vetitë e duhura.

Zbulimi më i besueshëm i kësaj paraproteine ​​me precipitimin e saj në një temperaturë prej 40-60 °C. Megjithatë, edhe në këto kushte, reshjet mund të mos ndodhin në shumë acid (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) urinë, me OPM të ulët dhe përqendrim të ulët të proteinës Bence-Jones. Kushtet më të favorshme për precipitimin e tij sigurohen nga metoda e propozuar nga Patnem: 4 ml urinë e filtruar përzihet me 1 ml tampon acetat 2 M pH 4,9 dhe nxehet për 15 minuta në një banjë uji në një temperaturë prej 56 °C. Në prani të proteinës Bence-Jones, një precipitat i theksuar shfaqet gjatë 2 minutave të para.

Në një përqendrim të proteinës Bence-Jones prej më pak se 3 g / l, testi mund të jetë negativ, por në praktikë kjo është jashtëzakonisht e rrallë, pasi përqendrimi i saj në urinë është zakonisht më i rëndësishëm. Nuk mund të mbështetemi plotësisht në mostrat e vlimit. Me siguri të plotë, mund të zbulohet në urinë me metodën imuno-elektroforetike duke përdorur serume specifike kundër vargjeve të rënda dhe të lehta të imunoglobulinave.

Proteina në urinë: metodat e përcaktimit

Proteinuria patologjike është një nga shenjat më të rëndësishme dhe konstante të sëmundjeve të veshkave dhe traktit urinar. Përcaktimi i përqendrimit të proteinave në urinë është një element i detyrueshëm dhe i rëndësishëm i studimit të urinës. Zbulimi dhe kuantifikimi i proteinurisë është i rëndësishëm jo vetëm në diagnostikimin e shumë sëmundjeve primare dhe dytësore të veshkave, por vlerësimi i ndryshimeve në ashpërsinë e proteinurisë në dinamikë mbart informacion për rrjedhën e procesit patologjik dhe efektivitetin e trajtimit. Zbulimi i proteinave në urinë, edhe në sasi të vogla, duhet të jetë alarmues në lidhje me sëmundje e mundshme veshkave ose traktit urinar dhe kërkon ri-analizë. Vlen të përmendet veçanërisht pakuptimësia e studimit të urinës dhe, në veçanti, përcaktimi i proteinës së urinës pa respektuar të gjitha rregullat e grumbullimit.

Të gjitha metodat për përcaktimin e proteinave në urinë mund të ndahen në:

    cilësi,

    gjysmë sasiore,

    Sasiore.

Metodat cilësore

Të gjitha teste cilësore për proteina në urinë bazuar në aftësinë e proteinave për të denatyruar nën ndikimin e faktorëve të ndryshëm fizikë dhe kimikë. Në prani të proteinave në mostrën e urinës së testuar, shfaqet turbullira ose flokulim.

Kushtet për përcaktimin e proteinave në urinë bazuar në reagimin e koagulimit:

    Urina duhet të jetë acid. Urina alkaline acidifikohet me disa (2 - 3) pika acid acetik (5 - 10%).

    Urina duhet të jetë e pastër. Turbullira hiqet përmes një filtri letre. Nëse mjegulla vazhdon, shtoni talk ose magnezi të djegur (rreth 1 lugë çaji për 100 ml urinë), tundeni dhe filtroni.

    Një kampion cilësor duhet të kryhet në dy epruveta, njëri prej tyre është ai i kontrollit.

    Shiko për turbullira duhet të jetë në një sfond të zi në dritën e transmetuar.

Metodat cilësore për përcaktimin e proteinave në urinë përfshijnë:

    Testi i unazës Heller,

    mostër me acid sulfosalicilik 15 - 20%.,

    provë e vlimit dhe të tjera.

Studime të shumta kanë treguar se asnjë nga metodat e shumta të njohura për përcaktimin cilësor të proteinave në urinë nuk jep rezultate të besueshme dhe të riprodhueshme. Përkundër kësaj, në shumicën e DLT-ve në Rusi, këto metoda përdoren gjerësisht si ekzaminim - në urinë me një reagim pozitiv cilësor, kryhet përcaktimi i mëtejshëm sasior i proteinës. Nga reaksionet cilësore, më shpesh përdoret testi Heller dhe ai i acidit sulfosalicilik, por në përgjithësi më i përshtatshmi për zbulimin e proteinurisë patologjike konsiderohet testi i acidit sulfosalicilik. Testi i vlimit aktualisht praktikisht nuk përdoret për shkak të kompleksitetit dhe kohëzgjatjes së tij.

Metodat gjysmë sasiore

te metoda gjysmë sasiore lidhen:

    Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov,

    Përcaktimi i proteinave në urinë duke përdorur shirita testues diagnostikues.

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov bazohet në testin e unazës Geller, prandaj, me këtë metodë, vërehen të njëjtat gabime si me testin Geller.

Aktualisht, shiritat diagnostikues përdoren gjithnjë e më shumë për të përcaktuar proteinën në urinë. Ngjyra blu e bromfenolit në tampon citrat përdoret më shpesh si një tregues për përcaktimin gjysmë sasior të proteinës në urinë në një shirit. Përmbajtja e proteinave në urinë gjykohet nga intensiteti i ngjyrës blu-jeshile që zhvillohet pas kontaktit të zonës së reagimit me urinën. Rezultati vlerësohet vizualisht ose duke përdorur analizues të urinës. Megjithë popullaritetin e madh dhe avantazhet e dukshme të metodave të kimisë së thatë (thjeshtësia, shpejtësia e analizës), këto metoda të urinës në përgjithësi dhe të përcaktimit të proteinave në veçanti nuk janë pa mangësi serioze. Një prej tyre, që çon në një shtrembërim të informacionit diagnostik, është ndjeshmëria më e madhe e treguesit të bromofenol blu ndaj albuminës në krahasim me proteinat e tjera. Në këtë drejtim, shiritat e testimit janë përshtatur kryesisht për zbulimin e proteinurisë selektive glomerulare, kur pothuajse e gjithë proteina e urinës përfaqësohet nga albumina. Me ecurinë e ndryshimeve dhe kalimin e proteinurisë selektive glomerulare në jo selektive (shfaqja e globulinave në urinë), rezultatet e përcaktimit të proteinave nënvlerësohen në krahasim me vlerat e vërteta. Ky fakt e bën të pamundur përdorimin e kësaj metode për përcaktimin e proteinave në urinë për të vlerësuar gjendjen e veshkave (filtri glomerular) në dinamikë. Me proteinurinë tubulare, rezultatet e përcaktimit të proteinave janë gjithashtu të nënvlerësuara. Testimi i proteinave me shirita testimi nuk është një tregues i besueshëm i niveleve të ulëta të proteinurisë (shumica e shiritave të testimit të disponueshëm aktualisht nuk janë në gjendje të zbulojnë proteina në urinë në përqendrime më të ulëta se 0.15 g/L). Rezultatet negative të përcaktimit të proteinave në shirita nuk përjashtojnë praninë e globulinave, hemoglobinës, uromukoidit, proteinës Bence-Jones dhe paraproteinave të tjera në urinë.

Thekonet e mukusit me një përmbajtje të lartë glikoproteinash (për shembull, në proceset inflamatore në traktin urinar, piuria, bakteriuria) mund të vendosen në zonën treguese të shiritit dhe të çojnë në rezultate pozitive false. Rezultatet false pozitive gjithashtu mund të shoqërohen me përqendrime të larta ure. Ndriçimi i dobët dhe perceptimi i dobët i ngjyrave mund të shkaktojnë rezultate të pasakta.

Në këtë drejtim, përdorimi i shiritave diagnostikues duhet të kufizohet në procedurat e shqyrtimit, dhe rezultatet e marra me ndihmën e tyre duhet të konsiderohen vetëm si tregues.

Metodat sasiore

E sakte përcaktimi sasior i proteinave në urinë në disa raste rezulton të jetë një detyrë e vështirë. Vështirësitë e zgjidhjes së tij përcaktohen nga numri i faktorëve të mëposhtëm:

    prania në urinë e shumë komponimeve që mund të ndërhyjnë në rrjedhën e reaksioneve kimike;

    luhatje të konsiderueshme në përmbajtjen dhe përbërjen e proteinave të urinës në sëmundje të ndryshme, duke e bërë të vështirë zgjedhjen e një materiali adekuat kalibrues.

Në laboratorët klinikë përdoren kryesisht metodat e ashtuquajtura "rutinë" për përcaktimin e proteinave në urinë, por jo gjithmonë ato japin rezultate të kënaqshme.

Nga këndvështrimi i një analisti që punon në një laborator, një metodë e krijuar për të përcaktuar sasinë e proteinave në urinë duhet të plotësojë kërkesat e mëposhtme:

    kanë një lidhje lineare midis përthithjes së kompleksit të formuar gjatë reaksionit kimik dhe përmbajtjes së proteinave në kampion në një gamë të gjerë përqendrimesh, gjë që do të shmangë operacione shtesë gjatë përgatitjes së mostrës për kërkime;

    duhet të jetë e thjeshtë, të mos kërkojë kualifikim të lartë të interpretuesit, të kryhet me një numër të vogël operacionesh;

    kanë ndjeshmëri të lartë, besueshmëri analitike kur përdorni vëllime të vogla të materialit testues;

    të jetë rezistent ndaj faktorëve të ndryshëm (luhatje në përbërjen e kampionit, prania e barnave, etj.);

    kanë një kosto të pranueshme;

    të jetë lehtësisht i adaptueshëm me autoanalizuesit;

    rezultati i përcaktimit nuk duhet të varet nga përbërjen e proteinave testimi i mostrës së urinës.

Asnjë nga metodat e njohura aktualisht për përcaktimin sasior të proteinave në urinë nuk mund të pretendojë plotësisht se është "standardi i artë".

Metodat sasiore për përcaktimin e proteinave në urinë mund të ndahen në turbidimetrike dhe kolorimetrike.

Metodat turbidimetrike

Metodat turbidimetrike përfshijnë:

    përcaktimi i proteinave me acid sulfosalicilik (SSK),

    përcaktimi i proteinave acidi trikloroacetik(THE),

    përcaktimi i proteinës me klorur benzetonium.

Metodat turbidimetrike bazohen në një ulje të tretshmërisë së proteinave të urinës për shkak të formimit të një pezullimi të grimcave të pezulluara nën ndikimin e agjentëve precipitues. Përmbajtja e proteinës në kampionin e provës gjykohet ose nga intensiteti i shpërndarjes së dritës, i përcaktuar nga numri i grimcave që shpërndajnë dritën (metoda nefelometrike e analizës), ose nga dobësimi i fluksit të dritës nga pezullimi që rezulton (metoda turbidimetrike e analizës ).

Sasia e shpërndarjes së dritës në metodat e precipitimit për zbulimin e proteinave në urinë varet nga shumë faktorë: shpejtësia e përzierjes së reagentëve, temperatura e përzierjes së reaksionit, vlera e pH e mediumit, prania e përbërjeve të huaja, metodat fotometrike. Vëzhgimi i kujdesshëm i kushteve të reaksionit kontribuon në formimin e një pezullimi të qëndrueshëm me një madhësi grimce konstante dhe në marrjen e rezultateve relativisht të riprodhueshme.

Disa barna ndërhyjnë në rezultatet e metodave turbidimetrike për përcaktimin e proteinave në urinë, duke çuar në të ashtuquajturat rezultate "false pozitive" ose "false negative". Këto përfshijnë disa antibiotikë (benzilpenicilinë, kloksacilinë, etj.), substanca radiopake që përmbajnë jod, preparate sulfanilamide.

Metodat turbidimetrike janë të vështira për t'u standardizuar dhe shpesh çojnë në rezultate të gabuara, por pavarësisht kësaj, ato aktualisht përdoren gjerësisht në laboratorë për shkak të kostos së ulët dhe disponueshmërisë së reagentëve. Metoda më e përdorur në Rusi është përcaktimi i proteinave me acid sulfosalicilik.

Metodat kolorimetrike

Më të ndjeshmet dhe të sakta janë metodat kolorimetrike për përcaktimin e proteinës totale të urinës, bazuar në reaksionet specifike të ngjyrave të proteinave.

Kjo perfshin:

    reaksioni i biuretit,

    metoda e ulët,

    metoda të bazuara në aftësinë e ngjyrave të ndryshme për të formuar komplekse me proteina:

    Ponceau S (Ponceau S),

    Coomassie Brilliant Blue (Coomassie Brilliant Blue)

    pirogallol i kuq (Pyrogalol Red).

Nga këndvështrimi i interpretuesit, në punën e përditshme të laboratorit me një fluks të madh kërkimesh, metoda biurete është e papërshtatshme për shkak të numrit të madh të operacioneve. Në të njëjtën kohë, metoda karakterizohet nga një besueshmëri e lartë analitike, lejon përcaktimin e proteinave në një gamë të gjerë përqendrimesh dhe zbulimin e albuminës, globulinave dhe paraproteinave me ndjeshmëri të krahasueshme, si rezultat i së cilës metoda biurete konsiderohet si një referencë dhe rekomandohet për krahasimin e metodave të tjera analitike për zbulimin e proteinave në urinë. Metoda biurete për përcaktimin e proteinave në urinë preferohet të kryhet në laboratorë që shërbejnë në departamentet nefrologjike dhe përdoret në rastet kur rezultatet e përcaktimit duke përdorur metoda të tjera janë të dyshimta, si dhe për të përcaktuar sasinë e humbjes ditore të proteinave në pacientët nefrologjikë.

Metoda Lowry, e cila ka një ndjeshmëri më të lartë se metoda biurete, kombinon reaksionin e biuretit dhe reaksionin Folin për aminoacidet tirozinë dhe triptofan në molekulën e proteinës. Megjithë ndjeshmërinë e saj të lartë, kjo metodë nuk jep gjithmonë rezultate të besueshme në përcaktimin e përmbajtjes së proteinave në urinë. Arsyeja për këtë është ndërveprimi jo specifik i reagentit të Folinit me përbërësit joproteinikë të urinës (më shpesh aminoacide, acid urik, karbohidrate). Ndarja e këtyre dhe komponentëve të tjerë urinar me dializë ose precipitim të proteinave lejon që kjo metodë të përdoret me sukses për përcaktimin sasior të proteinave në urinë. Disa ilaçe - salicilatet, klorpromazina, tetraciklinat mund të ndikojnë në këtë metodë dhe të shtrembërojnë rezultatet e studimit.

Ndjeshmëria e mjaftueshme, riprodhueshmëria e mirë dhe lehtësia e përcaktimit të proteinave me lidhjen e bojës i bëjnë këto metoda premtuese, por kostoja e lartë e reagentëve pengon përdorimin e tyre më të gjerë në laboratorë. Aktualisht, metoda me pirogallol të kuqe po bëhet më e përhapur në Rusi.

Gjatë ekzaminimit të nivelit të proteinurisë, duhet pasur parasysh se metoda të ndryshme për përcaktimin e proteinurisë kanë ndjeshmëri dhe specifikë të ndryshme për proteinat e shumta të urinës.

Bazuar në të dhënat empirike, rekomandohet të përcaktohet proteina me dy metoda të ndryshme dhe të llogaritet vlerën e vërtetë sipas njërës prej formulave të mësipërme: proteinuria = 0,4799 B + 0,5230 L; proteinuria = 1,5484 B - 0,4825 S; proteinuria = 0,2167 S + 0,7579 L; proteinuria = 1,0748 P - 0,0986 B; proteinuria = 1,0104 P - 0,0289 S; proteinuria = 0,8959 P + 0,0845 L; ku B është rezultati i matjes me Coomassie G-250; L është rezultat i matjes me reagentin Lowry; P është rezultati i matjes me molibdat pirogallol; S është rezultat i matjes me acid sulfosalicilik.

Duke marrë parasysh luhatjet e theksuara të nivelit të proteinurisë në periudha të ndryshme të ditës, si dhe varësinë e përqendrimit të proteinave në urinë nga diureza, përmbajtjen e saj të ndryshme në pjesë të veçanta të urinës, tani është zakon të vlerësohet ashpërsia e proteinurisë në patologjinë e veshkave nga humbja ditore e proteinave në urinë, domethënë për të përcaktuar të ashtuquajturën proteinuri ditore. Shprehet në g/ditë.

Nëse është e pamundur të grumbullohet urinë ditore, rekomandohet të përcaktohet përqendrimi i proteinave dhe kreatininës në një pjesë të vetme të urinës. Meqenëse shkalla e çlirimit të kreatininës gjatë ditës është mjaft konstante dhe nuk varet nga ndryshimet në shkallën e urinimit, raporti i përqendrimit të proteinave ndaj përqendrimit të kreatininës është konstant. Ky raport lidhet mirë me ekskretimin ditor të proteinave dhe, për rrjedhojë, mund të përdoret për të vlerësuar ashpërsinë e proteinurisë. Normalisht, raporti proteinë/kreatininë duhet të jetë më pak se 0.2. Proteina dhe kreatinina maten në g/l. Një avantazh i rëndësishëm i metodës për vlerësimin e ashpërsisë së proteinurisë sipas raportit protein-kreatininë është eliminimi i plotë i gabimeve që lidhen me pamundësinë ose mbledhjen jo të plotë të urinës ditore.

Literatura:

    O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "Aspekte klinike të zbulimit dhe vlerësimit të proteinurisë", Manuali i kreut të CDL, nr. 1, janar 2007

    A. V. Kozlov, "Proteinuria: metodat për zbulimin e saj", leksion, Shën Petersburg, SPbMAPO, 2000

    V. L. Emanuel, " Diagnostifikimi laboratorik sëmundjet e veshkave. Sindroma Urinare”, - Manual i kreut të CDL-së, nr.12, dhjetor 2006.

    NË DHE. Pupkova, L.M. Prasolova - Metodat për përcaktimin e proteinave në urinë (rishikim i të dhënave të literaturës)

    Manuali i Klinikës metodat laboratorike kërkimore. Ed. E. A. Kost. Moskë, "Mjekësia", 197

Të gjitha metodat për përcaktimin e proteinave në urinë bazohen në koagulimin e proteinave nën ndikimin e agjentëve kimikë ose termikë. Në prani të proteinave në urinë, shfaqet turbullira, shkalla e së cilës varet nga sasia e proteinave.

A) testet e cilësisë përcaktimi i proteinave në urinë - janë të detyrueshme.

1. Mostra me acid nitrik- në një epruvetë me 1-2 ml tretësirë ​​të acidit nitrik 50%, shtrojmë me kujdes një sasi të barabartë të urinës, duke u përpjekur të mos shkundni lëngun. Në rastin e pranisë së proteinave në urinë, në kufirin e dy lëngjeve shfaqet një unazë e bardhë, e parë më mirë në një sfond të zi.

2. Mostra me acid sulfasalicilik- Në epruvetë hidhen 4-5 ml urinë dhe shtohen 8-10 pika reagent. Në prani të proteinave në urinë, në varësi të sasisë së saj, mund të ndodhë turbullira ose flokulim.

3. Testi ekspres (testi diagnostikues i thatë)- një rrip letre treguese "Albufan" është zhytur në urinën e testit në mënyrë që të dy zonat treguese të lagen njëkohësisht (zona e sipërme është për përcaktimin e pH, ajo e poshtme është për përcaktimin e proteinave). Pas 2-3 sekondash, shiriti vendoset në një pjatë xhami të bardhë. Vlerësimi kryhet 60 sekonda pas njomjes së shiritit me urinë, duke përdorur një shkallë ngjyrash të printuar në kasë me shirita tregues.

B) mostrat sasiore- kryhet në ato pjesë të urinës ku proteina është gjetur gjatë saj përkufizim cilësor; përcaktimi kryhet në supernatant pas centrifugimit

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov- 1-3 ml tretësirë ​​të acidit nitrik 50% hidhet në një epruvetë dhe e njëjta sasi e urinës shtrohet me kujdes përgjatë murit. Koha regjistrohet në një kronometër. Nëse unaza në ndërfaqen e lëngjeve formohet menjëherë ose më herët se 2 minuta pas shtresimit, urina duhet të hollohet me ujë. Pas kësaj, kryhet një përcaktim i përsëritur i proteinave në urinën e holluar. Hollimi kryhet derisa të shfaqet një unazë e bardhë midis minutave të 2-të dhe të 3-të, kur urina e holluar shtohet në acidin nitrik. Sasia e proteinës përcaktohet duke shumëzuar 0.033 ppm me shkallën e hollimit.

18. Teknika e marrjes së strisheve për florën, gonokoket, trichomonas, ekzaminim citologjik, KPI.

Teknika e njollosjes së florës: materiali merret nga kanali i qafës së mitrës dhe nga uretra me një furçë të veçantë nën kontroll vizual. Mostra që rezulton vendoset menjëherë në një rrëshqitje xhami dhe triturohet.

Teknika për marrjen e njollave për Trichomonas: së pari, materiali merret me gërvishtje nga mukoza e uretrës (pas masazhit paraprak të saj për 1 min në simfizën pubike) dhe forniksi i pasmë i vaginës, më pas pjesa vaginale e qafës së mitrës fshihet me shtupë sterile e lagur me kripë, priza mukoze hiqet, në kanali i qafës së mitrës me kujdes, futet një sondë në një thellësi jo më shumë se 1,0-1,5 cm dhe merret një kruarje nga mukoza e qafës së mitrës.

Teknika e njollosjes për gonokokët: materiali merret nga uretra, gjëndrat Bartholin dhe pasazhet parauretrale pasi i fshini me një shtupë pambuku të lagur me kripë, piskatore vaginale ose sondë speciale. Nga rektumi, materiali merret me një lugë të mprehtë. Në gonorrenë kronike dhe torpide, bëhet një provokim përpara studimit për të rritur mundësinë e identifikimit të patogjenit.

Ju nuk mund ta merrni materialin me një shtupë pambuku dhe gjatë menstruacioneve.

Teknika e marrjes së strisheve për ekzaminim citologjik: merret një njollë nga sipërfaqja e ekzocerviksit, vaginës dhe vulvës me një shpatull, nga endocerviksi - me një furçë endo. Materiali aplikohet shtrese e holle në xhami të skremuar të trajtuar posaçërisht dhe të përpunuar përbërje të veçantë për të parandaluar tharjen e qelizave. Preparatet ngjyrosen sipas metodës Papanicolaou (i ashtuquajturi Pap test) dhe mikroskopi.

Indeksi kariopiknotik- përqindja e qelizave sipërfaqësore me bërthama piknotike ndaj qelizave me bërthama vezikulare (jo piknotike). CRPD në fillim të fazës folikulare cikli menstrual 25-30%, deri në kohën e ovulacionit 60-70%, në fazën luteale zvogëlohet në 25%.

Udhëzim

Metodat cilësore për përcaktimin e proteinave në urinë: Metoda Heller, testi i acidit sulfosalicilik 20%, testi i vlimit etj. Metodat gjysmë sasiore: përdorimi i shiritave testues diagnostikues për përcaktimin e proteinave në urinë, Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov. Metodat sasiore: turbidimetrike dhe kolorimetrike.

Përcaktimi i proteinave në ditë urinë në një përqendrim prej 0.033 g/litër ose më shumë është një patologji. Si rregull, në pjesën e mëngjesit të urinës, përqendrimi i proteinave nuk kalon 0,002 g / l, dhe në ditë urinë përqendrimi i proteinave nuk është më shumë se 50-150 mg proteina.

Burimet:

  • përcaktimi i proteinave në urinë

Urina është produkt i metabolizmit të njeriut. Ajo formohet gjatë filtrimit të gjakut në veshka, prandaj përbërja e urinës jep një përshkrim të qartë të gjendjes së trupit të njeriut.

Urina është një zgjidhje komplekse e më shumë se 150 komponimeve. Disa substanca specifike, për shembull, acetoni, acidet biliare, proteinat, glukoza, mund të jenë të pranishme vetëm në disa sëmundje.

Për të kontrolluar shëndetin e njeriut, para së gjithash, është e nevojshme të përcaktohet sasia e urinës. Norma është formimi i 1-1,8 litra urinë në ditë. Kur ekskretohet më shumë se 2 litra urinë, kjo është një shenjë e një shkelje të mundshme në punën e veshkave, diabetit dhe një sërë sëmundjesh të tjera. Nëse formohet më pak se 0,5 litra urinë në ditë, ka një bllokim të ureterit ose fshikëzës.

ngjyra e urinës

Ngjyra e urinës së ekskretuar varet nga shumë faktorë, kështu që mund të ndryshojë, duke filluar nga e verdha e lehtë në portokalli. Prania e nuancave të caktuara mund të ndikohet nga ushqime të caktuara, si dhe medikamentet e marra nga një person.

Pas marrjes së medikamenteve, urina mund të njolloset dhe të marrë një nuancë të kuqërremtë. Nëse një person është duke lëvizur në mënyrë aktive, ndërsa ai lëshon një sasi të madhe djerse, urina do të ketë një e verdhe, si dhe kur merrni fonde të tilla si Nitroxoline ose Biomycin.

Nëse një person nuk ka marrë ushqime dhe ilaçe ngjyrosëse, por ngjyra e urinës së tij është e ndryshme nga zakonisht, mund të dyshohet për praninë e një sëmundjeje në trup. Për shembull, në sëmundjet e mëlçisë, urina do të ketë një ngjyrë të verdhë të errët ose të gjelbër.

Prania e gjakut në urinën e ekskretuar tregon qartë praninë e një guri në ose gjakderdhje renale, nëse vërehet edhe dhimbje.

Nëse urinimi është i vështirë, kjo mund të tregojë një proces inflamator të shkaktuar nga një infeksion në fshikëz. Dhe këtu është e pista urinë e turbullt dëshmon për sëmundje të rënda veshkat.

Proteina në urinë

Nuk ka proteinë në gjakun e një personi ose sasia e saj është aq e vogël sa nuk mund të përcaktohet me anë të analizave laboratorike. Nëse një proteinë zbulohet në urinë, është e nevojshme të kryhen teste të përsëritura, pasi ajo mund të jetë e pranishme kur një person zgjohet në mëngjes, si dhe pas punës së rëndë fizike ose ushtrimeve te atletët.

Për të përcaktuar vizualisht nëse proteina është e pranishme në urinë apo jo është 100% e pamundur. Mund të merret me mend vetëm kur ka një sasi të madhe të thekoneve të bardha në urinë.

Nëse proteina në urinë zbulohet në mënyrë të përsëritur, kjo tregon praninë e një lloj sëmundjeje të veshkave. Proceset inflamatore që ndodhin në to, provokojnë një rritje të lehtë të sasisë së proteinave. Nëse më shumë se 2 gram ekskretohen në urinë, kjo është sinjal alarmi.

Pyelonefriti është sëmundje inflamatore, në të cilën preken legeni renale, kaliket dhe parenkima. Në shumicën e rasteve, inflamacioni shkaktohet nga infeksion bakterial. Shërimi i plotë është i mundur vetëm me diagnozë në kohë, prandaj, kur shfaqen simptomat, është i nevojshëm një ekzaminim i plotë.