Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման մեթոդներ. Քանակական գնահատման մեթոդներ. Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման մեթոդներ

26.02.2009

Կուրիլյակ Օ.Ա., բ.գ.թ.

Սովորաբար, սպիտակուցը արտազատվում է մեզի մեջ համեմատաբար փոքր քանակությամբ, սովորաբար ոչ ավելի, քան 100-150 մգ / օր:

Առողջ մարդու մոտ օրական դիուրեզը կազմում է 1000-1500 մլ/օր; Այսպիսով, սպիտակուցի կոնցենտրացիան ֆիզիոլոգիական պայմաններում կազմում է 8-10 մգ/դլ (0,08-0,1 գ/լ):

Մեզի ընդհանուր սպիտակուցը ներկայացված է երեք հիմնական ֆրակցիաներով՝ ալբումիններ, մուկոպրոտեիններ և գլոբուլիններ:

Մեզի ալբումինը շիճուկի ալբումինի այն մասնաբաժինն է, որը զտվել է գլոմերուլում և չի վերաներծվել երիկամային խողովակներ; նորմալ մեզի մեջ ալբումինի արտազատումը օրական 30 մգ-ից պակաս է: Մեզում սպիտակուցի մեկ այլ հիմնական աղբյուրը երիկամային խողովակներն են, հատկապես խողովակների հեռավոր հատվածը: Այս խողովակները արտազատում են մեզի ընդհանուր սպիտակուցի երկու երրորդը; Այս քանակի մոտ 50%-ը ներկայացված է Tamm-Horsfall գլիկոպրոտեինով, որը արտազատվում է հեռավոր խողովակների էպիթելի միջոցով և կարևոր դեր է խաղում ձևավորման մեջ։ միզաքարեր. Այլ սպիտակուցներ առկա են մեզի մեջ փոքր գումարև առաջանում են երիկամային ֆիլտրով զտված ցածր մոլեկուլային քաշի պլազմայի սպիտակուցներից, որոնք չեն վերաներծծվում երիկամային խողովակներում, երիկամային խողովակային էպիթելիում (RTE) միկրոգլոբուլիններից և շագանակագեղձի և հեշտոցային սեկրեցներից:

Proteinuria-ն, այսինքն՝ մեզի մեջ սպիտակուցի պարունակության ավելացումը, երիկամների վնասումն արտացոլող ամենակարևոր ախտանիշներից մեկն է։ Այնուամենայնիվ, ամբողջ գիծըայլ պայմաններ կարող են ուղեկցվել նաև պրոտեինուրիայով: Ուստի սպիտակուցի երկու հիմնական խումբ կա՝ երիկամային (ճշմարիտ) և արտաերիկամային (կեղծ) պրոտեինուրիա։

Երիկամային պրոտեինուրիայի դեպքում սպիտակուցը մեզի մեջ է մտնում անմիջապես արյունից՝ գլոմերուլային ֆիլտրի թափանցելիության բարձրացման պատճառով: Երիկամային պրոտեինուրիան հաճախ հանդիպում է գլոմերուլոնեֆրիտների, նեֆրոզների, պիելոնեֆրիտների, նեֆրոսկլերոզի, երիկամային ամիլոիդոզի, տարբեր ձևերնեֆրոպաթիաներ, օրինակ՝ հղիության նեֆրոպաթիա, տենդային պայմաններ, հիպերտոնիաև այլն: Առողջ մարդկանց մոտ պրոտեինուրիա կարող է հայտնաբերվել նաև ծանր ֆիզիկական ծանրաբեռնվածությունից, հիպոթերմային, հոգեբանական սթրեսից հետո։ Կյանքի առաջին շաբաթների նորածինների մոտ նկատվում է ֆիզիոլոգիական պրոտեինուրիա, իսկ երեխաների և դեռահասների մոտ ասթենիա՝ համակցված արագ աճ 7-18 տարեկանում հնարավոր է օրթոստատիկ պրոտեինուրիա (մարմնի ուղիղ դիրքում)։

Կեղծ (արտաքինային) պրոտեինուրիայի դեպքում մեզի մեջ սպիտակուցի աղբյուրը լեյկոցիտների, էրիթրոցիտների և միզուղիների էպիթելի միզաքարային բջիջների խառնուրդն է: Այս տարրերի քայքայումը հատկապես արտահայտված է ալկալային ռեակցիամեզի, հանգեցնում է սպիտակուցի ներթափանցմանը մեզի մեջ, որն արդեն անցել է երիկամային ֆիլտրը: Հատկապես բարձր աստիճանկեղծ պրոտեինուրիան մեզի մեջ արյան խառնուրդ է տալիս, առատ հեմատուրիայով այն կարող է հասնել 30 գ/լ կամ ավելի: Հիվանդություններ, որոնք կարող են ուղեկցվել էքստրենալ պրոտեինուրիայով. միզաքարային հիվանդություն, երիկամի տուբերկուլյոզ, երիկամների կամ միզուղիների ուռուցքներ, ցիստիտ, պիելիտ, պրոստատիտ, ուրետրիտ, վուլվովագինիտ։

Կլինիկական դասակարգումը ներառում է թեթև պրոտեինուրիա (0,5 գ/օրից պակաս), միջին (0,5-ից 4 գ/օր) կամ ծանր (օրական 4 գ-ից ավելի):

Երիկամների հիվանդություններով հիվանդների մեծ մասը, ինչպիսիք են սուր գլոմերուլոնեֆրիտը կամ պիելոնեֆրիտը, ունեն թեթև պրոտեինուրիա, սակայն նեֆրոտիկ համախտանիշով հիվանդները սովորաբար օրական ավելի քան 4 գ սպիտակուց են արտազատում մեզի մեջ:

Սպիտակուցի քանակական որոշման համար օգտագործվում են մեթոդների լայն շրջանակ, մասնավորապես՝ Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկովի միասնական մեթոդը, բիուրետ մեթոդը, սուլֆոսալիսիլիկ թթվի կիրառման եղանակը, Coomassie կապույտ ներկի, պիրոգալոլի կարմիր ներկի և այլն։

Մեզում սպիտակուցի որոշման տարբեր մեթոդների կիրառումը հանգեցրել է մեզի մեջ սպիտակուցի նորմալ պարունակության սահմանների մեկնաբանության լուրջ շփոթության: Քանի որ լաբորատորիաներում ամենից հաճախ օգտագործվում են 2 մեթոդ՝ սուլֆոսալիցիլաթթվով և պիրոգալոլ կարմիր ներկով, մենք կդիտարկենք դրանց համար նորմերի սահմանների ճիշտության խնդիրը։ Սովորական մեզի մեջ սուլֆոսալիցիլային մեթոդի դիրքից սպիտակուցի պարունակությունը չպետք է գերազանցի 0,03 գ/լ, պիրոգալոլի մեթոդի դիրքից՝ 0,1 գ/լ: Տարբերությունները եռակի!

Սուլֆոսալիցիլաթթվի օգտագործման ժամանակ մեզի մեջ սպիտակուցների կոնցենտրացիայի նորմայի ցածր արժեքները պայմանավորված են հետևյալ կետերով.

• տրամաչափման կորը կառուցված է ըստ ջրային լուծույթալբումին. Իր բաղադրությամբ մեզը շատ է տարբերվում ջրից՝ pH, աղեր, ցածր մոլեկուլային քաշի միացություններ (կրեատինին, միզանյութ և այլն): Արդյունքում, ըստ Ալթշուլերի, Ռակովի և Տկաչևի, մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման սխալը կարող է լինել 3 անգամ կամ ավելի: Նրանք. ճիշտ որոշման արդյունքները կարելի է ձեռք բերել միայն այն դեպքերում, երբ մեզը շատ ցածր է տեսակարար կշիռըև իր կազմով և pH-ով մոտենում է ջրին.
• սուլֆոսալիսիլիկ մեթոդի ավելի բարձր զգայունություն ալբումինի նկատմամբ՝ համեմատած այլ սպիտակուցների հետ (մինչդեռ, ինչպես նշվեց վերևում, նորմալ մեզի նմուշներում ալբումինը չի գերազանցում մեզի ընդհանուր սպիտակուցի 30%-ը);
• եթե մեզի pH-ը տեղափոխվում է ալկալային կողմ, ապա սուլֆոսալիսիլիկ թթուն չեզոքացվում է, ինչը նաև սպիտակուցի որոշման արդյունքների թերագնահատման պատճառ է հանդիսանում.
• նստվածքների նստվածքի արագությունը ենթակա է էական տատանումների, եթե ոչ բարձր կոնցենտրացիաներսպիտակուցի տեղումները դանդաղում են, և ռեակցիայի վաղ դադարեցումը հանգեցնում է արդյունքի թերագնահատմանը.
• Տեղումների ռեակցիայի արագությունը էապես կախված է ռեակցիայի խառնուրդի խառնումից: Սպիտակուցների բարձր կոնցենտրացիաների դեպքում խողովակի ուժեղ թափահարումը կարող է հանգեցնել խոշոր փաթիլների առաջացման և դրանց արագ նստեցմանը:

Մեթոդի վերը նշված բոլոր հատկանիշները հանգեցնում են մեզի մեջ որոշված ​​սպիտակուցի կոնցենտրացիայի զգալի թերագնահատմանը: Թերագնահատման աստիճանը մեծապես կախված է որոշակի մեզի նմուշի բաղադրությունից: Քանի որ սուլֆոսալիցիլաթթվի մեթոդը տալիս է սպիտակուցի թերագնահատված կոնցենտրացիաներ, այս մեթոդի նորմալ սահմանը՝ 0,03 գ/լ, նույնպես թերագնահատված է մոտ երեք անգամ՝ համեմատած կլինիկական լաբորատոր ախտորոշման օտարերկրյա տեղեկատու գրքերի տվյալների հետ:

Արևմտյան երկրների լաբորատորիաների ճնշող մեծամասնությունը հրաժարվել է մեզի մեջ սպիտակուցի կոնցենտրացիան որոշելու համար սուլֆոսալիցիլային մեթոդի օգտագործումից և ակտիվորեն օգտագործում է պիրոգալոլի մեթոդը այդ նպատակով: Պիրոգալոլի մեթոդը մեզի և այլ կենսաբանական հեղուկների մեջ սպիտակուցի կոնցենտրացիան որոշելու համար հիմնված է գունավոր համալիրի օպտիկական խտության չափման ֆոտոմետրիկ սկզբունքի վրա, որը ձևավորվում է սպիտակուցի մոլեկուլների փոխազդեցությամբ Պիրոգալոլ Կարմիր ներկերի և նատրիումի մոլիբդատի համալիրի մոլեկուլների հետ ( Պիրոգալոլ Կարմիր-Մոլիբդատ համալիր):

Ինչո՞ւ է պիրոգալոլի մեթոդն ապահովում մեզի սպիտակուցի ավելի ճշգրիտ չափումներ: Նախ, ռեակցիայի խառնուրդում մեզի նմուշի ավելի մեծ նոսրացման պատճառով: Եթե ​​սուլֆոսալիցիլային մեթոդում մեզի նմուշ/ռեակտիվ հարաբերակցությունը 1/3 է, ապա պիրոգալոլի մեթոդում այն ​​կարող է տատանվել 1/12,5-ից մինչև 1/60՝ կախված մեթոդի տարբերակից, ինչը զգալիորեն նվազեցնում է մեզի բաղադրության ազդեցությունը մարմնի վրա: չափման արդյունք. Երկրորդ, ռեակցիան ընթանում է սուկինատային բուֆերում, այսինքն՝ կայուն pH-ով: Եվ, վերջապես, մեթոդի բուն սկզբունքը, կարելի է ասել, ավելի «թափանցիկ» է։ Նատրիումի մոլիբդատը և պիրոգալոլի կարմիր ներկը սպիտակուցի մոլեկուլով բարդույթ են կազմում: Սա հանգեցնում է նրան, որ ներկանյութի մոլեկուլները ազատ վիճակում, որոնք լույս չեն ներծծում 600 նմ ալիքի երկարությամբ, կլանում են լույսը սպիտակուցի հետ համատեղ։ Այսպիսով, մենք յուրաքանչյուր սպիտակուցի մոլեկուլ նշում ենք ներկով, և արդյունքում մենք գտնում ենք, որ ռեակցիայի խառնուրդի օպտիկական խտության փոփոխությունը 600 նմ ալիքի երկարության վրա հստակորեն կապված է մեզի մեջ սպիտակուցի կոնցենտրացիայի հետ: Ավելին, քանի որ կարմիր պիրոգալոլի հարաբերակցությունը տարբեր սպիտակուցային ֆրակցիաների համար գրեթե նույնն է, մեթոդը թույլ է տալիս որոշել մեզի ընդհանուր սպիտակուցը: Հետեւաբար, սահմանը նորմալ արժեքներմեզի մեջ սպիտակուցի կոնցենտրացիան 0,1 գ/լ է (նշված է կլինիկական և լաբորատոր ախտորոշման բոլոր ժամանակակից արևմտյան ուղեցույցներում, ներառյալ «Լաբորատոր թեստերի կլինիկական ուղեցույցը», խմբագրված Ն. Տիցի կողմից): Պիրոգալոլի և սուլֆոսալիսիլիկ մեթոդների համեմատական ​​բնութագրերը մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման համար ներկայացված են Աղյուսակ 1-ում:

Եզրափակելով, ես կցանկանայի ևս մեկ անգամ կենտրոնանալ այն փաստի վրա, որ երբ լաբորատորիան անցնում է մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման սուլֆոսալիսիլիկ մեթոդից պիրոգալոլի մեթոդին, նորմալ արժեքների սահմանը զգալիորեն աճում է (0,03 գ/լ-ից մինչև 0,1 գ: /լ!): Այս մասին լաբորատոր անձնակազմը պետք է անպայման տեղեկացնի բժիշկներին, քանի որ. Այս իրավիճակում պրոտեինուրիայի ախտորոշումը կարող է կատարվել միայն այն դեպքում, երբ մեզի մեջ սպիտակուցի պարունակությունը գերազանցում է 0,1 գ/լ-ը:

Մատենագիտություն.

1. Altshuler B.Yu., Rakov S.S., Tkachev G.A. // Հարց. մեղր. քիմիա։ - 2001. - No 4. - C.426-438.
2. Կիմ Յու.Վ., Պոտեխին Օ.Է., Տոկար Մ.Ի., Շիբանով Ա.Ն. // Լաբորատորիա մեղր. - 2003. - No 6. - C.94-98.
3. Լաբորատոր թեստերի կլինիկական ուղեցույց, խմբ. N. Titsa.- M.- Unimed-press.-2003.- 942 p.
4. Կոզլով Ա.Վ., Սլեպիշևա Վ.Վ. Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման մեթոդներ. հնարավորություններ և հեռանկարներ // VII տարեկան աշխատանքների ժողովածու. SPb նեֆրոլ. սեմինար. - Սանկտ Պետերբուրգ: TNA. - 1999. - Գ.17-28.
5. Պուպկովա Վ.Ի., Պիկալով Ի.Վ., Խրիկինա Է.Ն., Խարկովսկի Ա.Վ. // Նորություններ «Վեկտոր-Լավագույն». - 2003. - Թիվ 4 (30).
6. Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Անն. Քլին. Կենսաքիմ. - 1991. - Հատ. 28 (Պտ 5): - P.467-473.
7. Կլինիկական լաբորատորիաներ բժշկություն. Էդ. Քենեթ Դ. Մաքքլաչիի կողմից: - 2-րդ հրատ.-2001.- 1993 p.
8. Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // կլինիկա. Կենսաքիմ. - 2000. - Հատ. 33.-Պ.487-494.
9. Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Միզուղիների սպիտակուցի վերլուծության կազմը և սարքը և նույնը օգտագործելու եղանակը // ԱՄՆ արտոնագիր No 5326707. - 1994 թ.
10. Կապլան Ի.Վ., Լևինսոն Ս.Ս. // կլինիկա. Քիմ. - 1999. - Հատ. 45.-Պ.417-419.
11. Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. Մեդ. - 2003. - Հատ. 70 (6). - P.535-547.
12. Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // կլինիկա. Քիմ. - 2001. - Հատ. 47.-Պ.2183-2184.
13. Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Հոդված ֆրանսերենով: - Անն. Բիոլ. Քլին. (Փարիզ). - 1998. - Հատ. 56 (6). - P.719-723.
14. Մարշալ Թ., Ուիլյամս Կ.Մ. // կլինիկա. Քիմ. - 2003. - Հատ. 49 (12). - Պ.2111-2112.
15. Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D'Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Չիմ. acta. - 2002. - Հատ. 326 (1-2). - P.177-183.
16. Ringsrud K.M., Linne J.J. Մեզի անալիզ և մարմնի հեղուկներ. ColorText և Atlas // Mosby. - 1995. - P.52-54.
17. Shepard M.D., Penberthy L.A. // կլինիկա. Քիմ. - 1987. - Հատ. 33.-Պ.792-795.
18. Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Բիոֆիզ. մեթոդները. - 2001. - Հատ. 47.-Պ.197-207.
19. Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Բիոֆիզ. մեթոդները. - 2003. - Հատ. 57 (1). - էջ 45-55.

Առողջ անհատների ամենօրյա մեզի մեջ հայտնաբերվում են փոքր քանակությամբ սպիտակուցներ: Այնուամենայնիվ, նման ցածր կոնցենտրացիաները չեն կարող հայտնաբերվել օգտագործելով ավանդական մեթոդներհետազոտություն. Ավելի մեծ քանակությամբ սպիտակուցի արտազատումը, որի ժամանակ մեզի մեջ սպիտակուցի համար սովորական որակական թեստերը դրական են դառնում, կոչվում է պրոտեինուրիա: Տարբերում են երիկամային (ճշմարիտ) և արտաերիկամային (կեղծ) պրոտեինուրիա։ Երիկամային պրոտեինուրիայի դեպքում սպիտակուցը մեզի մեջ է մտնում անմիջապես արյունից՝ երիկամի գլոմերուլների կողմից դրա ֆիլտրացիայի ավելացման կամ գլանային ռեաբսորբցիայի նվազման պատճառով:

Երիկամային (իսկական) պրոտեինուրիա

Երիկամային (իսկական) պրոտեինուրիան ֆունկցիոնալ է և օրգանական: Ֆունկցիոնալ երիկամային պրոտեինուրիայի մեջ առավել հաճախ նկատվում են հետևյալ տեսակները.

Նորածինների ֆիզիոլոգիական պրոտեինուրիա, որն անհետանում է ծնվելուց հետո 4-10-րդ օրը, իսկ վաղաժամ երեխաների մոտ՝ մի փոքր ուշ.
- օրթոստատիկ ալբումինուրիա, որը բնորոշ է 7-18 տարեկան երեխաներին և ի հայտ է գալիս միայն մարմնի ուղիղ դիրքում.
- անցողիկ (ինսուլտ) ալբումինուրիա, որը կարող է առաջանալ մարսողական համակարգի տարբեր հիվանդությունների, ծանր անեմիայի, այրվածքների, վնասվածքների կամ ֆիզիոլոգիական գործոններ: ծանր վարժություն սթրեսհիպոթերմիա, հզոր հույզեր, առատ, սպիտակուցներով հարուստ սնունդ և այլն։

Օրգանական (երիկամային) պրոտեինուրիա նկատվում է երիկամային գլոմերուլների էնդոթելիումի վնասված հատվածներով արյունից սպիտակուցի անցնելու պատճառով երիկամների հիվանդությունների ժամանակ (գլոմերուլոնեֆրիտ, նեֆրոզ, նեֆրոսկլերոզ, ամիլոիդոզ, նեֆրոպաթիա հղիության ընթացքում), երիկամային հեմոդինամիկայի խանգարումներ (երիկամային երակային): հիպերտոնիա, հիպոքսիա), տրոֆիկ և թունավոր (ներառյալ բուժիչ) ազդեցությունը գլոմերուլյար մազանոթների պատերին:

Extrarenal (կեղծ) պրոտեինուրիա

Էքստրերինալ (կեղծ) պրոտեինուրիա, որի դեպքում մեզի մեջ սպիտակուցի աղբյուրը լեյկոցիտների, էրիթրոցիտների, բակտերիաների, միզասեռական բջիջների խառնուրդն է։ նկատվում է ուրոլոգիական հիվանդությունների ժամանակ (ուրոլիտիաս, երիկամների տուբերկուլյոզ, երիկամների և միզուղիների ուռուցքներ և այլն):

Մեզում սպիտակուցի որոշում

Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման որակական և քանակական մեթոդների մեծ մասը հիմնված է դրա մակարդման վրա մեզի ծավալում կամ միջավայրի միջերեսում (մեզի և թթու):

Մեզի մեջ բեդկա որոշման որակական մեթոդներից առավել լայնորեն կիրառվում են սուլֆոսալիսիլիկ թթվով միասնական թեստը և Հելլերի օղակի թեստը:

Սուլֆասալիցիլաթթվով ստանդարտացված նմուշը կատարվում է հետևյալ կերպ. 3 մլ ֆիլտրացված մեզը լցնում են 2 խողովակի մեջ։ Դրանցից մեկում ավելացնել 6-8 կաթիլ սուլֆասալիցիլաթթվի 20%-անոց լուծույթ։ Երկու խողովակները համեմատվում են մուգ ֆոնի վրա: Սուլֆասալիցիլաթթվով փորձանոթում մեզի պղտորությունը վկայում է սպիտակուցի առկայության մասին: Ուսումնասիրությունից առաջ անհրաժեշտ է որոշել մեզի ռեակցիան, իսկ եթե այն ալկալային է, ապա թթվացնել 10%-անոց լուծույթի 2-3 կաթիլով։ քացախաթթու.

Գելերի թեստը հիմնված է այն փաստի վրա, որ ազոտական ​​թթվի և մեզի սահմանին մեզի մեջ սպիտակուցի առկայության դեպքում այն ​​կոագուլացվում է և առաջանում է սպիտակ օղակ։ 1-2 մլ ազոտաթթվի 30% լուծույթը լցնում են փորձանոթի մեջ և ճիշտ նույն քանակությամբ զտված մեզը խնամքով շերտավորում են փորձանոթի պատի երկայնքով։ Երկու հեղուկների միջերեսում սպիտակ օղակի հայտնվելը վկայում է մեզի մեջ սպիտակուցի առկայության մասին: Պետք է հիշել, որ երբեմն սպիտակ օղակ է ձևավորվում մեծ քանակությամբ ուրատների առկայության դեպքում, բայց ի տարբերություն սպիտակուցի օղակի, այն հայտնվում է երկու հեղուկների միջև սահմանից մի փոքր վերև և տաքացնելիս լուծվում է [Pletneva N.G., 1987]:

Ամենատարածված քանակական մեթոդներն են.

1) Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկով միասնական մեթոդը, որը հիմնված է Հելլերի օղակի թեստի վրա.
2) սուլֆասալիցիլաթթվի ավելացման արդյունքում առաջացած պղտորությամբ մեզի մեջ սպիտակուցի քանակական որոշման ֆոտոէլեկտրոկոլորիմետրիկ մեթոդ.
3) բիուրետ մեթոդ.

Մեզում սպիտակուցի հայտնաբերումը պարզեցված արագացված մեթոդով իրականացվում է գունաչափական մեթոդով՝ օգտագործելով ցուցիչ թուղթ, որն արտադրվում է Lachema (Սլովակիա), Albuphan, Ames (Անգլիա), Albustix, Boehringer (Գերմանիա), Comburtest և այլն: տետրաբրոմֆենոլ կապույտով և ցիտրատային բուֆերով ներծծված հատուկ թղթե ժապավենը մեզի մեջ ընկղմելու դեպքում, որը փոխում է իր գույնը դեղինից կապույտ՝ կախված մեզի մեջ սպիտակուցի պարունակությունից: Փորձնականորեն, փորձարկման մեզի մեջ սպիտակուցի կոնցենտրացիան որոշվում է ստանդարտ սանդղակի միջոցով: Ստանալ ճիշտ արդյունքներպետք է պահպանվեն հետևյալ պայմանները. մեզի pH-ը պետք է լինի 3,0-3,5 միջակայքում; կստացվի չափազանց ալկալային մեզի հետ (pH 6.5): կեղծ դրական արդյունք, և չափազանց թթվային մեզի հետ (pH 3.0) - կեղծ բացասական:

Թուղթը չպետք է շփվի փորձարկման մեզի հետ ավելի երկար, քան նշված է հրահանգներում, հակառակ դեպքում թեստը կեղծ դրական արձագանք կտա: Վերջինս նկատվում է նաև մեզի մեջ մեծ քանակությամբ լորձի առկայության դեպքում։ Զգայունություն տարբեր տեսակներև թղթերի շարքը կարող է տարբեր լինել, ուստի մեզի մեջ սպիտակուցի քանակական գնահատումն այս մեթոդով պետք է զգույշ լինել: Ամենօրյա մեզի մեջ դրա քանակի որոշումը ցուցիչ թղթի միջոցով անհնար է [Pletneva N.G., 1987]

Օրական պրոտեինուրիայի սահմանում

Օրական մեզի մեջ արտազատվող սպիտակուցի քանակությունը որոշելու մի քանի եղանակ կա: Ամենապարզը Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկով մեթոդն է։

Մեթոդաբանությունը.Օրական 5-10 մլ մանրակրկիտ խառնված մեզը լցնում են փորձանոթի մեջ և դրա պատերի երկայնքով խնամքով ավելացնում են ազոտաթթվի 30% լուծույթ։ Մեզում սպիտակուցի առկայության դեպքում 0,033% (այսինքն՝ 33 մգ 1 լիտր մեզի համար) 2-3 րոպե հետո հայտնվում է բարակ, բայց հստակ տեսանելի սպիտակ օղակ։ Ավելի ցածր կոնցենտրացիայի դեպքում թեստը բացասական է: Մեզի մեջ սպիտակուցի ավելի բարձր պարունակությամբ, դրա քանակը որոշվում է թորած ջրով մեզի բազմակի նոսրացումներով, մինչև օղակը դադարի ձևավորվել: Վերջին փորձանոթում, որի մեջ օղակը դեռ տեսանելի է, սպիտակուցի կոնցենտրացիան կկազմի 0,033%: 0,033-ը բազմապատկելով մեզի նոսրացման աստիճանով, որոշեք սպիտակուցի պարունակությունը 1 լիտր չնոսրացված մեզի մեջ գրամներով: Այնուհետև օրական մեզի մեջ սպիտակուցի պարունակությունը հաշվարկվում է բանաձևով.

K \u003d (x V) / 1000

որտեղ K-ն օրական մեզի մեջ սպիտակուցի քանակն է (գ); x-ը սպիտակուցի քանակն է 1 լիտր մեզի մեջ (գ); V-ն օրական արտազատվող մեզի քանակն է (մլ):

Սովորաբար, օրվա ընթացքում մեզի մեջ արտազատվում է 27-ից 150 մգ (միջինում 40-80 մգ) սպիտակուց:

Այս թեստը թույլ է տալիս մեզի մեջ որոշել միայն նուրբ սպիտակուցները (ալբումին): Ավելի ճշգրիտ քանակական մեթոդները (գունաչափական Kjeldahl մեթոդը և այլն) բավականին բարդ են և պահանջում են հատուկ սարքավորումներ:

Երիկամային պրոտեինուրիայի ժամանակ ոչ միայն ալբումիններն են արտազատվում մեզի մեջ, այլև այլ տեսակի սպիտակուցներ։ Նորմալ պրոտեինոգրամը (ըստ Seitz et al., 1953 թ.) ունի հետևյալ տոկոսը՝ ալբումիններ՝ 20%, α 1-գլոբուլիններ՝ 12%, α 2-գլոբուլիններ՝ 17%, γ-գլոբուլիններ՝ 43% և β-գլոբուլիններ՝ 8% . Ալբումինների և գլոբուլինների հարաբերակցությունը փոխվում է տարբեր հիվանդություններերիկամներ, այսինքն. սպիտակուցային ֆրակցիաների միջև քանակական հարաբերակցությունը խախտված է:

Ուրոպրոտեինների ֆրակցիոնացման ամենատարածված մեթոդներն են՝ չեզոք աղերով աղակալում, էլեկտրոֆորետիկ ֆրակցիա, իմունոլոգիական մեթոդներ (ճառագայթային իմունոդիֆուզիոն ռեակցիա ըստ Մանչինիի, իմունոէլեկտրոֆորետիկ անալիզ, տեղումների իմունոէլեկտրոֆորեզ), քրոմատոգրաֆիա, գելային ֆիլտրացիա և ուլտրակենտրոնացում։

Էլեկտրոֆորետիկ շարժունակության, մոլեկուլային քաշի փոփոխականության, ուրոպրոտեինի մոլեկուլների չափի և ձևի ուսումնասիրության հիման վրա ուրոպրոտեինների ֆրակցիոնացման մեթոդների ներդրման հետ կապված հնարավոր դարձավ առանձնացնել որոշակի հիվանդությանը բնորոշ պրոտեինուրիայի տեսակները, ուսումնասիրել առանձին պլազմայի մաքրումը: սպիտակուցներ. Մինչ օրս մեզի մեջ հայտնաբերվել են ավելի քան 40 պլազմային սպիտակուցներ, այդ թվում՝ 31 պլազմային սպիտակուցներ նորմալ մեզի մեջ:

Ընտրովի պրոտեինուրիա

Վերջին տարիներին առաջացել է պրոտեինուրիայի ընտրողականության հայեցակարգը: 1955 թվականին Hardwicke-ը և Squire-ը ձևակերպեցին «սելեկտիվ» և «ոչ ընտրողական» պրոտեինուրիայի հայեցակարգը՝ որոշելով, որ պլազմայի սպիտակուցների ֆիլտրումը մեզի մեջ հետևում է որոշակի օրինաչափության. որքան ցածր է դրա մաքրումը և այնքան ցածր է նրա կոնցենտրացիան մեզի մեջ, վերջնական մեզը: Այս օրինաչափությանը համապատասխանող պրոտեինուրիան ընտրովի է՝ ի տարբերություն ոչ սելեկտիվ, որի համար բնորոշ է ստացված օրինաչափության այլասերվածությունը։

Մեզում համեմատաբար մեծ մոլեկուլային քաշ ունեցող սպիտակուցների հայտնաբերումը ցույց է տալիս երիկամային ֆիլտրի ընտրողականության բացակայությունը և դրա ընդգծված վնասը: Այս դեպքերում խոսվում է սպիտակուցի ցածր ընտրողականության մասին։ Հետևաբար, ներկայումս լայն տարածում է գտել մեզի սպիտակուցային ֆրակցիաների որոշումը՝ օգտագործելով էլեկտրոֆորեզի մեթոդները օսլայի և պոլիակրիլամիդային գելերում։ Ելնելով այս հետազոտական ​​մեթոդների արդյունքներից՝ կարելի է դատել պրոտեինուրիայի ընտրողականության մասին։

Ըստ V.S. Makhlina (1975), առավել արդարացված է սպիտակուցի ընտրողականության որոշումը՝ համեմատելով արյան պլազմայի 6-7 առանձին սպիտակուցների (ալբումին, տրանեֆերին, α 2 - մակրոգլոբուլին, IgA, IgG, IgM) մաքրումները՝ օգտագործելով ճշգրիտ և Ճառագայթային իմունոդիֆուզիայի արձագանքման կոնկրետ քանակական իմունոլոգիական մեթոդներ ըստ Մանչինիի, իմունոէլեկտրոֆորետիկ անալիզ և տեղումների իմունոէլեկտրոֆորեզ: Սպիտակուցների ընտրողականության աստիճանը որոշվում է ընտրողականության ինդեքսով, որը համեմատվող և տեղեկատու սպիտակուցների (ալբումինի) հարաբերակցությունն է։

Առանձին պլազմայի սպիտակուցների մաքրման ուսումնասիրությունը թույլ է տալիս հավաստի տեղեկատվություն ստանալ երիկամի գլոմերուլների ֆիլտրացիոն նկուղային թաղանթների վիճակի մասին: Մեզով արտազատվող սպիտակուցների բնույթի և գլոմերուլների նկուղային թաղանթների փոփոխությունների միջև կապն այնքան ընդգծված և հաստատուն է, որ ուրոպրոտեինոգրամը կարող է անուղղակիորեն դատել երիկամների գլոմերուլների պաթոֆիզիոլոգիական փոփոխությունները: Լավ միջին չափըգլոմերուլյար նկուղային մեմբրանի ծակոտիները 2,9-4 A ° NM են, որոնք կարող են փոխանցել մինչև 10 4 մոլեկուլային քաշ ունեցող սպիտակուցներ (միոգլոբուլին, թթու α 1 - գլիկոպրոտեին, իմունոգլոբուլինի թեթև շղթաներ, Fc և Fab - IgG բեկորներ, ալբումին և տրանսֆերին):

Գլոմերուլոնեֆրիտով, նեֆրոտիկ համախտանիշով, ծակոտիների չափերը մեծանում են գլոմերուլների նկուղային թաղանթներում, և, հետևաբար, նկուղային թաղանթը թափանցելի է դառնում մեծ չափի և զանգվածի սպիտակուցային մոլեկուլների համար (ցերուլոպլազմին, հապտոգլոբին, IgG, IgA և այլն): Երիկամների գլոմերուլների ծայրահեղ վնասման դեպքում մեզի մեջ հայտնվում են արյան պլազմայի սպիտակուցների հսկա մոլեկուլներ (α 2-մակրոգլոբուլին, IgM և β 2-լիպոպրոտեին):

Որոշելով մեզի սպիտակուցային սպեկտրը, կարելի է եզրակացնել, որ նեֆրոնի որոշ հատվածներ հիմնականում ազդում են: Գլոմերուլոնեֆրիտի համար, որն ունի գլոմերուլային նկուղային թաղանթների գերակշռող վնասվածք, մեզի մեջ բնորոշ է մեծ և միջին մոլեկուլային քաշի սպիտակուցների առկայությունը: Խողովակների բազալ թաղանթների գերակշռող ախտահարմամբ պիելոնեֆրիտի համար բնորոշ են խոշոր մոլեկուլային սպիտակուցների բացակայությունը և միջին և ցածր մոլեկուլային քաշի սպիտակուցների ավելացված քանակությունը:

β 2 -Միկրոգլոբուլին

Բացի հայտնի սպիտակուցներից, ինչպիսիք են ալբումինը, իմունոգոլոբուլինները, լիպոպրոտեինները: Ֆիբրինոգենը, տրանսֆերրինը, մեզը պարունակում են պլազմային միկրոպրոտեիններ, որոնց թվում կլինիկական հետաքրքրություն է ներկայացնում β 2-միկրոգլոբուլինը, որը հայտնաբերել են Բերգարդը և Բերնը 1968 թվականին: Ունենալով ցածր մոլեկուլային քաշ (1800 հարաբերական մոլեկուլային զանգված), այն ազատորեն անցնում է երիկամների գլոմերուլներով: և նորից ներծծվում է պրոքսիմալ խողովակներում: Սա թույլ է տալիս քանակականորեն որոշել β 2-միկրոգլոբուլինը արյան և մեզի մեջ՝ որոշելու գլոմերուլային ֆիլտրացիան և երիկամների՝ պրոքսիմալ խողովակներում սպիտակուցները ներծծելու կարողությունը:

Արյան պլազմայում և մեզում այս սպիտակուցի կոնցենտրացիան որոշվում է ռադիոիմունային հետազոտության միջոցով՝ օգտագործելով «Phade-bas β 2-mikroiest» ստանդարտ փաթեթը (Pharmacia, Շվեդիա): Առողջ մարդկանց արյան շիճուկը պարունակում է միջինը 1,7 մգ/լ (միջակայքը 0,6-ից 3 մգ/լ), մեզի մեջ՝ միջինը 81 մկգ/լ (առավելագույնը 250 մկգ/լ) β 2-միկրոգլոբուլին: Մեզի մեջ դրա ավելցուկը 1000 մկգ/լ-ից ավելի պաթոլոգիական երեւույթ է։ Արյան մեջ β 2-միկրոգլոբուլինի պարունակությունը մեծանում է գլոմերուլային ֆիլտրացիայի խանգարմամբ ուղեկցվող հիվանդությունների դեպքում, մասնավորապես սուր և քրոնիկ գլոմերուլոնեֆրիտ, պոլիկիստոզ երիկամների հիվանդություն, նեֆրոսկլերոզ, դիաբետիկ նեֆրոպաթիա, երիկամային սուր անբավարարություն:

β 2-միկրոգլոբուլինի կոնցենտրացիան մեզի մեջ մեծանում է հիվանդություններով, որոնք ուղեկցվում են խողովակների ռեաբսորբցիոն ֆունկցիայի խախտմամբ, ինչը հանգեցնում է մեզի մեջ դրա արտազատման 10-50 անգամ ավելացմանը, մասնավորապես, պիելոնեֆրիտով, երիկամների քրոնիկականությամբ: անբավարարություն, թարախային թունավորում և այլն: Հատկանշական է, որ ցիստիտի դեպքում, ի տարբերություն պիելոնեֆրիտի, մեզի մեջ β 2-միկրոգլոբուլինի կոնցենտրացիայի ավելացում չկա, որը կարող է օգտագործվել այս հիվանդությունների դիֆերենցիալ ախտորոշման համար: Այնուամենայնիվ, հետազոտության արդյունքները մեկնաբանելիս պետք է հաշվի առնել, որ ջերմաստիճանի ցանկացած բարձրացում միշտ ուղեկցվում է մեզի մեջ β 2-միկրոգլոբուլինի արտազատման ավելացմամբ:

Արյան և մեզի միջին մոլեկուլները

Միջին մոլեկուլները (SM), որոնք այլ կերպ կոչվում են սպիտակուցային տոքսիններ, 500-5000 դալտոն մոլեկուլային զանգված ունեցող նյութեր են։ ֆիզիկական կառուցվածքըդրանք անհայտ են։ ՍՄ-ի բաղադրությունը ներառում է առնվազն 30 պեպտիդ՝ օքսիտոցին, վազոպրեսին, անգիոտենսին, գլյուկագոն, ադրենոկորտիկոտրոպ հորմոն (ACTH) և այլն: ՍՄ-ի ավելցուկային կուտակումը նկատվում է երիկամների ֆունկցիայի նվազմամբ և դեֆորմացված սպիտակուցների և դրանց մետաբոլիտների մեծ քանակով: արյուն. Նրանք ունեն մի շարք կենսաբանական ազդեցություններ և նեյրոտոքսիկ են, առաջացնում են երկրորդային իմունոպրեսիա, երկրորդային անեմիա, արգելակում են սպիտակուցների կենսասինթեզը և էրիթրոպոեզը, արգելակում են բազմաթիվ ֆերմենտների ակտիվությունը և խախտում բորբոքային գործընթացի փուլերը:

Արյան և մեզի մեջ ՍՄ մակարդակը որոշվում է սքրինինգ թեստով, ինչպես նաև սպեկտրոֆոտոմետրիայով ուլտրամանուշակագույն գոտում 254 և 280 մմ ալիքի երկարությամբ DI-8B սպեկտրոֆոտոմետրի վրա, ինչպես նաև դինամիկ սպեկտրոֆոտոմետրիա՝ համակարգչային մշակմամբ ալիքի երկարությամբ։ նույն Բեքմանի սպեկտրոմետրի վրա 220-335 նմ միջակայք: Արյան մեջ ՍՄ-ի պարունակությունը ընդունվում է որպես նորմ՝ հավասար 0,24 ± 0,02 արբ։ միավոր, իսկ մեզի մեջ՝ 0,312 ± 0,09 արբ. միավորներ
Լինելով մարմնի նորմալ թափոններ, դրանք սովորաբար հեռացվում են դրանից գիշերը 0,5%-ով գլոմերուլային ֆիլտրման միջոցով; Դրանց 5%-ը այլ կերպ է ոչնչացվում։ Բոլոր SM ֆրակցիաները ենթարկվում են խողովակային ռեաբսորբցիային:

Ոչ պլազմային (հյուսվածքային) uroproteins

Արյան պլազմայի սպիտակուցներից բացի, մեզի մեջ կարող են լինել ոչ պլազմային (հյուսվածքային) սպիտակուցներ։ Ըստ Buxbaum-ի և Franklin-ի (1970), ոչ պլազմային սպիտակուցները կազմում են մեզի բոլոր բիոկոլոիդների մոտավորապես 2/3-ը և պաթոլոգիական պրոտեինուրիայի ժամանակ ուրոպրոտեինների զգալի մասը: Հյուսվածքային սպիտակուցները մեզի մեջ ներթափանցում են անմիջապես երիկամներից կամ միզուղիների հետ անատոմիականորեն կապված օրգաններից կամ արյուն են մտնում այլ օրգաններից և հյուսվածքներից, իսկ դրանից երիկամի գլոմերուլների նկուղային թաղանթների միջոցով՝ մեզի մեջ: Վերջին դեպքում հյուսվածքային սպիտակուցների արտազատումը մեզի մեջ տեղի է ունենում նույն կերպ, ինչ տարբեր մոլեկուլային քաշի պլազմայի սպիտակուցների արտազատումը: Ոչ պլազմային ուրոպրոտեինների կազմը չափազանց բազմազան է։ Դրանցից են գլիկոպրոտեինները, հորմոնները, անտիգենները, ֆերմենտները (ֆերմենտները):

Հյուսվածքների սպիտակուցները մեզի մեջ հայտնաբերվում են սպիտակուցների քիմիայի սովորական մեթոդներով (ուլտրակենտրոնացում, գելային քրոմատոգրաֆիա, տարբեր տեսակի էլեկտրոֆորեզ), ֆերմենտների և հորմոնների նկատմամբ հատուկ ռեակցիաներ և իմունոլոգիական մեթոդներ: Վերջիններս հնարավորություն են տալիս նաև որոշել մեզի մեջ ոչ պլազմային ուրոպրոտեինի կոնցենտրացիան և որոշ դեպքերում որոշել հյուսվածքային կառուցվածքները, որոնք դարձել են դրա տեսքի աղբյուր։ Մեզի մեջ ոչ պլազմային սպիտակուցի հայտնաբերման հիմնական մեթոդը իմունոդիֆուզիոն անալիզն է հակաշիճուկով, որը ստացվել է փորձարարական կենդանիների մարդու մեզով իմունիզացիայի արդյունքում և հետագայում սպառվել (ներծծվել) արյան պլազմայի սպիտակուցներով:

Արյան և մեզի ֆերմենտների հետազոտություն

Պաթոլոգիական գործընթացում նկատվում են բջիջների կենսագործունեության խորը խանգարումներ, որոնք ուղեկցվում են ներբջջային ֆերմենտների արտազատմամբ մարմնի հեղուկ միջավայրում։ Enzymodiagnostics-ը հիմնված է ախտահարված օրգանների բջիջներից արտազատվող մի շարք ֆերմենտների որոշման վրա, որոնք բնորոշ չեն արյան շիճուկին:
Մարդու և կենդանիների նեֆրոնի ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ նրա առանձին մասերում առկա է բարձր ֆերմենտային տարբերակում, որը սերտորեն կապված է յուրաքանչյուր բաժանմունքի գործառույթների հետ: Երիկամների գլոմերուլները պարունակում են համեմատաբար մեծ թվովտարբեր ֆերմենտներ:

Երիկամային խողովակների բջիջները, հատկապես պրոքսիմալները, պարունակում են առավելագույն գումարըֆերմենտներ. Նրանց բարձր ակտիվությունը նկատվում է Հենլեի հանգույցում, ուղիղ խողովակներում և հավաքող խողովակներում։ Երիկամների տարբեր հիվանդությունների դեպքում առանձին ֆերմենտների գործունեության փոփոխությունները կախված են գործընթացի բնույթից, ծանրությունից և տեղայնացումից: Դրանք նկատվում են երիկամներում մորֆոլոգիական փոփոխությունների հայտնվելուց առաջ։ Քանի որ տարբեր ֆերմենտների պարունակությունը հստակորեն տեղայնացված է նեֆրոնում, մեզի մեջ այս կամ այն ​​ֆերմենտի որոշումը կարող է նպաստել տեղային ախտորոշմանը: պաթոլոգիական գործընթացերիկամներում (գլոմերուլներ, խողովակներ, կեղև կամ մեդուլլա), երիկամային հիվանդությունների դիֆերենցիալ ախտորոշում և երիկամային պարենխիմում գործընթացի դինամիկայի (թուլացում և սրացում) որոշում։

Միզասեռական համակարգի հիվանդությունների դիֆերենցիալ ախտորոշման համար օգտագործվում է արյան և մեզի մեջ հետևյալ ֆերմենտների ակտիվության որոշումը՝ լակտատդեհիդրոգենազ (LDH), լեյցին ամինոպեպտիդազ (LAP), թթու ֆոսֆատազ (AP), ալկալային ֆոսֆատազ (AP) , β-գլյուկուրոնիդազ, գլուտամին-օքսալոքացետային տրանսամինազ (GST), ալդոլազ, տրանսամիդինազ և այլն: Արյան շիճուկում և մեզում ֆերմենտների ակտիվությունը որոշվում է կենսաքիմիական, սպեկտրոֆոտոմետրիկ, քրոմատոգրաֆիկ, ֆտորաչափական և քիմլյումինեսցենտ մեթոդներով:

Երիկամների հիվանդության ժամանակ ֆերմենտությունն ավելի ցայտուն և կանոնավոր է, քան ֆերմենտային: Այն հատկապես արտահայտված է հիվանդության սուր փուլում ( սուր պիելոնեֆրիտ, տրավմա, ուռուցքի քայքայում, երիկամների ինֆարկտ և այլն): Այս հիվանդությունների դեպքում հայտնաբերվում է տրանսամիդինազի, LDH-ի, ալկալային ֆոսֆատազի և CP-ի, հիալուրոնիդազի, LAP-ի, ինչպես նաև այնպիսի ոչ սպեցիֆիկ ֆերմենտների բարձր ակտիվություն, ինչպիսիք են GST, կատալազը [Polyantseva LR, 1972]:

Մեզում LAP-ի և ALP-ի հայտնաբերմամբ նեֆրոնում ֆերմենտների ընտրովի տեղայնացումը թույլ է տալիս վստահորեն խոսել սուր և քրոնիկ հիվանդություններերիկամ (սուր երիկամային անբավարարություներիկամային խողովակային նեկրոզ, քրոնիկ գլոմերուլոնեֆրիտ) [Շեմետով Վ.Դ., 1968]։ Ըստ Ա.Ա.Կարելինի և Լ.Ռ.Պոլյանցևայի (1965թ.) տրանսամիդինազը հայտնաբերվում է միայն երկու օրգաններում՝ երիկամում և ենթաստամոքսային գեղձում։ Այն երիկամների միտոքոնդրիալ ֆերմենտ է և սովորաբար բացակայում է արյան և մեզի մեջ: Երիկամների տարբեր հիվանդությունների դեպքում տրանսամիդինազը հայտնվում է արյան և մեզի մեջ, իսկ ենթաստամոքսային գեղձի վնասման դեպքում՝ միայն արյան մեջ։

Դիֆերենցիալ թեստը գլոմերուլոնեֆրիտի և պիելոնեֆրիտի ախտորոշման ժամանակ Կրոտկևսկին (1963) հաշվի է առնում մեզի մեջ ալկալային ֆոսֆատազի ակտիվությունը, որի ավելացումը ավելի բնորոշ է պիելոնեֆրիտի և դիաբետիկ գլոմերուլոսկլերոզի, քան սուր և քրոնիկ նեֆրիտի համար: Ամիլազեմիայի դինամիկայի աճը ամիլազուրիայի միաժամանակյա նվազմամբ կարող է վկայել երիկամի նեֆրոսկլերոզի և կնճիռների մասին, LAP-ն ամենակարևորն է պաթոլոգիական փոփոխություններերիկամի գլոմերուլներում և խճճված խողովակներում, քանի որ դրա պարունակությունը նեֆրոնի այս հատվածներում ավելի բարձր է [Shepotinovsky V.P. et al., 1980]: Լուպուսային նեֆրիտի ախտորոշման համար խորհուրդ է տրվում β-գլյուկուրոնիդազի և CF-ի որոշումը [Privalenko M.N. et al., 1974]:

Երիկամների հիվանդության ախտորոշման մեջ ֆերմենտային դերը գնահատելիս պետք է հաշվի առնել հետևյալ դրույթները. Ֆերմենտները, լինելով իրենց բնույթով սպիտակուցներ, փոքր մոլեկուլային քաշով կարող են անցնել անձեռնմխելի գլոմերուլներով՝ որոշելով այսպես կոչված ֆիզիոլոգիական ֆերմենտը։ Այս ֆերմենտներից մեզի մեջ մշտապես հայտնաբերվում են α-ամիլազը (հարաբերական մոլեկուլային քաշը՝ 45000) և ուրոպեպսինը (հարաբերական մոլեկուլային քաշը՝ 38000)։

Առողջ անհատների մեզի ցածր մոլեկուլային ֆերմենտների հետ մեկտեղ փոքր կոնցենտրացիաներում կարող են հայտնաբերվել նաև այլ ֆերմենտներ՝ LDH, ասպարտատ և ալանինային ամինոտրանսֆերազներ, ալկալային ֆոսֆատազ և CP, մալթազ, ալդոլազ, լիպազ, տարբեր պրոտեազներ և պեպտիդազներ, սուլֆատազ, կատալազ, ռիբոնուկլեազ, պերօքսիդազ:

Բարձր մոլեկուլային ֆերմենտները, որոնց հարաբերական մոլեկուլային զանգվածը գերազանցում է 70,000-100,000-ը, ըստ Richterich (1958) և Hess (1962), կարող են ներթափանցել մեզի մեջ միայն այն դեպքում, եթե խաթարված է glomerular ֆիլտրի թափանցելիությունը: Մեզի մեջ ֆերմենտների նորմալ պարունակությունը թույլ չի տալիս բացառել երիկամների պաթոլոգիական պրոցեսը միզածորանի խցանմամբ։ Էպիմուրիայի դեպքում ֆերմենտները կարող են ազատվել ոչ միայն բուն երիկամներից, այլև պարենխիմային այլ օրգաններից, միզուղիների լորձաթաղանթի բջիջներից, շագանակագեղձի բջիջներից, ինչպես նաև մեզի ձևավորված տարրերից՝ հեմատուրիայով կամ լեյկոցիտուրիայով:

Ֆերմենտների մեծ մասը ոչ սպեցիֆիկ է երիկամի համար, ուստի դժվար է որոշել, թե որտեղից են գալիս առողջ և հիվանդ մարդկանց մեզի մեջ հայտնաբերված ֆերմենտները: Այնուամենայնիվ, ֆերմենտիայի աստիճանը, նույնիսկ երիկամների վնասման մեջ ոչ սպեցիֆիկ ֆերմենտների դեպքում, ավելի բարձր է, քան նորմալ է կամ նկատվում է այլ օրգանների հիվանդությունների դեպքում: Ավելի արժեքավոր տեղեկատվություն կարող է տրամադրվել մի շարք ֆերմենտների դինամիկայի համապարփակ ուսումնասիրությամբ, հատկապես օրգաններին հատուկ ֆերմենտների, ինչպիսիք են տրանսամինազը:

Մեզի մեջ ֆերմենտի երիկամային ծագման հարցը լուծելիս իզոֆերմենտների ուսումնասիրությունը օգնում է բացահայտել ուսումնասիրվող օրգանին բնորոշ ֆրակցիաները։ Իզոֆերմենտները ֆերմենտներ են, որոնք գործողությամբ իզոգեն են (կատալիզացնում են նույն ռեակցիան), բայց քիմիական կառուցվածքով և այլ հատկություններով տարասեռ են։ Յուրաքանչյուր հյուսվածք ունի իր սեփական isoenzyme սպեկտրը: Իզոֆերմենտների տարանջատման արժեքավոր մեթոդներն են էլեկտրոֆորեզը օսլայի և պոլիակրիլամիդային գելերում, ինչպես նաև իոնափոխանակման քրոմատոգրաֆիան։

Bence Jones սպիտակուց

Բազմակի միելոմայի և Վալդենստրոմի մակրոգլոբուլինեմիայի դեպքում Բենս-Ջոնսի սպիտակուցը հայտնաբերվում է մեզի մեջ: Մեզի մեջ այս սպիտակուցը հայտնաբերելու մեթոդը հիմնված է ջերմային նստվածքի ռեակցիայի վրա: Նախկինում օգտագործված մեթոդները, որոնք գնահատում են այս սպիտակուցի լուծարումը 100 ° C ջերմաստիճանում և կրկին տեղումները հետագա սառեցման ժամանակ, անվստահելի են, քանի որ ոչ բոլոր Bence-Jones սպիտակուցային մարմիններն ունեն համապատասխան հատկություններ:

Այս պարապրոտեինի ավելի հուսալի հայտնաբերումը 40-60 °C ջերմաստիճանում տեղումների միջոցով: Այնուամենայնիվ, նույնիսկ այս պայմաններում տեղումներ չեն կարող լինել չափազանց թթվային (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) մեզի ցածր OPM և Bence-Jones սպիտակուցի ցածր կոնցենտրացիայով: Նրա տեղումների առավել բարենպաստ պայմաններն ապահովում են Patnem-ի առաջարկած մեթոդը՝ 4 մլ ֆիլտրացված մեզը խառնում են 1 մլ 2 մ ացետատային բուֆերային pH 4,9-ի հետ և 15 րոպե տաքացնում ջրային բաղնիքում 56 °C ջերմաստիճանում։ Bence-Jones սպիտակուցի առկայության դեպքում առաջին 2 րոպեների ընթացքում առաջանում է արտահայտված նստվածք։

Bence-Jones սպիտակուցի 3 գ/լ-ից պակաս կոնցենտրացիայի դեպքում թեստը կարող է բացասական լինել, բայց գործնականում դա չափազանց հազվադեպ է, քանի որ դրա կոնցենտրացիան մեզի մեջ սովորաբար ավելի նշանակալի է: Եռման նմուշների վրա չի կարելի լիովին ապավինել: Լրիվ վստահությամբ, այն կարող է հայտնաբերվել մեզի մեջ իմունոէլեկտրոֆորետիկ մեթոդով, օգտագործելով հատուկ շիճուկներ իմունոգլոբուլինների ծանր և թեթև շղթաների դեմ:

Սպիտակուցը մեզի մեջ. որոշման մեթոդներ

Պաթոլոգիական պրոտեինուրիա երիկամների և միզուղիների հիվանդությունների ամենակարևոր և մշտական ​​նշաններից է։ Մեզում սպիտակուցի կոնցենտրացիան որոշելը մեզի ուսումնասիրության պարտադիր և կարևոր տարր է: Սպիտակուցի հայտնաբերումը և քանակականացումը կարևոր է ոչ միայն երիկամների բազմաթիվ առաջնային և երկրորդային հիվանդությունների ախտորոշման համար, այլև դինամիկայի մեջ պրոտեինուրիայի ծանրության փոփոխությունների գնահատումը տեղեկատվություն է պարունակում պաթոլոգիական գործընթացի ընթացքի և բուժման արդյունավետության մասին: Մեզում սպիտակուցի հայտնաբերումը, նույնիսկ հետքի չափով, պետք է տագնապալի լինի հնարավոր հիվանդություներիկամները կամ միզուղիները և պահանջում են վերավերլուծություն: Հատկանշական է մեզի ուսումնասիրության անիմաստությունը և, մասնավորապես, մեզի սպիտակուցի որոշումը՝ առանց բոլորը դիտարկելու հավաքագրման կանոններ.

Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման բոլոր մեթոդները կարելի է բաժանել.

որակ,

կիսաքանակ,

Քանակական.

Որակական մեթոդներ

Բոլորը մեզի մեջ սպիտակուցի որակական թեստեր հիմնված է տարբեր ֆիզիկական և քիմիական գործոնների ազդեցությամբ սպիտակուցների դենացիայի ունակության վրա։ Փորձարկվող մեզի նմուշում սպիտակուցի առկայության դեպքում առաջանում է կա՛մ պղտորություն, կա՛մ ֆլկուլյացիա:

Կոագուլյացիոն ռեակցիայի հիման վրա մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման պայմանները.

Մեզը պետք է թթվային լինի: Ալկալային մեզը թթվում է քացախաթթվի մի քանի (2 - 3) կաթիլներով (5 - 10%):

Մեզը պետք է մաքուր լինի: Պղտորությունը հանվում է թղթե ֆիլտրի միջոցով: Եթե ​​մշուշը շարունակվում է, ավելացրեք տալկ կամ այրված մագնեզիա (մոտ 1 թեյի գդալ 100 մլ մեզի համար), թափահարեք և զտեք։

Որակական նմուշը պետք է կատարվի երկու փորձանոթում, որոնցից մեկը հսկիչ է:

Փնտրեք պղտորությունը պետք է լինի սև ֆոնի վրա հաղորդվող լույսի ներքո:

Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման որակական մեթոդները ներառում են.

Հելլերի օղակի թեստ,

նմուշ 15-20% սուլֆոսալիսիլիկ թթուով,

եռման փորձարկում և այլն:

Բազմաթիվ հետազոտություններ ցույց են տվել, որ մեզի մեջ սպիտակուցի որակական որոշման մեծ թվով հայտնի մեթոդներից և ոչ մեկը չի տալիս հուսալի և վերարտադրելի արդյունքներ: Չնայած դրան, Ռուսաստանում DLT-ների մեծ մասում այս մեթոդները լայնորեն օգտագործվում են որպես սկրինինգ՝ դրական որակական ռեակցիայով մեզի մեջ կատարվում է սպիտակուցի հետագա քանակական որոշումը: Որակական ռեակցիաներից առավել հաճախ օգտագործվում են Գելլերի թեստը և սուլֆոսալիցիլաթթվի թեստը, սակայն սուլֆոսալիցիլաթթվի թեստն ընդհանուր առմամբ համարվում է ամենահարմարը պաթոլոգիական պրոտեինուրիայի հայտնաբերման համար: Եռման թեստը ներկայումս գործնականում չի օգտագործվում իր բարդության և տևողության պատճառով:

Կիսաքանակական մեթոդներ

Դեպի կիսաքանակական մեթոդներ առնչվում են:

Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկով մեթոդ,

մեզի մեջ սպիտակուցի որոշում ախտորոշիչ թեստային շերտերի միջոցով:

Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկով մեթոդը հիմնված է Գելերի օղակի թեստի վրա, հետևաբար այս մեթոդով նկատվում են նույն սխալները, ինչ Գելերի թեստի դեպքում։

Ներկայումս ախտորոշիչ շերտերն ավելի ու ավելի են օգտագործվում մեզի սպիտակուցը որոշելու համար: Բրոմֆենոլ կապույտ ներկը ցիտրատային բուֆերում առավել հաճախ օգտագործվում է որպես շերտի վրա մեզի սպիտակուցի կիսաքանակ որոշման ցուցիչ: Մեզում սպիտակուցի պարունակությունը դատվում է կապույտ-կանաչ գույնի ինտենսիվությամբ, որը զարգանում է ռեակցիայի գոտու մեզի հետ շփումից հետո: Արդյունքը գնահատվում է տեսողականորեն կամ օգտագործելով մեզի անալիզատորներ: Չնայած չոր քիմիայի մեթոդների մեծ ժողովրդականությանը և ակնհայտ առավելություններին (պարզություն, վերլուծության արագություն), մեզի վերլուծության այս մեթոդներն ընդհանրապես և սպիտակուցի որոշման մեթոդները, մասնավորապես, զերծ չեն լուրջ թերություններից: Դրանցից մեկը, որը հանգեցնում է ախտորոշիչ տեղեկատվության խեղաթյուրմանը, բրոմֆենոլ կապույտի ցուցիչի ավելի մեծ զգայունությունն է ալբումինի նկատմամբ՝ համեմատած այլ սպիտակուցների։ Այս առումով, թեստային շերտերը հիմնականում հարմարեցված են սելեկտիվ գլոմերուլային պրոտեինուրիայի հայտնաբերմանը, երբ մեզի գրեթե ամբողջ սպիտակուցը ներկայացված է ալբումինով: Փոփոխությունների առաջընթացի և ընտրովի գլոմերուլային պրոտեինուրիայի անցումով ոչ ընտրովիի (մեզում գլոբուլինների հայտնվելը) սպիտակուցի որոշման արդյունքները թերագնահատվում են իրական արժեքների համեմատ: Այս փաստը անհնար է դարձնում այս մեթոդի կիրառումը մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման համար՝ գնահատելու երիկամների վիճակը (glomerular ֆիլտր) դինամիկայի մեջ: Գլանային պրոտեինուրիայի դեպքում սպիտակուցի որոշման արդյունքները նույնպես թերագնահատված են: Սպիտակուցների թեստավորումը սպիտակուցի ցածր մակարդակի հուսալի ցուցանիշ չէ (ներկայումս մատչելի գավազանների մեծ մասը ունակ չէ մեզի մեջ սպիտակուց հայտնաբերել 0,15 գ/լ-ից ցածր կոնցենտրացիաների դեպքում): Շերտերի վրա սպիտակուցի որոշման բացասական արդյունքները չեն բացառում գլոբուլինների, հեմոգլոբինի, ուրոմուկոիդների, Bence-Jones սպիտակուցի և այլ պարապրոտեինների առկայությունը մեզի մեջ:

Գլիկոպրոտեինների բարձր պարունակությամբ լորձի փաթիլները (օրինակ՝ միզուղիների բորբոքային պրոցեսների, պիուրիայի, բակտերիուրիայի դեպքում) կարող են նստել շերտի ցուցիչ գոտում և հանգեցնել կեղծ դրական արդյունքների։ Կեղծ դրական արդյունքները կարող են նաև կապված լինել բարձր կոնցենտրացիաների հետ միզանյութ. Վատ լուսավորությունը և գույնի վատ ընկալումը կարող են հանգեցնել ոչ ճշգրիտ արդյունքների:

Այս առումով ախտորոշիչ շերտերի օգտագործումը պետք է սահմանափակվի միայն սքրինինգային պրոցեդուրաներով, և դրանց օգնությամբ ստացված արդյունքները պետք է դիտարկվեն միայն որպես ցուցիչ:

Քանակական մեթոդներ

Ճիշտ է մեզի մեջ սպիտակուցի քանակական որոշում որոշ դեպքերում դա բարդ խնդիր է ստացվում։ Դրա լուծման դժվարությունները որոշվում են հետևյալ գործոններով.

մեզի մեջ բազմաթիվ միացությունների առկայությունը, որոնք կարող են խանգարել քիմիական ռեակցիաների ընթացքին.

տարբեր հիվանդությունների ժամանակ մեզի սպիտակուցների պարունակության և կազմի զգալի տատանումներ, ինչը դժվարացնում է համապատասխան չափաբերման նյութի ընտրությունը:

Կլինիկական լաբորատորիաներում հիմնականում օգտագործվում են մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման այսպես կոչված «ռուտին» մեթոդները, որոնք, սակայն, միշտ չէ, որ տալիս են բավարար արդյունքներ։

Լաբորատորիայում աշխատող վերլուծաբանի տեսանկյունից մեզի մեջ սպիտակուցի քանակական չափման համար նախատեսված մեթոդը պետք է համապատասխանի հետևյալ պահանջներին.

ունեն գծային կապ քիմիական ռեակցիայի ընթացքում ձևավորված համալիրի կլանման և նմուշում սպիտակուցի պարունակության միջև կոնցենտրացիաների լայն շրջանակում, ինչը թույլ կտա խուսափել լրացուցիչ գործողություններից՝ նմուշը հետազոտության համար պատրաստելիս.

պետք է լինի պարզ, չպահանջի կատարողի բարձր որակավորում, կատարվի փոքր քանակությամբ վիրահատություններով.

ունեն բարձր զգայունություն, վերլուծական հուսալիություն փորձարկման նյութի փոքր ծավալների օգտագործման ժամանակ.

լինել դիմացկուն տարբեր գործոնների (նմուշի կազմի տատանումներ, դեղերի առկայություն և այլն);

ընդունելի արժեք ունենալ;

հեշտությամբ հարմարվողական լինել ավտոանալիզատորներին;

որոշման արդյունքը չպետք է կախված լինի սպիտակուցի կազմըթեստային մեզի նմուշ.

Մեզում սպիտակուցի քանակական որոշման ներկայումս հայտնի մեթոդներից և ոչ մեկը չի կարող լիովին հավակնել որպես «ոսկե ստանդարտ»:

Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման քանակական մեթոդները կարելի է բաժանել turbidimetric և colorimetric:

Տուրբիդիմետրիկ մեթոդներ

Տուրբիդիմետրիկ մեթոդները ներառում են.

սպիտակուցի որոշում սուլֆոսալիսիլիկ թթուով (SSK),

սպիտակուցի որոշում տրիքլորքացախաթթու(ՀՀ),

սպիտակուցի որոշում բենզեթոնիումի քլորիդով.

Թուրբիդիմետրիկ մեթոդները հիմնված են մեզի սպիտակուցների լուծելիության նվազման վրա՝ նստեցնող նյութերի ազդեցության տակ կասեցված մասնիկների կասեցման ձևավորման պատճառով: Փորձարկման նմուշում սպիտակուցի պարունակությունը գնահատվում է կամ լույսի ցրման ինտենսիվությամբ, որը որոշվում է լույս ցրող մասնիկների քանակով (վերլուծության նեֆելոմետրիկ մեթոդ), կամ լույսի հոսքի թուլացմամբ՝ ստացված կասեցման միջոցով (վերլուծության պղտորման մեթոդ): ):

Մեզի մեջ սպիտակուցը հայտնաբերելու համար տեղումների եղանակներում լույսի ցրման քանակը կախված է բազմաթիվ գործոններից՝ ռեագենտների խառնման արագությունից, ռեակցիայի խառնուրդի ջերմաստիճանից, միջավայրի pH արժեքից, օտար միացությունների առկայությունից, ֆոտոմետրիկ մեթոդներից: Ռեակցիայի պայմանների մանրակրկիտ դիտարկումը նպաստում է կայուն մասնիկների չափսերով կայուն կախույթի առաջացմանը և համեմատաբար վերարտադրելի արդյունքների ստացմանը։

Որոշ դեղամիջոցներ խանգարում են մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման turbidimetric մեթոդների արդյունքներին, ինչը հանգեցնում է այսպես կոչված «կեղծ դրական» կամ «կեղծ բացասական» արդյունքների: Դրանց թվում են որոշ հակաբիոտիկներ (բենզիլպենիցիլին, կլոկսացիլին և այլն), ռադիոթափանցիկ յոդ պարունակող նյութեր, սուլֆանիլամիդ պատրաստուկներ։

Պղտորաչափական մեթոդները դժվար է ստանդարտացնել և հաճախ հանգեցնում են սխալ արդյունքների, բայց չնայած դրան, դրանք ներկայումս լայնորեն կիրառվում են լաբորատորիաներում՝ ռեագենտների ցածր գնի և մատչելիության պատճառով: Ռուսաստանում ամենաշատ կիրառվող մեթոդը սպիտակուցի որոշումն է սուլֆոսալիսիլիկ թթվով։

Գունաչափական մեթոդներ

Առավել զգայուն և ճշգրիտ են մեզի ընդհանուր սպիտակուցի որոշման գունաչափական մեթոդները՝ հիմնված սպիտակուցների գունային հատուկ ռեակցիաների վրա:

Դրանք ներառում են.

բիուրետային ռեակցիա,

ցածր մեթոդ,

մեթոդներ, որոնք հիմնված են տարբեր ներկերի սպիտակուցների հետ բարդույթներ ստեղծելու ունակության վրա.

Պոնսո Ս (Պոնսո Ս),

Coomassie Brilliant Blue (Coomassie Brilliant Blue)

պիրոգալոլ կարմիր (Պիրոգալոլ Կարմիր):

Կատարողի տեսանկյունից հետազոտությունների մեծ հոսք ունեցող լաբորատորիայի ամենօրյա աշխատանքում բիուրետային մեթոդն անհարմար է վիրահատությունների մեծ քանակի պատճառով։ Միևնույն ժամանակ, մեթոդը բնութագրվում է բարձր վերլուծական հուսալիությամբ, թույլ է տալիս որոշել սպիտակուցը կոնցենտրացիաների լայն շրջանակում և հայտնաբերել ալբումինի, գլոբուլինների և պարապրոտեինների համադրելի զգայունությամբ, ինչի արդյունքում բիուրետ մեթոդը համարվում է հղում և առաջարկվում է մեզի մեջ սպիտակուցի հայտնաբերման այլ վերլուծական մեթոդների համեմատության համար: Մեզում սպիտակուցի որոշման բիուրետ մեթոդը նախընտրելի է իրականացնել նեֆրոլոգիական բաժանմունքներ սպասարկող լաբորատորիաներում և օգտագործվում է այն դեպքերում, երբ այլ մեթոդներով որոշման արդյունքները կասկածելի են, ինչպես նաև նեֆրոլոգիական հիվանդների օրական սպիտակուցի կորստի չափը որոշելու համար:

Լոուրիի մեթոդը, որն ավելի բարձր զգայունություն ունի, քան բիուրետային մեթոդը, միավորում է բիուրետային ռեակցիան և Ֆոլինի ռեակցիան ամինաթթուների՝ թիրոզինի և տրիպտոֆանի սպիտակուցի մոլեկուլում։ Չնայած իր բարձր զգայունությանը, այս մեթոդը միշտ չէ, որ հուսալի արդյունքներ է տալիս մեզի մեջ սպիտակուցի պարունակության որոշման հարցում: Սրա պատճառը Ֆոլինի ռեագենտի ոչ սպեցիֆիկ փոխազդեցությունն է մեզի ոչ սպիտակուցային բաղադրիչների հետ (առավել հաճախ՝ ամինաթթուներ, միզաթթու, ածխաջրեր)։ Այս և միզային այլ բաղադրիչների բաժանումը դիալիզի կամ սպիտակուցային տեղումների միջոցով թույլ է տալիս այս մեթոդը հաջողությամբ օգտագործել մեզի մեջ սպիտակուցի քանակական որոշման համար: Որոշ դեղամիջոցներ՝ սալիցիլատներ, քլորպրոմազին, տետրացիկլիններ, կարող են ազդել այս մեթոդի վրա և խեղաթյուրել հետազոտության արդյունքները:

Բավարար զգայունությունը, լավ վերարտադրելիությունը և սպիտակուցի որոշման հեշտությունը ներկերի միջոցով այս մեթոդները խոստումնալից են դարձնում, սակայն ռեագենտների բարձր արժեքը խոչընդոտում է դրանց ավելի լայն կիրառմանը լաբորատորիաներում: Ներկայումս Ռուսաստանում պիրոգալոլ կարմիրով մեթոդն ավելի տարածված է դառնում։

Սպիտակուցի մակարդակը ուսումնասիրելիս պետք է նկատի ունենալ, որ պրոտեինուրիայի որոշման տարբեր մեթոդներ ունեն տարբեր զգայունություն և յուրահատկություն մեզի բազմաթիվ սպիտակուցների համար:

Էմպիրիկ տվյալների հիման վրա խորհուրդ է տրվում որոշել սպիտակուցը երկու տարբեր մեթոդներով և հաշվարկել իրական արժեքվերը նշված բանաձևերից մեկի համաձայն՝ պրոտեինուրիա = 0,4799 B + 0,5230 լ; պրոտեինուրիա = 1,5484 B - 0,4825 S; պրոտեինուրիա = 0,2167 S + 0,7579 L; պրոտեինուրիա = 1,0748 P - 0,0986 B; պրոտեինուրիա = 1,0104 P - 0,0289 S; պրոտեինուրիա = 0,8959 P + 0,0845 լ; որտեղ B-ն Coomassie G-250-ով չափման արդյունքն է; L-ն Լոուրի ռեագենտով չափման արդյունք է. P-ը պիրոգալոլ մոլիբդատով չափման արդյունքն է. S-ը սուլֆոսալիսիլիկ թթվով չափման արդյունքն է։

Հաշվի առնելով օրվա տարբեր ժամերին պրոտեինուրիայի մակարդակի ընդգծված տատանումները, ինչպես նաև մեզի մեջ սպիտակուցի կոնցենտրացիայի կախվածությունը միզամուղությունից, դրա տարբեր պարունակությունը մեզի առանձին մասերում, այժմ ընդունված է գնահատել. պրոտեինուրիայի ծանրությունը երիկամների պաթոլոգիայում՝ մեզի մեջ սպիտակուցի ամենօրյա կորստով, այսինքն՝ որոշել այսպես կոչված ամենօրյա պրոտեինուրիան։ Այն արտահայտվում է գ/օրով։

Եթե ​​անհնար է օրական մեզի հավաքել, ապա խորհուրդ է տրվում որոշել սպիտակուցի և կրեատինինի կոնցենտրացիան մեզի մեկ մասում: Քանի որ օրվա ընթացքում կրեատինինի արտազատման արագությունը բավականին հաստատուն է և կախված չէ միզարձակման արագության փոփոխություններից, սպիտակուցի կոնցենտրացիայի և կրեատինինի կոնցենտրացիայի հարաբերակցությունը հաստատուն է: Այս հարաբերակցությունը լավ փոխկապակցված է սպիտակուցի ամենօրյա արտազատման հետ և, հետևաբար, կարող է օգտագործվել պրոտեինուրիայի ծանրությունը գնահատելու համար: Սովորաբար սպիտակուց/կրեատինին հարաբերակցությունը պետք է լինի 0,2-ից պակաս: Սպիտակուցը և կրեատինինը չափվում են գ/լ-ով: Սպիտակուց-կրեատինին հարաբերակցությամբ պրոտեինուրիայի ծանրության գնահատման մեթոդի կարևոր առավելությունն ամենօրյա մեզի անհնարինության կամ թերի հավաքման հետ կապված սխալների ամբողջական վերացումն է:

Գրականություն:

O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, «Կլինիկական ասպեկտներ սպիտակուցի հայտնաբերման և գնահատման համար», CDL-ի ղեկավարի ձեռնարկ, թիվ 1, հունվարի 2007 թ.

A. V. Kozlov, «Proteinuria. մեթոդներ դրա հայտնաբերման համար», դասախոսություն, Սանկտ Պետերբուրգ, SPbMAPO, 2000 թ.

V. L. Emanuel, « Լաբորատոր ախտորոշումերիկամների հիվանդություններ. Միզուղիների համախտանիշ», - ՁԻԱՀ-ի ղեկավարի ձեռնարկ, թիվ 12, դեկտեմբեր 2006 թ.

ՄԵՋ ԵՎ. Պուպկովա, Լ.Մ. Պրասոլովա - մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման մեթոդներ (գրականության տվյալների վերանայում)

Ձեռնարկ կլինիկական լաբորատոր մեթոդներհետազոտություն. Էդ. Է.Ա.Կոստ. Մոսկվա, «Բժշկություն», 197

Մեզի մեջ սպիտակուցի որոշման բոլոր մեթոդները հիմնված են քիմիական կամ ջերմային նյութերի ազդեցության տակ սպիտակուցի կոագուլյացիայի վրա: Մեզի մեջ սպիտակուցի առկայության դեպքում առաջանում է պղտորություն, որի աստիճանը կախված է սպիտակուցի քանակից։

Ա) որակի թեստերմեզի մեջ սպիտակուցի որոշում - պարտադիր են:

1. Նմուշ ազոտական ​​թթուով- 1-2 մլ ազոտական ​​թթվի 50% լուծույթով փորձանոթի մեջ զգուշորեն շերտավորել հավասար քանակությամբ մեզի` փորձելով հեղուկը չթափահարել: Մեզի մեջ սպիտակուցի առկայության դեպքում երկու հեղուկների սահմանին հայտնվում է սպիտակ օղակ, որն ավելի լավ է երևում սև ֆոնի վրա։

2. Նմուշ սուլֆասալիցիլաթթվով- 4-5 մլ մեզը լցնում են փորձանոթի մեջ եւ ավելացնում 8-10 կաթիլ ռեագենտ։ Մեզի մեջ սպիտակուցի առկայության դեպքում, կախված դրա քանակից, կարող է առաջանալ պղտորություն կամ ծլքավորում։

3. Էքսպրես թեստ (չոր ախտորոշիչ թեստ)- Ալբուֆանի ցուցիչի թղթի շերտը ընկղմվում է փորձարկման մեզի մեջ, որպեսզի երկու ցուցիչ գոտիները միաժամանակ խոնավացվեն (վերին գոտին pH որոշման համար է, իսկ ստորինը՝ սպիտակուցի որոշման համար): 2-3 վայրկյան հետո շերտը դրվում է սպիտակ ապակե ափսեի վրա։ Գնահատումն իրականացվում է շերտը մեզով թրջելուց 60 վայրկյան հետո՝ օգտագործելով ցուցիչ ժապավեններով պատյանի վրա տպված գունավոր սանդղակը:

Բ) քանակական նմուշներ- իրականացվում է մեզի այն մասերում, որտեղ սպիտակուցը հայտնաբերվել է դրա ընթացքում որակական սահմանում; որոշումը կատարվում է վերին հեղուկում ցենտրիֆուգումից հետո

Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկով մեթոդ- 1-3 մլ ազոտաթթվի 50%-անոց լուծույթը լցնում են փորձանոթի մեջ եւ նույնքան մեզը խնամքով շերտավորում պատի երկայնքով։ Ժամանակը գրանցվում է վայրկյանաչափի վրա: Եթե ​​հեղուկների միջերեսի օղակը ձևավորվում է անմիջապես կամ ավելի շուտ, քան շերտավորումից 2 րոպե անց, ապա մեզը պետք է նոսրացնել ջրով: Դրանից հետո կատարվում է նոսրացած մեզի մեջ սպիտակուցի կրկնակի որոշում։ Նոսրացումն իրականացվում է այնքան ժամանակ, մինչև 2-րդ և 3-րդ րոպեների միջև հայտնվի սպիտակ օղակ, երբ նոսրացված մեզը ավելացվում է ազոտաթթվի մեջ: Սպիտակուցի քանակը որոշվում է 0,033 ppm-ը նոսրացման աստիճանով բազմապատկելով:

18. Ֆլորայի, գոնոկոկի, տրիխոմոնասի համար քսուքներ վերցնելու տեխնիկա, բջջաբանական հետազոտություն, KPI.

Ֆլորայի քսման տեխնիկաՆյութը վերցվում է արգանդի վզիկի ջրանցքից և միզուկից հատուկ խոզանակով տեսողական հսկողության ներքո։ Ստացված նմուշն անմիջապես դրվում է ապակե սլայդի վրա և տրորվում:

Տրիխոմոնասի համար քսուք վերցնելու տեխնիկասկզբում նյութը վերցվում է միզածորանի լորձաթաղանթից (նախնական մերսումից հետո 1 րոպե սիմֆիզի վրա 1 րոպե) և հեշտոցի հետին ծորանից քերելով, այնուհետև արգանդի վզիկի հեշտոցային հատվածը մաքրվում է. ստերիլ շվաբր՝ խոնավացված ֆիզիոլոգիական լուծույթով, լորձաթաղանթը հանվում է, ներս արգանդի վզիկի ջրանցքզգուշորեն 1,0-1,5 սմ-ից ոչ ավելի խորության վրա տեղադրվում է զոնդ և արգանդի վզիկի լորձաթաղանթից քերծվածք է վերցվում։

Գոնոկոկի համար քսելու տեխնիկաՆյութը վերցվում է միզածորանից, բարթոլինային գեղձերից և պարաուրետրալ անցուղիներից՝ դրանք ֆիզիոլոգիական լուծույթով, հեշտոցային պինցետով կամ հատուկ զոնդով թրջված բամբակյա շվաբրով սրբելուց հետո։ Հետանցքից նյութը վերցվում է բութ գդալով։ Խրոնիկ և տորպիդ գոնորեայի դեպքում ուսումնասիրությունից առաջ սադրանք է կատարվում՝ հարուցիչը բացահայտելու հավանականությունը մեծացնելու համար։

Դուք չեք կարող վերցնել նյութը բամբակյա շվաբրով և դաշտանի ժամանակ:

Ցիտոլոգիական հետազոտության համար քսուքներ վերցնելու տեխնիկաԷկզոսերվիքսի, հեշտոցի և վուլվայի մակերևույթից քսուք վերցվում է սպաթուլայի միջոցով, էնդոկերվիքսից՝ էնդո խոզանակով։ Նյութը կիրառվում է բարակ շերտհատուկ մշակված յուղազերծված ապակու վրա և մշակված հատուկ կազմկանխելու բջիջների չորացումը. Պատրաստուկները ներկվում են Պապանիկոլաուի մեթոդով (այսպես կոչված՝ Պապ քսուք) և մանրադիտակով:

Կարիոպիկնոտիկ ինդեքս- պիկնոտիկ միջուկներով մակերեսային բջիջների տոկոսը վեզիկուլյար (ոչ պիկնոտիկ) միջուկներով բջիջներին: CRPD ֆոլիկուլային փուլի սկզբում դաշտանային ցիկլը 25-30%, օվուլյացիայի ժամանակ 60-70%, լյուտալային փուլում նվազում է մինչև 25%:

Հրահանգ

Սպիտակուցի որոշման որակական մեթոդներ մեզիՀելլերի մեթոդ, սուլֆոսալիցիլաթթվի 20% լուծույթի թեստ, եռման թեստ և այլն: Կիսաքանակական մեթոդներ. ախտորոշիչ թեստային շերտերի օգտագործումը սպիտակուցը որոշելու համար մեզի, Բրանդբերգ-Ռոբերտս-Ստոլնիկով մեթոդ. Քանակական մեթոդներ՝ պղտոր և գունամետրիկ:

Օրական սպիտակուցի որոշում մեզի 0,033 գ/լ կամ ավելի կոնցենտրացիայի դեպքում պաթոլոգիա է: Որպես կանոն, մեզի առավոտյան մասում սպիտակուցի կոնցենտրացիան չի գերազանցում 0,002 գ/լ-ը, իսկ օրական մեզիսպիտակուցի կոնցենտրացիան ոչ ավելի, քան 50-150 մգ սպիտակուց:

Աղբյուրներ:

• մեզի մեջ սպիտակուցի որոշում

Մեզը մարդու նյութափոխանակության արդյունք է: Այն առաջանում է երիկամներում արյան զտման ժամանակ, ինչի պատճառով մեզի բաղադրությունը տալիս է մարդու օրգանիզմի վիճակի հստակ նկարագրություն։

Մեզը ավելի քան 150 միացությունների համալիր լուծույթ է։ Որոշ կոնկրետ նյութեր, օրինակ՝ ացետոն, լեղաթթուներ, սպիտակուցներ, գլյուկոզա, կարող են առկա լինել միայն որոշ հիվանդությունների դեպքում։

Մարդու առողջությունը վերահսկելու համար առաջին հերթին անհրաժեշտ է որոշել մեզի քանակը։ Նորմը օրական 1-1,8 լիտր մեզի առաջացումն է։ Երբ արտազատվում է ավելի քան 2 լիտր մեզ, սա երիկամների աշխատանքի հնարավոր խախտման նշան է. շաքարային դիաբետև մի շարք այլ հիվանդություններ: Եթե ​​օրական 0,5 լիտրից պակաս մեզ է գոյանում, ապա տեղի է ունենում միզածորանի կամ միզապարկի խցանում։

մեզի գույնը

Արտազատվող մեզի գույնը կախված է բազմաթիվ գործոններից, ուստի այն կարող է տարբեր լինել՝ բաց դեղինից մինչև նարնջագույն: Որոշակի երանգների առկայության վրա կարող են ազդել որոշ սննդամթերքներ, ինչպես նաև անձի կողմից ընդունված դեղամիջոցները:

Դեղորայք ընդունելուց հետո մեզը կարող է ներկվել և ձեռք բերել կարմրավուն երանգ: Եթե ​​մարդն ակտիվորեն շարժվում է, մինչդեռ նա մեծ քանակությամբ քրտինքն է արտանետում, մեզի ինտենսիվությունը դեղին, ինչպես նաև այնպիսի միջոցներ ընդունելիս, ինչպիսիք են Նիտրոքսոլինը կամ Բիոմիցինը:

Եթե ​​մարդը չի ընդունել գունազարդման մթերքներ և դեղամիջոցներ, բայց նրա մեզի գույնը տարբերվում է սովորականից, կարելի է կասկածել օրգանիզմում հիվանդության առկայության մասին։ Օրինակ՝ լյարդի հիվանդությունների դեպքում մեզը կունենա մուգ դեղնավուն կամ կանաչավուն գույն։

Արտազատվող մեզի մեջ արյան առկայությունը հստակ ցույց է տալիս քարի առկայություն կամ երիկամային արյունահոսություն, եթե նկատվում է նաև ցավ։

Եթե ​​միզելը դժվար է, դա կարող է վկայել միզապարկի վարակի հետևանքով առաջացած բորբոքային գործընթացի մասին: Եվ ահա կեղտը պղտոր մեզիվկայում է լուրջ հիվանդություններերիկամներ.

Սպիտակուցներ մեզի մեջ

Մարդու արյան մեջ սպիտակուց չկա կամ դրա քանակն այնքան փոքր է, որ հնարավոր չէ որոշել լաբորատոր թեստերի միջոցով։ Եթե ​​մեզի մեջ հայտնաբերվում է սպիտակուց, ապա անհրաժեշտ է կրկնակի թեստեր անցկացնել, քանի որ այն կարող է առկա լինել առավոտյան արթնանալիս, ինչպես նաև մարզիկների ծանր ֆիզիկական աշխատանքից կամ մարզվելուց հետո:

Տեսողականորեն որոշել, թե արդյոք սպիտակուցը առկա է մեզի մեջ, թե ոչ, 100% անհնար է: Կարելի է միայն կռահել, երբ մեզի մեջ մեծ քանակությամբ սպիտակավուն փաթիլներ կան։

Եթե ​​մեզի մեջ մի քանի անգամ հայտնաբերվում է սպիտակուց, դա վկայում է երիկամների ինչ-որ հիվանդության առկայության մասին: Բորբոքային պրոցեսներդրանցում առաջացող սպիտակուցի քանակի մի փոքր ավելացում: Եթե ​​մեզի մեջ 2 գրամից ավելի է արտազատվում, սա է տագնապի ազդանշան.

Պիելոնեֆրիտ է բորբոքային հիվանդություն, որի դեպքում ախտահարված են երիկամային կոնքը, կալիկները և պարենխիման։ Շատ դեպքերում բորբոքումն առաջանում է բակտերիալ վարակ. Ամբողջական վերականգնումը հնարավոր է միայն ժամանակին ախտորոշմամբ, հետևաբար, երբ ի հայտ են գալիս ախտանիշներ, անհրաժեշտ է մանրակրկիտ հետազոտություն։