Méthodes de détermination des protéines dans l'urine. Méthodes d'évaluation quantitatives. Méthodes de détermination des protéines dans l'urine

06.05.2019

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Normalement, les protéines sont excrétées dans l'urine en quantité relativement faible, généralement pas plus de 100 à 150 mg / jour.

La diurèse quotidienne chez une personne en bonne santé est de 1000-1500 ml / jour; ainsi, la concentration en protéines dans des conditions physiologiques est de 8-10 mg/dL (0,08-0,1 g/L).

La protéine totale de l'urine est représentée par trois fractions principales - les albumines, les mucoprotéines et les globulines.

L'albumine urinaire est la partie de l'albumine sérique qui a été filtrée dans le glomérule et n'a pas été réabsorbée dans le tubules rénaux; l'excrétion urinaire normale d'albumine est inférieure à 30 mg/jour. Une autre source principale de protéines dans l'urine est les tubules rénaux, en particulier la partie distale des tubules. Ces tubules sécrètent les deux tiers des protéines urinaires totales ; de cette quantité, environ 50% est représenté par la glycoprotéine Tamm-Horsfall, qui est sécrétée par l'épithélium des tubules distaux et joue un rôle important dans la formation calculs urinaires. D'autres protéines sont présentes dans l'urine petite quantité et proviennent de protéines plasmatiques de faible poids moléculaire filtrées sur filtre rénal qui ne sont pas réabsorbées dans les tubules rénaux, les microglobulines de l'épithélium tubulaire rénal (RTE) et les sécrétions prostatiques et vaginales.

La protéinurie, c'est-à-dire une augmentation de la teneur en protéines dans l'urine, est l'un des symptômes les plus significatifs reflétant une atteinte rénale. Pourtant, toute la ligne d'autres conditions peuvent également être accompagnées d'une protéinurie. Par conséquent, il existe deux principaux groupes de protéinurie : la protéinurie rénale (vraie) et extrarénale (fausse).

Dans la protéinurie rénale, la protéine pénètre dans l'urine directement à partir du sang en raison d'une augmentation de la perméabilité du filtre glomérulaire. La protéinurie rénale est souvent retrouvée dans la glomérulonéphrite, la néphrose, la pyélonéphrite, la néphrosclérose, l'amylose rénale, Formes variées néphropathies, par exemple, néphropathie de la grossesse, états fébriles, hypertension etc. La protéinurie peut également être retrouvée chez les personnes en bonne santé après un effort physique intense, une hypothermie, un stress psychologique. Chez les nouveau-nés au cours des premières semaines de vie, on observe une protéinurie physiologique et une asthénie chez les enfants et les adolescents en association avec croissance rapideà l'âge de 7-18 ans, une protéinurie orthostatique est possible (en position verticale du corps).

Avec la fausse protéinurie (extrarénale), la source de protéines dans l'urine est un mélange de leucocytes, d'érythrocytes et de cellules urothéliales de l'épithélium des voies urinaires. La décomposition de ces éléments, particulièrement prononcée dans réaction alcaline l'urine, conduit à la pénétration de protéines dans l'urine, qui a déjà passé le filtre rénal. Surtout un degré élevé la fausse protéinurie donne un mélange de sang dans les urines, avec une hématurie abondante elle peut atteindre 30 g/l voire plus. Maladies pouvant s'accompagner d'une protéinurie extrarénale - maladie de la lithiase urinaire, tuberculose du rein, tumeurs du rein ou des voies urinaires, cystite, pyélite, prostatite, urétrite, vulvovaginite.

La classification clinique comprend une protéinurie légère (moins de 0,5 g/jour), modérée (0,5 à 4 g/jour) ou sévère (supérieure à 4 g/jour).

La plupart des patients atteints d'une maladie rénale telle qu'une glomérulonéphrite aiguë ou une pyélonéphrite ont une protéinurie légère, mais les patients atteints d'un syndrome néphrotique excrètent généralement plus de 4 g de protéines par jour dans l'urine.

Un large éventail de méthodes sont utilisées pour la détermination quantitative des protéines, en particulier la méthode Brandberg-Roberts-Stolnikov unifiée, la méthode au biuret, la méthode utilisant l'acide sulfosalicylique, les méthodes utilisant le colorant bleu de Coomassie, le colorant rouge pyrogallol, etc.

L'utilisation de diverses méthodes pour déterminer les protéines dans l'urine a conduit à une grave confusion dans l'interprétation des limites de la teneur normale en protéines dans l'urine. Étant donné que 2 méthodes sont le plus souvent utilisées dans les laboratoires - avec l'acide sulfosalicylique et le colorant rouge pyrogallol, nous examinerons le problème de l'exactitude des limites des normes pour eux. De la position de la méthode sulfosalicylique dans l'urine normale, la teneur en protéines ne doit pas dépasser 0,03 g / l, de la position de la méthode pyrogallol - 0,1 g / l! Différences triplées !

Les faibles valeurs de la norme de concentration de protéines dans l'urine lors de l'utilisation d'acide sulfosalicylique sont dues aux points suivants :

la courbe d'étalonnage est construite selon solution aqueuse albumine. L'urine dans sa composition est très différente de l'eau : pH, sels, composés de bas poids moléculaire (créatinine, urée, etc.). En conséquence, selon Altshuler, Rakov et Tkachev, l'erreur de détermination des protéines dans l'urine peut être multipliée par 3 ou plus ! Celles. des résultats de détermination corrects ne peuvent être obtenus que dans les cas où l'urine a un très faible gravité spécifique et dans sa composition et son pH se rapproche de l'eau;
sensibilité plus élevée de la méthode sulfosalicylique à l'albumine par rapport aux autres protéines (alors que, comme mentionné ci-dessus, l'albumine dans les échantillons d'urine normaux ne dépasse pas 30% de la protéine urinaire totale);
si le pH de l'urine est déplacé vers le côté alcalin, l'acide sulfosalicylique est neutralisé, ce qui est également la raison de la sous-estimation des résultats de la détermination des protéines ;
la vitesse de sédimentation des précipités est sujette à des variations importantes - sinon fortes concentrations la précipitation des protéines est ralentie, et un arrêt précoce de la réaction conduit à une sous-estimation du résultat ;
la vitesse de la réaction de précipitation dépend essentiellement de l'agitation du mélange réactionnel. À des concentrations élevées de protéines, une agitation vigoureuse du tube peut entraîner la formation de gros flocons et leur décantation rapide.

Toutes les caractéristiques ci-dessus de la méthode conduisent à une sous-estimation significative de la concentration en protéines déterminée dans l'urine. Le degré de sous-estimation dépend fortement de la composition d'un échantillon d'urine particulier. Étant donné que la méthode à l'acide sulfosalicylique donne des concentrations de protéines sous-estimées, la limite normale de cette méthode de 0,03 g / l est également sous-estimée d'environ trois fois par rapport aux données fournies dans les ouvrages de référence étrangers sur les diagnostics de laboratoire clinique.

La grande majorité des laboratoires des pays occidentaux ont abandonné l'utilisation de la méthode sulfosalicylique pour déterminer la concentration de protéines dans l'urine et utilisent activement la méthode au pyrogallol à cette fin. La méthode au pyrogallol pour déterminer la concentration de protéines dans l'urine et d'autres fluides biologiques est basée sur le principe photométrique de la mesure de la densité optique d'un complexe coloré formé par l'interaction de molécules de protéines avec des molécules du complexe de colorant Pyrogallol Red et du complexe de molybdate de sodium ( Complexe Pyrogallol Rouge-Molybdate).

Pourquoi la méthode au pyrogallol fournit-elle des mesures plus précises des protéines urinaires ? Premièrement, en raison de la plus grande dilution de l'échantillon d'urine dans le mélange réactionnel. Si dans la méthode sulfosalicylique le rapport échantillon d'urine/réactif est de 1/3, alors dans la méthode au pyrogallol il peut aller de 1/12,5 à 1/60, selon la variante de la méthode, ce qui réduit considérablement l'effet de la composition de l'urine sur la résultat de la mesure. Deuxièmement, la réaction se déroule dans un tampon succinate, c'est-à-dire à un pH stable. Et, enfin, le principe même de la méthode, pourrait-on dire, est plus « transparent ». Le molybdate de sodium et le colorant rouge pyrogallol forment un complexe avec une molécule de protéine. Cela conduit au fait que les molécules de colorant à l'état libre, qui n'absorbent pas la lumière à une longueur d'onde de 600 nm, absorbent la lumière en combinaison avec la protéine. Ainsi, nous marquons chaque molécule de protéine avec un colorant et, par conséquent, nous constatons que le changement de densité optique du mélange réactionnel à une longueur d'onde de 600 nm est clairement corrélé à la concentration de protéines dans l'urine. De plus, étant donné que l'affinité du rouge de pyrogallol pour différentes fractions protéiques est presque la même, la méthode vous permet de déterminer la protéine urinaire totale. Par conséquent, la frontière valeurs normales la concentration de protéines dans l'urine est de 0,1 g/l (elle est indiquée dans toutes les directives occidentales modernes pour les diagnostics cliniques et de laboratoire, y compris le "Clinical Guide to Laboratory Tests", édité par N. Titz). Les caractéristiques comparatives des méthodes au pyrogallol et aux sulfosalicyliques pour la détermination des protéines dans l'urine sont présentées dans le tableau 1.

En conclusion, je voudrais à nouveau insister sur le fait que lorsque le laboratoire passe de la méthode sulfosalicylique de détermination des protéines dans les urines à la méthode pyrogallol, la limite des valeurs normales augmente significativement (de 0,03 g/l à 0,1 g /l!). Le personnel du laboratoire doit certainement informer les cliniciens à ce sujet, car. dans cette situation, le diagnostic de protéinurie ne peut être posé que lorsque la teneur en protéines dans les urines dépasse 0,1 g/l.

Bibliographie.

Altshuler B.Yu., Rakov S.S., Tkachev G.A. // Question. mon chéri. chimie. - 2001. - N° 4. - C.426-438.
Kim Yu.V., Potekhin O.E., Tokar M.I., Shibanov A.N. // Labo. mon chéri. - 2003. - N° 6. - C.94-98.
Guide clinique des tests de laboratoire, éd. N. Titsa.- M.- Unimed-press.-2003.- 942 p.
Kozlov A.V., Slepysheva V.V. Méthodes de détermination des protéines dans l'urine: opportunités et perspectives // Recueil des travaux du VII annuel. SPb néphrol. séminaire. - Saint-Pétersbourg : TNA. - 1999. - C.17-28.
Pupkova V.I., Pikalov I.V., Khrykina E.N., Kharkovskiy A.V. // Nouvelles "Vector-Best". - 2003. - N° 4 (30).
Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ann. Clin. Biochimie. - 1991. - Vol. 28 (partie 5). - P.467-473.
Médecine des laboratoires cliniques. Éd. par Kenneth D. McClatchey. - 2e éd.-2001.- 1993p.
Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // clinique. Biochimie. - 2000. - Vol. 33.-P.487-494.
Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Composition et dispositif pour le dosage des protéines urinaires et procédé d'utilisation // Brevet US n° 5326707. - 1994.
Kaplan I.V., Levinson S.S. // clinique. Chim. - 1999. - Vol. 45.-P.417-419.
Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. de Méd. - 2003. - Vol. 70(6). - P.535-547.
Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // clinique. Chim. - 2001. - Vol. 47.-P.2183-2184.
Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Article en français. - Ann. Biol. Clin. (Paris). - 1998. - Vol. 56(6). - P.719-723.
Marshall T., Williams K.M. // clinique. Chim. - 2003. - Vol. 49 (12). - P.2111-2112.
Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D'Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Chim. acte. - 2002. - Vol. 326(1-2). - P.177-183.
Ringsrud K.M., Linne J.J. Analyse d'urine et fluides corporels : A ColorText et Atlas // Mosby. - 1995. - P.52-54.
Shepard MD, Penberthy L.A. // clinique. Chim. - 1987. - Vol. 33.-P.792-795.
Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. méthodes. - 2001. - Vol. 47.-P.197-207.
Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. méthodes. - 2003. - Vol. 57(1). - P.45-55.

De petites quantités de protéines se trouvent dans l'urine quotidienne d'individus en bonne santé. Cependant, des concentrations aussi faibles ne peuvent pas être détectées à l'aide de méthodes conventionnelles rechercher. L'excrétion de plus grandes quantités de protéines, à laquelle les tests qualitatifs habituels pour les protéines dans l'urine deviennent positifs, est appelée protéinurie. Il existe une protéinurie rénale (vraie) et extrarénale (fausse). Dans la protéinurie rénale, les protéines pénètrent dans l'urine directement à partir du sang en raison d'une augmentation de sa filtration par les glomérules du rein ou d'une diminution de la réabsorption tubulaire.

Protéinurie rénale (vraie)

La protéinurie rénale (vraie) est fonctionnelle et organique. Parmi les protéinuries rénales fonctionnelles, les types suivants sont le plus souvent observés :

Protéinurie physiologique des nouveau-nés, qui disparaît entre le 4e et le 10e jour après la naissance, et chez les prématurés un peu plus tard ;
- l'albuminurie orthostatique, typique des enfants âgés de 7 à 18 ans et n'apparaissant qu'en position verticale du corps ;
- albuminurie transitoire (accident vasculaire cérébral), qui peut être causée par diverses maladies du système digestif, une anémie sévère, des brûlures, des blessures ou facteurs physiologiques: lourd effort physique, hypothermie, émotions puissantes, nourriture abondante et riche en protéines, etc.

La protéinurie organique (rénale) est observée en raison du passage des protéines du sang à travers les zones endommagées de l'endothélium des glomérules rénaux dans les maladies rénales (glomérulonéphrite, néphrose, néphrosclérose, amylose, néphropathie pendant la grossesse), les troubles de l'hémodynamique rénale (veineuse rénale hypertension artérielle, hypoxie), effets trophiques et toxiques (y compris médicamenteux) sur les parois des capillaires glomérulaires.

Protéinurie extrarénale (fausse)

Protéinurie extrarénale (fausse) dans laquelle la source de protéines dans l'urine est un mélange de leucocytes, d'érythrocytes, de bactéries et de cellules urothéliales. observé dans les maladies urologiques (lithiase urinaire, tuberculose rénale, tumeurs du rein et des voies urinaires, etc.).

Détermination des protéines dans l'urine

La plupart des méthodes qualitatives et quantitatives de détermination des protéines dans l'urine sont basées sur leur coagulation dans le volume d'urine ou à l'interface des milieux (urine et acide).

Parmi les méthodes qualitatives de détermination de bedka dans l'urine, le test unifié à l'acide sulfosalicylique et le test de l'anneau Heller sont les plus largement utilisés.

Un prélèvement standardisé avec de l'acide sulfasalicylique est réalisé comme suit. 3 ml d'urine filtrée sont versés dans 2 tubes. Dans l'un d'eux, ajoutez 6 à 8 gouttes d'une solution à 20% d'acide sulfasalicylique. Les deux tubes sont comparés sur un fond sombre. La turbidité de l'urine dans un tube à essai contenant de l'acide sulfasalicylique indique la présence de protéines. Avant l'étude, il est nécessaire de déterminer la réaction de l'urine, et si elle est alcaline, puis acidifiez avec 2-3 gouttes d'une solution à 10% acide acétique.

Le test de Geller est basé sur le fait qu'en présence de protéine dans l'urine à la frontière de l'acide nitrique et de l'urine, celle-ci coagule et un anneau blanc apparaît. 1-2 ml d'une solution d'acide nitrique à 30% sont versés dans un tube à essai et exactement la même quantité d'urine filtrée est soigneusement déposée le long de la paroi du tube à essai. L'apparition d'un anneau blanc à l'interface entre deux fluides indique la présence de protéines dans les urines. Il convient de rappeler que parfois un anneau blanc se forme en présence d'une grande quantité d'urates, mais contrairement à l'anneau protéique, il apparaît légèrement au-dessus de la limite entre deux liquides et se dissout lorsqu'il est chauffé [Pletneva N.G., 1987].

Les méthodes quantitatives les plus couramment utilisées sont :

1) la méthode unifiée de Brandberg-Roberts-Stolnikov, basée sur le test de l'anneau de Heller ;
2) méthode photoélectrocolorimétrique pour le dosage quantitatif des protéines dans l'urine par la turbidité formée par l'addition d'acide sulfasalicylique ;
3) méthode biuret.

La détection des protéines dans l'urine par une méthode accélérée simplifiée est réalisée par une méthode colorimétrique utilisant du papier indicateur, qui est produit par Lachema (Slovaquie), Albuphan, Ames (Angleterre), Albustix, Boehringer (Allemagne), Comburtest et autres. en immergeant dans l'urine une bande de papier spéciale imprégnée de bleu de tétrabromophénol et de tampon citrate, qui change de couleur du jaune au bleu en fonction de la teneur en protéines de l'urine. Provisoirement, la concentration de protéines dans l'urine de test est déterminée à l'aide d'une échelle standard. Pour obtenir résultats corrects les conditions suivantes doivent être respectées. le pH de l'urine doit être compris entre 3,0 et 3,5 ; avec une urine trop alcaline (pH 6,5) sera obtenue résultat faux positif, et avec une urine trop acide (pH 3,0) - faux négatif.

Le papier ne doit pas être en contact avec l'urine du test plus longtemps qu'indiqué dans les instructions, sinon le test donnera une réaction faussement positive. Ce dernier est également observé lorsqu'il y a une grande quantité de mucus dans l'urine. Sensibilité diverses sortes et les séries d'articles peuvent être différentes, de sorte que l'évaluation quantitative des protéines dans l'urine par cette méthode doit être traitée avec prudence. Il est impossible de déterminer sa quantité dans l'urine quotidienne à l'aide de papier indicateur [Pletneva N.G., 1987]

Définition de la protéinurie quotidienne

Il existe plusieurs façons de déterminer la quantité de protéines excrétées dans l'urine par jour. La plus simple est la méthode Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Méthodologie. 5 à 10 ml d'urine quotidienne soigneusement mélangée sont versés dans un tube à essai et une solution à 30% d'acide nitrique est soigneusement ajoutée le long de ses parois. En présence de protéines dans l'urine à raison de 0,033% (soit 33 mg pour 1 litre d'urine), un anneau blanc fin mais bien visible apparaît après 2-3 minutes. A plus faible concentration, le test est négatif. Avec une teneur en protéines plus élevée dans l'urine, sa quantité est déterminée par des dilutions répétées d'urine avec de l'eau distillée jusqu'à ce que l'anneau cesse de se former. Dans le dernier tube à essai dans lequel l'anneau est encore visible, la concentration en protéines sera de 0,033 %. En multipliant 0,033 par le degré de dilution de l'urine, déterminez la teneur en protéines dans 1 litre d'urine non diluée en grammes. Ensuite, la teneur en protéines dans l'urine quotidienne est calculée par la formule :

K \u003d (xV) / 1000

Où K est la quantité de protéines dans l'urine quotidienne (g); x est la quantité de protéines dans 1 litre d'urine (g); V est la quantité d'urine excrétée par jour (ml).

Normalement, de 27 à 150 mg (moyenne de 40 à 80 mg) de protéines sont excrétées dans l'urine au cours de la journée.

Ce test permet de déterminer dans l'urine uniquement les protéines fines (albumine). Les méthodes quantitatives plus précises (méthode colorimétrique de Kjeldahl, etc.) sont assez complexes et nécessitent un équipement particulier.

Avec la protéinurie rénale, non seulement les albumines, mais également d'autres types de protéines sont excrétées dans l'urine. Un protéinogramme normal (selon Seitz et al., 1953) a le pourcentage suivant : albumine - 20 %, α 1 -globulines - 12 %, α 2 -globulines - 17 %, γ-globulines - 43 % et β-globulines - 8% . Le rapport des albumines aux globulines change avec diverses maladies les reins, c'est-à-dire le rapport quantitatif entre les fractions protéiques est rompu.

Les méthodes les plus courantes de fractionnement des uroprotéines sont les suivantes : relargage avec des sels neutres, fractionnement électrophorétique, méthodes immunologiques (réaction d'immunodiffusion radiale selon Mancini, analyse immunoélectrophorétique, immunoélectrophorèse par précipitation), chromatographie, filtration sur gel et ultracentrifugation.

Dans le cadre de l'introduction de méthodes de fractionnement des uroprotéines basées sur l'étude de la mobilité électrophorétique, de la variabilité du poids moléculaire, de la taille et de la forme des molécules d'uroprotéines, il est devenu possible d'isoler les types de protéinurie caractéristiques d'une maladie particulière, d'étudier les clairances de plasma individuel protéines. A ce jour, plus de 40 protéines plasmatiques ont été identifiées dans l'urine, dont 31 protéines plasmatiques dans l'urine normale.

Protéinurie sélective

Ces dernières années, le concept de sélectivité de la protéinurie a émergé. En 1955, Hardwicke et Squire ont formulé le concept de protéinurie "sélective" et "non sélective", après avoir déterminé que la filtration des protéines plasmatiques dans l'urine suit un certain schéma : plus le poids moléculaire de la protéine excrétée dans l'urine est élevé, plus sa clairance est faible et plus sa concentration dans l'urine finale est faible. La protéinurie, correspondant à ce schéma, est sélective, contrairement à la non sélective, pour laquelle une perversion du schéma dérivé est caractéristique.

La détection de protéines de poids moléculaire relativement important dans l'urine indique l'absence de sélectivité du filtre rénal et ses dommages prononcés. Dans ces cas, on parle d'une faible sélectivité de la protéinurie. Par conséquent, à l'heure actuelle, la détermination des fractions protéiques de l'urine à l'aide des méthodes d'électrophorèse dans des gels d'amidon et de polyacrylamide s'est généralisée. Sur la base des résultats de ces méthodes de recherche, on peut juger de la sélectivité de la protéinurie.

Selon VS Makhlina (1975), la plus justifiée est la détermination de la sélectivité de la protéinurie en comparant les clairances de 6 à 7 protéines plasmatiques individuelles (albumine, tranéferrine, α 2 - macroglobuline, IgA, IgG, IgM) en utilisant des méthodes immunologiques quantitatives spécifiques de réaction d'immunodiffusion radiale selon Mancini, analyse immunoélectrophorétique et immunoélectrophorèse par précipitation. Le degré de sélectivité de la protéinurie est déterminé par l'indice de sélectivité, qui est le rapport des protéines comparées et de référence (albumine).

L'étude des clairances des protéines plasmatiques individuelles permet d'obtenir des informations fiables sur l'état des membranes basales de filtration des glomérules du rein. La relation entre la nature des protéines excrétées dans l'urine et les modifications des membranes basales des glomérules est si prononcée et constante que l'uroprotéinogramme peut juger indirectement des modifications physiopathologiques des glomérules des reins. Amende la taille moyenne les pores de la membrane basale glomérulaire sont de 2,9 à 4 A ° NM, qui peuvent laisser passer des protéines ayant un poids moléculaire allant jusqu'à 10 4 (myoglobuline, acide α 1 - glycoprotéine, chaînes légères d'immunoglobuline, fragments Fc et Fab - IgG, albumine et transferrine).

Avec la glomérulonéphrite, le syndrome néphrotique, la taille des pores des membranes basales des glomérules augmente et, par conséquent, la membrane basale devient perméable aux molécules protéiques de grande taille et masse (céruloplasmine, haptoglobine, IgG, IgA, etc.). Avec un degré extrême de dommages aux glomérules des reins, des molécules géantes de protéines du plasma sanguin (α 2 -macroglobuline, IgM et β 2 -lipoprotéine) apparaissent dans l'urine.

En déterminant le spectre protéique de l'urine, on peut conclure que certaines parties du néphron sont principalement affectées. Pour les glomérulonéphrites avec une lésion prédominante des membranes basales glomérulaires, la présence de protéines de poids moléculaire de gros et moyen dans les urines est caractéristique. Pour la pyélonéphrite avec une lésion prédominante des membranes basales des tubules, l'absence de grandes protéines moléculaires et la présence de quantités accrues de protéines de poids moléculaire moyen et bas sont caractéristiques.

β 2 -Microglobuline

En plus des protéines bien connues telles que l'albumine, les immunoglobulines, les lipoprotéines. fibrinogène, transferrine, l'urine contient des protéines microprotéiques plasmatiques, parmi lesquelles la β 2 -microglobuline, découverte par Berggard et Bearn en 1968, présente un intérêt clinique.Avec un faible poids moléculaire (poids moléculaire relatif de 1800), elle traverse librement les glomérules rénaux et réabsorbé dans les tubules proximaux. Ceci permet la détermination quantitative de la β 2 -microglobuline dans le sang et l'urine pour déterminer la filtration glomérulaire et la capacité des reins à résorber les protéines dans les tubules proximaux.

La concentration de cette protéine dans le plasma sanguin et les urines est déterminée par radioimmunodosage à l'aide d'un kit standard « Phade-bas β 2 -mikroiest » (Pharmacia, Suède). Le sérum sanguin des personnes en bonne santé contient en moyenne 1,7 mg / l (plage de 0,6 à 3 mg / l), dans l'urine - une moyenne de 81 μg / l (maximum 250 μg / l) β 2 -microglobuline. Son excès dans l'urine supérieur à 1000 mcg/l est un phénomène pathologique. La teneur en β 2 -microglobuline dans le sang augmente dans les maladies accompagnées d'une altération de la filtration glomérulaire, en particulier dans la glomérulonéphrite aiguë et chronique, la polykystose rénale, la néphrosclérose, la néphropathie diabétique, l'insuffisance rénale aiguë.

La concentration de β 2 -microglobuline dans l'urine augmente avec les maladies accompagnées d'une violation de la fonction de réabsorption des tubules, ce qui entraîne une augmentation de son excrétion dans l'urine de 10 à 50 fois, en particulier avec la pyélonéphrite, l'insuffisance rénale chronique échec, intoxication purulente, etc. Il est caractéristique qu'avec la cystite contrairement à la pyélonéphrite, il n'y ait pas d'augmentation de la concentration de β 2 -microglobuline dans l'urine, qui peut être utilisée pour le diagnostic différentiel de ces maladies. Cependant, lors de l'interprétation des résultats de l'étude, il faut tenir compte du fait que toute augmentation de température s'accompagne toujours d'une augmentation de l'excrétion de β 2 -microglobuline dans l'urine.

Molécules moyennes de sang et d'urine

Les molécules moyennes (MS), autrement appelées toxines protéiques, sont des substances d'un poids moléculaire de 500 à 5 000 daltons. structure physique eux est inconnu. La composition du SM comprend au moins 30 peptides : ocytocine, vasopressine, angiotensine, glucagon, hormone adrénocorticotrope (ACTH), etc. On observe une accumulation excessive de SM avec une diminution de la fonction rénale et une grande quantité de protéines déformées et de leurs métabolites dans le du sang. Ils ont divers effets biologiques et sont neurotoxiques, provoquent une immunosuppression secondaire, une anémie secondaire, inhibent la biosynthèse des protéines et l'érythropoïèse, inhibent l'activité de nombreuses enzymes et perturbent les phases du processus inflammatoire.

Le niveau de SM dans le sang et l'urine est déterminé par un test de dépistage, ainsi que par spectrophotométrie dans la zone ultraviolette à une longueur d'onde de 254 et 280 mm sur un spectrophotomètre DI-8B, ainsi que par spectrophotométrie dynamique avec traitement informatique dans la longueur d'onde gamme de 220-335 nm sur le même spectromètre Beckman. La teneur en SM dans le sang est prise comme norme, égale à 0,24 ± 0,02 arb. unités et dans l'urine - 0,312 ± 0,09 arb. unités
Étant des déchets normaux du corps, ils en sont normalement éliminés la nuit par filtration glomérulaire à 0,5%; 5% d'entre eux sont éliminés d'une autre manière. Toutes les fractions de SM subissent une réabsorption tubulaire.

Uroprotéines non plasmatiques (tissus)

En plus des protéines du plasma sanguin, il peut y avoir des protéines non plasmatiques (tissus) dans l'urine. Selon Buxbaum et Franklin (1970), les protéines non plasmatiques représentent environ 2/3 de tous les biocolloïdes urinaires et une proportion significative des uroprotéines dans la protéinurie pathologique. Les protéines tissulaires pénètrent dans l'urine directement à partir des reins ou des organes anatomiquement associés aux voies urinaires, ou pénètrent dans le sang à partir d'autres organes et tissus, et de celui-ci à travers les membranes basales des glomérules du rein dans l'urine. Dans ce dernier cas, l'excrétion des protéines tissulaires dans l'urine se produit de manière similaire à l'excrétion des protéines plasmatiques de différents poids moléculaires. La composition des uroprotéines non plasmatiques est extrêmement diversifiée. Parmi eux se trouvent des glycoprotéines, des hormones, des antigènes, des enzymes (enzymes).

Les protéines tissulaires dans l'urine sont détectées à l'aide des méthodes conventionnelles de la chimie des protéines (ultracentrifugation, chromatographie sur gel, divers types d'électrophorèse), des réactions spécifiques aux enzymes et aux hormones et des méthodes immunologiques. Ces derniers permettent également de déterminer la concentration d'uroprotéine non plasmatique dans l'urine et, dans certains cas, de déterminer les structures tissulaires qui sont devenues à l'origine de son apparition. La principale méthode de détection des protéines non plasmatiques dans l'urine est l'analyse par immunodiffusion avec un antisérum obtenu par immunisation d'animaux expérimentaux avec de l'urine humaine et ensuite appauvri (adsorbé) par les protéines du plasma sanguin.

Examen des enzymes dans le sang et l'urine

Dans le processus pathologique, on observe de profondes perturbations de l'activité vitale des cellules, accompagnées de la libération d'enzymes intracellulaires dans les milieux liquides du corps. Le diagnostic enzymatique est basé sur la détermination d'un certain nombre d'enzymes libérées par les cellules des organes affectés et non caractéristiques du sérum sanguin.
Des études sur le néphron humain et animal ont montré qu'il existe dans ses parties individuelles une différenciation enzymatique élevée, étroitement liée aux fonctions exercées par chaque département. Les glomérules du rein contiennent relativement un grand nombre de diverses enzymes.

Les cellules des tubules rénaux, en particulier les cellules proximales, contiennent quantité maximale enzymes. Leur activité élevée est observée dans l'anse de Henlé, les tubules directs et les conduits collecteurs. Les modifications de l'activité des enzymes individuelles dans diverses maladies rénales dépendent de la nature, de la gravité et de la localisation du processus. Ils sont observés avant l'apparition de modifications morphologiques des reins. Le contenu de diverses enzymes étant clairement localisé dans le néphron, la détermination de l'une ou l'autre enzyme dans l'urine peut contribuer au diagnostic topique. processus pathologique dans les reins (glomérules, tubules, corticaux ou médullaires), diagnostic différentiel des maladies rénales et détermination de la dynamique (atténuation et exacerbation) du processus dans le parenchyme rénal.

Pour le diagnostic différentiel des maladies du système génito-urinaire, la détermination de l'activité dans le sang et l'urine des enzymes suivantes est utilisée: lactate déshydrogénase (LDH), leucine aminopeptidase (LAP), phosphatase acide (AP), phosphatase alcaline (AP) , β-glucuronidase, glutamine-oxaloacétique transaminase (GST), aldolase, transamidinase, etc. L'activité des enzymes dans le sérum sanguin et l'urine est déterminée à l'aide de méthodes biochimiques, spectrophotométriques, chromatographiques, fluorimétriques et chimiluminescentes.

L'enzymurie dans les maladies rénales est plus prononcée et régulière que l'enzymemie. Il est particulièrement prononcé au stade aigu de la maladie ( pyélonéphrite aiguë, traumatisme, carie tumorale, infarctus rénal, etc.). Dans ces maladies, on trouve une activité élevée de transamidinase, LDH, phosphatase alcaline et CP, hyaluronidase, LAP, ainsi que des enzymes non spécifiques telles que GST, catalase [Polyantseva LR, 1972].

La localisation sélective des enzymes dans le néphron lors de la détection du LAP et de l'ALP dans l'urine nous permet de parler avec confiance des maladies aiguës et maladies chroniques rein (aigu insuffisance rénale, nécrose tubulaire rénale, glomérulonéphrite chronique) [Shemetov V.D., 1968]. Selon A.A. Karelin et L.R. Polyantseva (1965), la transamidinase ne se trouve que dans deux organes - le rein et le pancréas. C'est une enzyme mitochondriale des reins et est normalement absente du sang et de l'urine. Avec diverses maladies des reins, la transamidinase apparaît dans le sang et l'urine, et avec des dommages au pancréas - uniquement dans le sang.

Le test différentiel dans le diagnostic de la glomérulonéphrite et de la pyélonéphrite Krotkiewski (1963) considère l'activité de la phosphatase alcaline dans l'urine, dont l'augmentation est plus typique de la pyélonéphrite et de la glomérulosclérose diabétique que de la néphrite aiguë et chronique. L'augmentation de la dynamique de l'amylazémie avec une diminution simultanée de l'amylasurie peut indiquer une néphrosclérose et des rides du rein, le LAP est le plus important dans changements pathologiques dans les glomérules et les tubules contournés du rein, car son contenu dans ces parties du néphron est plus élevé [Shepotinovsky V.P. et al., 1980]. Pour le diagnostic de la néphrite lupique, le dosage de la β-glucuronidase et du CF est recommandé [Privalenko M.N. et al., 1974].

Lors de l'évaluation du rôle de l'enzymurie dans le diagnostic de la maladie rénale, les dispositions suivantes doivent être prises en compte. Les enzymes, étant par nature des protéines, avec un petit poids moléculaire peuvent traverser des glomérules intacts, déterminant l'enzyme dite physiologique. Parmi ces enzymes, l'α-amylase (poids moléculaire relatif 45 000) et l'uropepsine (poids moléculaire relatif 38 000) sont constamment détectées dans les urines.

Outre les enzymes de faible poids moléculaire dans l'urine des individus sains, d'autres enzymes peuvent également être trouvées en petites concentrations : LDH, aspartate et alanine aminotransférases, phosphatase alcaline et CP, maltase, aldolase, lipase, diverses protéases et peptidases, sulfatase, catalase, ribonucléase, peroxydase.

Selon Richterich (1958) et Hess (1962), les enzymes de haut poids moléculaire d'un poids moléculaire relatif supérieur à 70 000-100 000 ne peuvent pénétrer dans l'urine que si la perméabilité du filtre glomérulaire est altérée. La teneur normale en enzymes dans l'urine ne permet pas d'exclure le processus pathologique dans le rein avec occlusion urétérale. Avec l'épimurie, des enzymes peuvent être libérées non seulement des reins eux-mêmes, mais également d'autres organes parenchymateux, des cellules des muqueuses des voies urinaires, de la prostate, ainsi que des éléments formés d'urine avec hématurie ou leucocyturie.

La plupart des enzymes ne sont pas spécifiques au rein, il est donc difficile de déterminer d'où proviennent les enzymes présentes dans l'urine des personnes en bonne santé et malades. Cependant, le degré d'enzymurie, même pour des enzymes non spécifiques dans les lésions rénales, est supérieur à la normale ou à celui observé dans les maladies d'autres organes. Des informations plus précieuses peuvent être fournies par une étude approfondie de la dynamique d'un certain nombre d'enzymes, en particulier celles spécifiques à un organe, telles que la transaminase.

En résolvant la question de l'origine rénale de l'enzyme dans l'urine, l'étude des isoenzymes permet d'identifier des fractions typiques de l'organe étudié. Les isoenzymes sont des enzymes qui ont une action isogénique (catalysent la même réaction), mais une structure chimique et d'autres propriétés hétérogènes. Chaque tissu a son propre spectre d'isoenzymes. Des méthodes précieuses pour la séparation des isoenzymes sont l'électrophorèse dans des gels d'amidon et de polyacrylamide, ainsi que la chromatographie par échange d'ions.

Protéine de Bence Jones

Avec le myélome multiple et la macroglobulinémie de Waldenström, la protéine de Bence-Jones se retrouve dans l'urine. La méthode de détection de cette protéine dans l'urine est basée sur la réaction de thermoprécipitation. Les méthodes utilisées précédemment qui évaluent la dissolution de cette protéine à une température de 100 ° C et la re-précipitation lors du refroidissement ultérieur ne sont pas fiables, car tous les corps protéiques de Bence-Jones n'ont pas les propriétés appropriées.

Détection plus fiable de cette paraprotéine par sa précipitation à une température de 40-60 °C. Cependant, même dans ces conditions, la précipitation peut ne pas se produire dans des conditions trop acides (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) urine, avec une faible concentration en OPM et en protéine Bence-Jones. Les conditions les plus favorables à sa précipitation sont assurées par la méthode proposée par Patnem : 4 ml d'urine filtrée sont mélangés à 1 ml de tampon acétate 2 M pH 4,9 et chauffés 15 minutes au bain-marie à une température de 56 °C. En présence de protéine de Bence-Jones, un précipité prononcé apparaît pendant les 2 premières minutes.

A une concentration en protéine Bence-Jones inférieure à 3 g/l, le test peut être négatif, mais en pratique c'est extrêmement rare, puisque sa concentration dans les urines est généralement plus importante. Les échantillons d'ébullition ne sont pas entièrement fiables. En toute certitude, il peut être détecté dans les urines par la méthode immuno-électrophorétique utilisant des sérums spécifiques contre les chaînes lourdes et légères des immunoglobulines.

Protéine dans l'urine: méthodes de détermination

Protéinurie pathologique est l'un des signes les plus importants et constants des maladies des reins et des voies urinaires. La détermination de la concentration de protéines dans l'urine est un élément obligatoire et important de l'étude de l'urine. La détection et la quantification de la protéinurie sont importantes non seulement dans le diagnostic de nombreuses maladies rénales primaires et secondaires, mais l'évaluation des changements dans la sévérité de la protéinurie dans la dynamique contient des informations sur l'évolution du processus pathologique et l'efficacité du traitement. La détection de protéines dans les urines, même à l'état de traces, devrait être alarmante par rapport à maladie possible des reins ou des voies urinaires et nécessite une nouvelle analyse. Il convient de noter en particulier l'absurdité de l'étude de l'urine et, en particulier, la détermination de la protéine urinaire sans observer tous règles de collecte.

Toutes les méthodes de détermination des protéines dans l'urine peuvent être divisées en:

qualité,

semi-quantitatif,

Quantitatif.

Méthodes qualitatives

Tout tests qualitatifs pour les protéines dans l'urine basée sur la capacité des protéines à se dénaturer sous l'influence de divers facteurs physiques et chimiques. En présence de protéines dans l'échantillon d'urine à tester, une turbidité ou une floculation apparaît.

Conditions de détermination des protéines dans l'urine sur la base de la réaction de coagulation :

L'urine doit être acide. L'urine alcaline est acidifiée avec quelques (2 - 3) gouttes d'acide acétique (5 - 10%).

L'urine doit être claire. La turbidité est éliminée à travers un filtre en papier. Si le trouble persiste, ajouter du talc ou de la magnésie brûlée (environ 1 cuillère à café pour 100 ml d'urine), agiter et filtrer.

Un prélèvement qualitatif doit être réalisé dans deux éprouvettes dont l'une est témoin.

La recherche de turbidité doit être sur un fond noir en lumière transmise.

Les méthodes qualitatives pour déterminer les protéines dans l'urine comprennent :

Test de l'anneau Heller,

échantillon avec 15 - 20% d'acide sulfosalicylique,

test d'ébullition, et autres.

De nombreuses études ont montré qu'aucune des nombreuses méthodes connues pour la détermination qualitative des protéines dans l'urine ne fournit de résultats fiables et reproductibles. Malgré cela, dans la plupart des DLT en Russie, ces méthodes sont largement utilisées comme dépistage - dans l'urine avec une réaction qualitative positive, une détermination quantitative supplémentaire de la protéine est effectuée. Parmi les réactions qualitatives, le test de Geller et le test à l'acide sulfosalicylique sont les plus couramment utilisés, mais le test à l'acide sulfosalicylique est généralement considéré comme le plus approprié pour détecter la protéinurie pathologique. Le test d'ébullition n'est actuellement pratiquement pas utilisé en raison de sa complexité et de sa durée.

Méthodes semi-quantitatives

À méthodes semi-quantitatives rapporter:

Méthode de Brandberg-Roberts-Stolnikov,

détermination des protéines dans l'urine à l'aide de bandelettes de test de diagnostic.

La méthode Brandberg-Roberts-Stolnikov est basée sur le test de l'anneau de Geller, par conséquent, avec cette méthode, les mêmes erreurs sont observées qu'avec le test de Geller.

Actuellement, les bandelettes de diagnostic sont de plus en plus utilisées pour déterminer la protéine dans l'urine. Le colorant bleu de bromophénol dans un tampon citrate est le plus souvent utilisé comme indicateur pour la détermination semi-quantitative des protéines dans l'urine sur une bandelette. La teneur en protéines dans l'urine est jugée par l'intensité de la couleur bleu-vert qui se développe après le contact de la zone de réaction avec l'urine. Le résultat est évalué visuellement ou à l'aide d'analyseurs d'urine. Malgré la grande popularité et les avantages évidents des méthodes de chimie sèche (simplicité, rapidité d'analyse), ces méthodes d'analyse d'urine en général et de dosage des protéines en particulier ne sont pas sans graves lacunes. L'une d'entre elles, conduisant à une distorsion des informations diagnostiques, est la plus grande sensibilité de l'indicateur du bleu de bromophénol à l'albumine par rapport aux autres protéines. A cet égard, les bandelettes de test sont principalement adaptées à la détection de la protéinurie glomérulaire sélective, lorsque la quasi-totalité des protéines urinaires est représentée par l'albumine. Avec la progression des modifications et le passage de la protéinurie glomérulaire sélective à non sélective (apparition de globulines dans les urines), les résultats du dosage des protéines sont sous-estimés par rapport aux vraies valeurs. Ce fait rend impossible l'utilisation de cette méthode de détermination des protéines dans l'urine pour évaluer l'état des reins (filtre glomérulaire) en dynamique. Avec la protéinurie tubulaire, les résultats de la détermination des protéines sont également sous-estimés. Le test des protéines avec des bandelettes n'est pas un indicateur fiable de faibles niveaux de protéinurie (la plupart des bandelettes actuellement disponibles ne sont pas capables de détecter des protéines dans l'urine à des concentrations inférieures à 0,15 g/L). Les résultats négatifs de la détermination des protéines sur les bandelettes n'excluent pas la présence de globulines, d'hémoglobine, d'uromucoïde, de protéine de Bence-Jones et d'autres paraprotéines dans l'urine.

Des flocons de mucus à haute teneur en glycoprotéines (par exemple, dans les processus inflammatoires des voies urinaires, pyurie, bactériurie) peuvent se déposer sur la zone indicatrice de la bandelette et conduire à des résultats faussement positifs. Des résultats faussement positifs peuvent également être associés à des concentrations élevées urée. Un mauvais éclairage et une mauvaise perception des couleurs peuvent entraîner des résultats inexacts.

À cet égard, l'utilisation des bandelettes de diagnostic doit être limitée aux procédures de dépistage et les résultats obtenus avec leur aide ne doivent être considérés qu'à titre indicatif.

Méthodes quantitatives

correct dosage quantitatif des protéines dans l'urine dans certains cas, cela s'avère être une tâche difficile. Les difficultés de sa solution sont déterminées par le nombre suivant de facteurs:

la présence dans l'urine de nombreux composés pouvant interférer avec le déroulement des réactions chimiques;

fluctuations importantes du contenu et de la composition des protéines urinaires dans diverses maladies, ce qui rend difficile le choix d'un matériau d'étalonnage adéquat.

Dans les laboratoires cliniques, les méthodes dites "de routine" de détermination des protéines dans les urines sont majoritairement utilisées, mais elles ne donnent pas toujours des résultats satisfaisants.

Du point de vue d'un analyste travaillant dans un laboratoire, une méthode conçue pour quantifier les protéines dans l'urine doit répondre aux exigences suivantes :

avoir une relation linéaire entre l'absorption du complexe formé lors de la réaction chimique et la teneur en protéines de l'échantillon dans une large gamme de concentrations, ce qui permettra d'éviter des opérations supplémentaires lors de la préparation de l'échantillon pour la recherche ;

doit être simple, ne nécessite pas de haute qualification de l'interprète, être effectué avec un petit nombre d'opérations;

avoir une sensibilité élevée et une fiabilité analytique lors de l'utilisation de petits volumes de matériau d'essai ;

être résistant à divers facteurs (fluctuations de la composition de l'échantillon, présence de médicaments, etc.);

avoir un coût acceptable ;

être facilement adaptable aux analyseurs automatiques ;

le résultat de la détermination ne devrait pas dépendre composition protéique tester un échantillon d'urine.

Aucune des méthodes actuellement connues pour la détermination quantitative des protéines dans l'urine ne peut pleinement prétendre être le "gold standard".

Les méthodes quantitatives de détermination des protéines dans l'urine peuvent être divisées en turbidimétriques et colorimétriques.

Méthodes turbidimétriques

Les méthodes turbidimétriques comprennent :

dosage des protéines avec l'acide sulfosalicylique (SSK),

dosage des protéines acide trichloroacetic(JEU),

détermination des protéines avec du chlorure de benzéthonium.

Les méthodes turbidimétriques sont basées sur une diminution de la solubilité des protéines urinaires due à la formation d'une suspension de particules en suspension sous l'influence d'agents précipitants. La teneur en protéines dans l'échantillon à tester est jugée soit par l'intensité de la diffusion de la lumière, déterminée par le nombre de particules diffusant la lumière (méthode d'analyse néphélométrique), soit par l'affaiblissement du flux lumineux par la suspension résultante (méthode d'analyse turbidimétrique). ).

La quantité de diffusion de la lumière dans les méthodes de précipitation pour détecter les protéines dans l'urine dépend de nombreux facteurs : le taux de mélange des réactifs, la température du mélange réactionnel, la valeur du pH du milieu, la présence de composés étrangers, les méthodes photométriques. Une observation attentive des conditions de réaction contribue à la formation d'une suspension stable avec une granulométrie constante et à l'obtention de résultats relativement reproductibles.

Certains médicaments interfèrent avec les résultats des méthodes turbidimétriques de détermination des protéines dans l'urine, conduisant à des résultats dits "faux positifs" ou "faux négatifs". Ceux-ci comprennent certains antibiotiques (benzylpénicilline, cloxacilline, etc.), des substances radio-opaques contenant de l'iode, des préparations de sulfanilamide.

Les méthodes turbidimétriques sont difficiles à standardiser et conduisent souvent à des résultats erronés, mais malgré cela, elles sont actuellement largement utilisées dans les laboratoires en raison du faible coût et de la disponibilité des réactifs. La méthode la plus largement utilisée en Russie est la détermination des protéines avec de l'acide sulfosalicylique.

Méthodes colorimétriques

Les plus sensibles et les plus précises sont les méthodes colorimétriques pour déterminer les protéines urinaires totales, basées sur des réactions colorées spécifiques des protéines.

Ceux-ci inclus:

réaction biuret,

méthode Lowry,

méthodes basées sur la capacité de divers colorants à former des complexes avec des protéines :

Ponceau S (Ponceau S),

Bleu brillant de Coomassie (Bleu brillant de Coomassie)

rouge de pyrogallol (rouge de pyrogallol).

Du point de vue de l'interprète, dans le travail quotidien du laboratoire avec un grand flux de recherche, la méthode biuret est peu pratique en raison du grand nombre d'opérations. Dans le même temps, la méthode se caractérise par une fiabilité analytique élevée, permet la détermination des protéines dans une large gamme de concentrations et la détection de l'albumine, des globulines et des paraprotéines avec une sensibilité comparable, ce qui fait que la méthode au biuret est considérée comme un référence et est recommandé pour la comparaison d'autres méthodes d'analyse pour la détection de protéines dans l'urine. La méthode biuret pour la détermination des protéines dans l'urine est de préférence réalisée dans les laboratoires desservant les services de néphrologie et utilisée dans les cas où les résultats de la détermination à l'aide d'autres méthodes sont douteux, ainsi que pour déterminer la quantité de perte quotidienne de protéines chez les patients néphrologiques.

La méthode de Lowry, qui a une sensibilité plus élevée que la méthode au biuret, combine la réaction du biuret et la réaction de Folin pour les acides aminés tyrosine et tryptophane dans la molécule de protéine. Malgré sa grande sensibilité, cette méthode ne fournit pas toujours des résultats fiables dans la détermination de la teneur en protéines dans les urines. La raison en est l'interaction non spécifique du réactif de Folin avec les composants non protéiques de l'urine (le plus souvent des acides aminés, de l'acide urique, des glucides). La séparation de ces composants et d'autres composants urinaires par dialyse ou précipitation des protéines permet à cette méthode d'être utilisée avec succès pour la détermination quantitative des protéines dans l'urine. Certains médicaments - salicylates, chlorpromazine, tétracyclines peuvent affecter cette méthode et fausser les résultats de l'étude.

Une sensibilité suffisante, une bonne reproductibilité et la facilité de détermination des protéines par liaison de colorant rendent ces méthodes prometteuses, mais le coût élevé des réactifs entrave leur utilisation plus large dans les laboratoires. À l'heure actuelle, la méthode au rouge de pyrogallol se généralise en Russie.

Lors de l'examen du niveau de protéinurie, il faut garder à l'esprit que différentes méthodes de détermination de la protéinurie ont une sensibilité et une spécificité différentes pour de nombreuses protéines urinaires.

Sur la base de données empiriques, il est recommandé de déterminer la protéine par deux méthodes différentes et de calculer vraie valeur selon l'une des formules ci-dessus : protéinurie = 0,4799 B + 0,5230 L ; protéinurie = 1,5484 B - 0,4825 S ; protéinurie = 0,2167 S + 0,7579 L ; protéinurie = 1,0748 P - 0,0986 B ; protéinurie = 1,0104 P - 0,0289 S ; protéinurie = 0,8959 P + 0,0845 L ; où B est le résultat de la mesure avec Coomassie G-250 ; L est le résultat de la mesure avec le réactif de Lowry ; P est le résultat de la mesure avec le molybdate de pyrogallol ; S est le résultat de la mesure avec l'acide sulfosalicylique.

Compte tenu des fluctuations prononcées du niveau de protéinurie à différents moments de la journée, ainsi que de la dépendance de la concentration de protéines dans l'urine à la diurèse, de sa teneur différente dans les portions individuelles d'urine, il est désormais habituel d'évaluer la sévérité de la protéinurie en pathologie rénale par la perte quotidienne de protéines dans les urines, c'est-à-dire pour déterminer la protéinurie dite quotidienne. Elle est exprimée en g/jour.

S'il est impossible de recueillir l'urine quotidienne, il est recommandé de déterminer la concentration de protéines et de créatinine dans une seule portion d'urine. Étant donné que le taux de libération de créatinine au cours de la journée est assez constant et ne dépend pas des changements du taux de miction, le rapport de la concentration en protéines à la concentration en créatinine est constant. Ce rapport est bien corrélé avec l'excrétion quotidienne de protéines et, par conséquent, peut être utilisé pour évaluer la sévérité de la protéinurie. Normalement, le rapport protéine/créatinine doit être inférieur à 0,2. Les protéines et la créatinine sont mesurées en g/l. Un avantage important de la méthode d'évaluation de la sévérité de la protéinurie par le rapport protéine-créatinine est l'élimination complète des erreurs liées à l'impossibilité ou à la collecte incomplète de l'urine quotidienne.

Littérature:

O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "Aspects cliniques de la détection et de l'évaluation de la protéinurie", Manuel du chef du CDL, n° 1, janvier 2007

A. V. Kozlov, "Protéinurie: méthodes de détection", conférence, Saint-Pétersbourg, SPbMAPO, 2000

V.L. Emmanuel, « Diagnostic de laboratoire maladies rénales. Syndrome urinaire », - Manuel du responsable du CDL, n° 12, décembre 2006.

DANS ET. Pupkova, L.M. Prasolova - Méthodes de détermination des protéines dans l'urine (revue des données de la littérature)

Manuel de clinique méthodes de laboratoire rechercher. Éd. E. A. Kost. Moscou, "Médecine", 197

Toutes les méthodes de détermination des protéines dans l'urine sont basées sur la coagulation des protéines sous l'influence d'agents chimiques ou thermiques. En présence de protéines dans l'urine, une turbidité apparaît, dont le degré dépend de la quantité de protéines.

A) des tests de qualité détermination des protéines dans l'urine - sont obligatoires.

1. Échantillon avec de l'acide nitrique- dans un tube à essai avec 1-2 ml d'une solution d'acide nitrique à 50%, couchez soigneusement une quantité égale d'urine, en essayant de ne pas secouer le liquide. En cas de présence de protéines dans les urines, un anneau blanc apparaît à la frontière des deux liquides, mieux visible sur un fond noir.

2. Échantillon avec acide sulfasalicylique- 4-5 ml d'urine sont versés dans un tube à essai et 8-10 gouttes du réactif sont ajoutées. En présence de protéines dans les urines, selon leur quantité, une turbidité ou une floculation peut survenir.

3. Test express (test de diagnostic sec)- une bande de papier indicateur Albufan est immergée dans l'urine de test afin que les deux zones indicatrices soient humidifiées simultanément (la zone supérieure est pour la détermination du pH, la zone inférieure pour la détermination des protéines). Après 2-3 secondes, la bande est placée sur une plaque de verre blanc. L'évaluation est effectuée 60 secondes après avoir mouillé la bandelette avec de l'urine, à l'aide d'une échelle de couleurs imprimée sur le boîtier avec des bandelettes indicatrices.

B) échantillons quantitatifs- effectué dans les portions d'urine où la protéine a été trouvée au cours de son définition qualitative; le dosage est effectué dans le surnageant après centrifugation

Méthode de Brandberg-Roberts-Stolnikov- 1 à 3 ml de solution d'acide nitrique à 50% sont versés dans un tube à essai et la même quantité d'urine est soigneusement déposée le long de la paroi. Le temps est enregistré sur un chronomètre. Si l'anneau à l'interface des liquides se forme immédiatement ou plus tôt que 2 minutes après la stratification, l'urine doit être diluée avec de l'eau. Après cela, une détermination répétée des protéines dans l'urine diluée est effectuée. La dilution est effectuée jusqu'à l'apparition d'un anneau blanc entre la 2ème et la 3ème minute lorsque l'urine diluée est ajoutée à l'acide nitrique. La quantité de protéines est déterminée en multipliant 0,033 ppm par le degré de dilution.

18. Technique de prélèvement de frottis pour flore, gonocoques, Trichomonas, examen cytologique, KPI.

Technique de frottis de flore: le matériel est prélevé du canal cervical et de l'urètre avec une brosse spéciale sous contrôle visuel. L'échantillon résultant est immédiatement placé sur une lame de verre et trituré.

Technique de prélèvement de frottis pour Trichomonas: d'abord, le matériel est prélevé par grattage sur la muqueuse de l'urètre (après son massage préalable pendant 1 min sur la symphyse pubienne) et le cul-de-sac postérieur du vagin, puis la partie vaginale du col de l'utérus est essuyée avec un écouvillon stérile imbibé de solution saline, le bouchon muqueux est retiré, dans canal cervical avec précaution, une sonde est insérée à une profondeur maximale de 1,0 à 1,5 cm et un grattage est prélevé sur la membrane muqueuse du col de l'utérus.

Technique de frottis pour les gonocoques: le matériel est prélevé dans l'urètre, les glandes de Bartholin et les voies para-urétrales après les avoir essuyés avec un coton-tige imbibé de solution saline, une pince vaginale ou une sonde spéciale. Du rectum, le matériau est prélevé avec une cuillère émoussée. Dans la gonorrhée chronique et torpide, une provocation est effectuée avant l'étude pour augmenter la probabilité d'identifier l'agent pathogène.

Vous ne pouvez pas prendre le matériel avec un coton-tige et pendant les règles.

Technique de prélèvement de frottis pour examen cytologique: un frottis est prélevé à la surface de l'exocol, du vagin et de la vulve avec une spatule, de l'endocol - avec une brosse endo. Le matériau est appliqué fine couche sur verre écrémé spécialement traité et traité composition spéciale pour empêcher les cellules de se dessécher. Les préparations sont colorées selon la méthode de Papanicolaou (le soi-disant frottis de Pap) et microscopiques.

Indice caryopycnotique- pourcentage de cellules de surface à noyau pycnotique par rapport aux cellules à noyau vésiculaire (non pycnotique). CRPD au début de la phase folliculaire cycle menstruel 25-30%, au moment de l'ovulation 60-70%, dans la phase lutéale, il diminue à 25%.

Instruction

Méthodes qualitatives pour la détermination des protéines dans urine: méthode Heller, test à l'acide sulfosalicylique à 20 %, test d'ébullition, etc. Méthodes semi-quantitatives : utilisation de bandelettes diagnostiques pour déterminer les protéines dans urine, méthode de Brandberg-Roberts-Stolnikov. Méthodes quantitatives: turbidimétrique et colorimétrique.

Détermination des protéines au quotidien urineà une concentration de 0,033 g/litre ou plus est une pathologie. En règle générale, dans la portion d'urine du matin, la concentration en protéines ne dépasse pas 0,002 g / l, et dans le quotidien urine la concentration en protéines ne dépasse pas 50 à 150 mg de protéines.

Sources:

dosage des protéines dans l'urine

L'urine est un produit du métabolisme humain. Il se forme lors de la filtration du sang dans les reins, c'est pourquoi la composition de l'urine donne une description claire de l'état du corps humain.

L'urine est une solution complexe de plus de 150 composés. Certaines substances spécifiques, par exemple l'acétone, les acides biliaires, les protéines, le glucose, peuvent n'être présentes que dans certaines maladies.

Pour contrôler la santé humaine, il est tout d'abord nécessaire de déterminer la quantité d'urine. La norme est la formation de 1 à 1,8 litre d'urine par jour. Lorsque plus de 2 litres d'urine sont excrétés, c'est le signe d'une éventuelle violation du travail des reins, Diabète et un certain nombre d'autres maladies. Si moins de 0,5 litre d'urine est formé par jour, il y a un blocage de l'uretère ou de la vessie.

couleur des urines

La couleur de l'urine excrétée dépend de nombreux facteurs, elle peut donc varier, allant du jaune clair à l'orange. La présence de certaines nuances peut être affectée par certains aliments, ainsi que par les médicaments pris par une personne.

Après avoir pris des médicaments, l'urine peut se tacher et acquérir une teinte rougeâtre. Si une personne bouge activement, alors qu'elle libère une grande quantité de sueur, l'urine aura une intense Jaune, ainsi que lors de la prise de fonds tels que la Nitroxoline ou la Biomycine.

Si une personne n'a pas pris d'aliments colorants ni de médicaments, mais que la couleur de son urine est différente de la normale, on peut suspecter la présence d'une maladie dans le corps. Par exemple, dans les maladies du foie, l'urine aura une couleur jaune foncé ou verdâtre.

La présence de sang dans l'urine excrétée indique clairement la présence d'un calcul ou d'un saignement rénal, si une douleur est également observée.

Si la miction est difficile, cela peut indiquer un processus inflammatoire causé par une infection de la vessie. Et voici le sale urine trouble témoigne de maladies graves reins.

Protéine dans l'urine

Il n'y a pas de protéine dans le sang d'une personne ou sa quantité est si petite qu'elle ne peut pas être déterminée à l'aide de tests de laboratoire. Si une protéine est détectée dans l'urine, il est nécessaire d'effectuer des tests répétés, car elle peut être présente lorsqu'une personne se réveille le matin, ainsi qu'après un travail physique intense ou un exercice chez les athlètes.

Déterminer visuellement si des protéines sont présentes ou non dans l'urine est impossible à 100%. On ne peut que deviner quand il y a une grande quantité de flocons blanchâtres dans l'urine.

Si la protéine dans l'urine est détectée à plusieurs reprises, cela indique la présence d'une sorte de maladie rénale. Processus inflammatoires se produisant en eux, provoquent une légère augmentation de la quantité de protéines. Si plus de 2 grammes sont excrétés dans l'urine, c'est signal d'alarme.

La pyélonéphrite est maladie inflammatoire, dans lequel le bassinet du rein, les calices et le parenchyme sont touchés. Dans la plupart des cas, l'inflammation est causée par infection bactérienne. Un rétablissement complet n'est possible qu'avec un diagnostic rapide. Par conséquent, lorsque les symptômes apparaissent, un examen approfondi est nécessaire.